P16蛋白在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

晁远　李美波　宋安辉

【摘要】  目的    分析在宫颈上皮内瘤变、宫颈癌中P16蛋白表达水平与临床意义。方法    收集2019年5月—2020年12月惠州市第六人民医院上皮内瘤变、宫颈癌、宫颈炎患者共142例，根據疾病类型分组，宫颈炎组21例、宫颈癌组63例、宫颈上皮内瘤变组58例，经免疫组化染色，检测所有受试者P16水平，分析P16表达水平与宫颈病变的关系。结果    本组142例受试者中，P16阳性检出97例（68.31%），阴性检出45例（31.69%）；宫颈炎组患者P16阳性检出率0.00%，显著低于CIN组的70.69%、宫颈癌组的88.89%，差异有统计学意义（P<0.05）。CINⅠ级患者P16阳性检出率52.94%，显著低于CINⅡ级组（68.75%）与CINⅢ级组（84.00%），差异有统计学意义（P<0.05）。随着HR-HPV载量等级升高，P16蛋白阳性表达率越高，差异有统计学意义（P<0.05）。HR-HPV载量阳性表达在宫颈炎组中占28.57%，显著低于CINⅠ级组（70.59%）、CIN Ⅱ级组与Ⅲ级组（80.49%）、宫颈癌组（95.24%），差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman分析，在宫颈炎、CIN Ⅰ级组中HR-HPV载量与P16呈正相关（P<0.01）；而在宫颈癌、CINⅡ级与Ⅲ级组中，HR-HPV载量与P16表达并无明显相关性（P>0.05）。结论    CIN病变程度、宫颈癌与病灶组织中P16蛋白表达存在相关性，P16可作为临床诊断重要的生物学标记。

【关键词】 宫颈上皮内瘤变；宫颈癌；P16蛋白；相关性

Expression and clinical significance of P16 protein in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia

Chao Yuan，Li Meibo， Song Anhui. The Sixth People's Hospital of Huizhou City，Huizhou，Guangdong  516000

【Abstract】  Objective    To analyze the expression level and clinical significance of P16 protein in cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer. Methods    This study collected a total of 142 patients with intraepithelial neoplasia， cervical cancer， and cervicitis admitted to our department from May 2019 to December 2020. According to the type of disease， 21 cases were in the cervicitis group， 63 cases in the cervical cancer group， and cervical epithelium. In 58 cases of internal neoplasia，the P16 level of all subjects was detected by immunohistochemical staining， and the relationship between P16 expression level and cervical lesions was analyzed. Results    Among the 142 subjects in this group， 97 cases （68.31%） were detected as positive for P16 and 45 cases （31.69%） were detected as negative. In the cervicitis group， P16 positive was 14.29%， which was significantly lower than CIN70.69. It was lower than 92.06% of cervical cancer， the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive detection rate of P16 in CIN level Ⅰ patients was 52.94%， which was significantly lower than that of CIN level Ⅱ （68.75%） and CIN level Ⅲ （84.00%） patients， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression rate of P16 protein increased with the level of HR-HPV load， and the higher the positive expression， the difference was statistically significant （ P<0.05）. Spearman analysis showed that HR-HPV load was positively correlated with P16 in cervicitis and CIN grade Ⅰ tissues （P<0.01）; while in cervical cancer， CIN grade Ⅱ and grade Ⅲ tissues， HR-HPV load and P16 expression were not There is no obvious correlation （P>0.05）. Conclusion    There is a correlation between the degree of CIN lesions， cervical cancer and the expression of P16 protein in the lesion tissue. P16 can be used as an important biological marker for clinical diagnosis and is worthy of promotion.

【Key Words】  Cervical neoplasia；Cervical cancer；P16protein；Cervicitis

中图分类号：R683.42        文献标识码：A        文章编号：1672-1721（2023）01-0081-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.01.027

宫颈癌约90%因人乳头瘤病毒（HPV）感染引起，长期持续高危HPV感染是造成高级别宫颈上皮内瘤变（CIN）的关键因素，并随着病情进展，最终形成癌变，对患者生命安全构成严重威胁[1] 。P16基因具备负调控细胞周期作用，属于细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制因子；HR-HPV阳性的CIN的进展风险与P16蛋白异常表达存在相关性[2-3]。目前，P16蛋白在宫颈组织病理诊断中得到大力推广，但在不同宫颈病变中的表达仍需要进一步探索分析[4]。本研究选择上皮内瘤变、宫颈癌、宫颈炎患者共142例，检测各种病变组织中P16表达，报道如下。

1    资料与方法

1.1    一般资料    收集2019年5月—2020年12月惠州市第六人民医院CIN、宫颈癌、宫颈炎患者共142例，年龄20～75岁，平均年龄（48.65±11.34）岁，其中CIN 58例、宫颈癌63例、宫颈炎21例。本研究经该院医学伦理委员会批准。

纳入标准：（1）入选者对研究知情，自愿参与；（2）有性生活史；（3）无放化疗、宫颈手术史；（4）患者年龄≥18岁；（5）无服用免疫抑制剂史，未注射过HPV疫苗。

排除标准：（1）妊娠期、哺乳期女性；（2）合并有其他恶性疾病、肿瘤等；（3）心肝肾等脏器功能不全；（4）合并有阴道毛滴虫、外阴道假丝酵母菌等病原体感染；（5）接受全子宫切除术或宫颈环切术。

1.2    方法    设备与试剂：采用福州迈新公司免疫组织化检测试剂、抗P16鼠单克隆抗体试剂；日本OLYMPUS BX53生物显微镜；德国Leica RM2235 轮转石蜡切片机；德国Leica CV5030全自动染色机；全自动密闭式组织脱水机（江苏微凯 WQT-200）；德国莱斯康公司3ML LED光学电子阴道镜。

经阴道镜切取受试者宫颈组织标本，根据试剂盒操作方法进行染色，制作切片，观察。

1.3    结果判断    通过免疫组化SP法检测P16蛋白，阳性判定标准：细胞核、细胞浆出现棕黄色或棕褐色颗粒。在40×10倍光镜下，于病变细胞密集位置选取5个视野观察，每个视野计数50个细胞，P16蛋白阳性强度根据阳性细胞分布、数量等评估，强阳性（+++）阳性细胞比例>50%；中等阳性（++）阳性细胞比例26%～50%，弱阳性（+）阳性细胞比例5%～25%；阴性（-）阳性细胞比例不足5%[5]。

检测HPV病毒载量：样本检测中HPV-DNA含量情况：根据样本相对发光单位、与标准阳性参照临界值比作为反映标准，采用第二代杂交捕获法，可检测出HR-HPV DNA病毒载量共13种，如HPV31，35等，当两者比值<1视为阴性，≥1视为阳性，阳性可将其分为>1 000、100～1 000、及1～100[6]。

1.4    统计学方法    将数据纳入SPSS 21.0统计学软件中进行分析，计数资料以百分比表示，采用χ²检验，计量资料以x±s表示，采用t检验，相关性分析采用Spearman等级相关检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2    結果

2.1    不同宫颈病变患者P16检测结果比较    142例患者中P16阳性检出97例（68.31%），阴性检出45例（31.69%）；宫颈炎组患者P16阳性检出率为0.00%，显著低于CIN组的70.69%、宫颈癌组的88.89%，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2    CIN不同病变程度P16阳性结果比较    CIN Ⅰ级组患者P16阳性检出率52.94%，显著低于CIN Ⅱ级组（68.75%）与CIN Ⅲ级组（84.00%），差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3    不同宫颈病变组织中HR-HPV载量分布与P16表达比较    随着HR-HPV载量等级升高，P16蛋白阳性表达率越高，差异有统计学意义（χ²=41.054，P<0.001）。HR-HPV载量阳性表达在宫颈炎组占28.57%，显著低于CINⅠ级组（70.59%）、CIN Ⅱ级组与Ⅲ级组（80.49%）、宫颈癌组（95.24%），差异有统计学意义（χ²=69.021，P<0.001），见表3。

2.4    不同宫颈病变HR-HPV载量与P16的相关性    在宫颈炎组织中HR-HPV载量与P16表达水平呈正相关性（P<0.05）；CINⅠ级组中HR-HPV载量与P16呈正相关（P<0.05）；而在宫颈癌、CIN Ⅱ级与Ⅲ级组中，HR-HPV载量与P16表达并无明显相关性（P>0.05），见表4。

3    讨论

CIN是临床妇科常见疾病，属于宫颈癌的癌前病变，及时发现癌前病变，早期干预是降低宫颈癌病死率的关键。大量研究证实，宫颈癌、CIN的发生发展，与HR-HPV反复感染存在明显的相关性[7-9]。因此，可作为临床诊断、治疗宫颈癌、CIN的关键性依据。根据美国国立综合癌症网络（NCCN）指南，对于CINⅡ级、Ⅲ级患者采取手术治疗，CIN Ⅰ级患者以随访观察为主。但随着临床研究深入，有学者指出，CINⅡ级与CINⅠ级生物学行为更为相似，且最终癌变率相对较低[10]。因此，低于CIN Ⅱ级患者盲目采取手术切除治疗，可能存在过度治疗风险，对预后造成不利影响。因此，需要寻求一种更为准确、有效、简单的检测方法，提高手术治疗合理性。

在宫颈癌发生中HR-HPV反复感染是其必要条件，但HR-HPV病毒载量与CIN之间关系仍存在争议[11]。本研究显示，随着HR-HPV载量等级升高，P16蛋白阳性表达率越高（P<0.05）。HR-HPV载量阳性表达在宫颈炎组占28.57%，显著低于CINⅠ组、CIN Ⅱ级与Ⅲ级组、宫颈癌组（P<0.05），说明宫颈癌、CIN的发生进展与HR-HPV感染密切相关，并随着病情严重程度增加，HR-HPV感染阳性率升高。此外也有研究报道，受到宿主DNA、病毒型别等因素影响，可能在宫颈癌早期HR-HPV病毒载量出现下降情况[12]。故将HR-HPV单独作为预测指标诊断宫颈癌、CIN病变可能存在一定误差，需要进一步证实。

本研究显示，宫颈炎组患者P16阳性检出率0.00%，显著低于CIN的70.69%、宫颈癌的88.89%（P<0.05）。同时，CINⅠ级患者P16阳性检出率52.94%，显著低于CINⅡ级（68.75%）与CIN Ⅲ级（84.00%）（P<0.05）。说明P16蛋白表达与宫颈组织病变严重程度存在相关性。P16基因可通过抑制CDK4活性，使Rb蛋白磷酸化阻断，进而抑制细胞增殖、分裂；P16基因位于人类染色体9P21，起到负调控细胞周期的作用。本次研究结果显示，在宫颈炎组织、CINⅠ级组中HR-HPV载量与P16呈正相关（P<0.01）；而在宫颈癌、CIN Ⅱ级与Ⅲ级组织中，HR-HPV载量与P16表达并无明显相关性（P>0.05），提示在宫颈病变组织中HR-HPV病毒高载量下，发病早期可引起宫颈部分免疫反应，导致P16表达快速升高。

综上所述，在宫颈癌、CIN病灶组织中P16表达显著升高，其可作为临床诊断重要的生物学标记。

参考文献

[1]    项媛媛，王苗苗，谢艳，等.P16蛋白，HPV L-1壳蛋白在CIN和早期宫颈癌组织中的表达及其筛查价值[J].中国妇幼健康研究，2017，28（7）：778-780.

[2]    马雪梅，魏璇，郭兴巧，等.在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中P16蛋白与HPV感染的关系[J].中国煤炭工业医学杂志，2017，20（7）：769-772.

[3]    李贝，倪潇潇，康妮，等.宫颈病变组织中C-myc基因和P16蛋白表达及其与高危型人乳头瘤病毒感染的相关性研究[J].中国临床医生杂志，2020，48（3）：355-357.

[4]    姚秀华，黄卓敏，王耀楷，等.年轻妇女宫颈鳞状上皮内病变，宫颈癌组织中P16InK4a和Ki-67的表达及其预测作用[J].中国计划生育学杂志，2016，24（2）：111-113.

[5]    王连云，张普，耿筱虹，等.多肿瘤抑制基因1、生存素和基质金属蛋白酶在宫颈病变中的表达及临床意义[J].中国卫生检验杂志，2018，28（18）：2229-2232.

[6]    呂定丰，翁幸鐾，张哲，等.宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中人乳头状瘤病毒感染与P16基因表达的关系[J].中国卫生检验杂志，2016，26（1）：78-80.

[7]    刘小艳，安莹花，王娜，等.肿瘤标志物，抑癌基因P16和HPV-L1蛋白检查在宫颈癌和癌前病变诊断中的意义[J].中国肿瘤临床与康复，2020，27（4）：70-73.

[8]    王海瑞，廖光东，陈汶，等. P16/Ki-67免疫细胞化学双染在宫颈癌筛查中的应用价值[J].中华肿瘤杂志，2017，39（8）：636-640.

[9]    侯丽娟，翟建军. PAR1、PAR4在宫颈癌中的表达及临床意义[J].陕西医学杂志，2017，46（7）：967-969，972.

[10]    陆晓红.宫颈新柏氏技术抹片异常患者阴道镜下活检结合检测p16、p53及Ki-67的临床意义[J].中国妇幼保健，2018，33（23）：5385-5387.

[11]    郁明霞，徐军，席晓薇. P16ink4a、Ki67蛋白联合检测在HPV持续感染的宫颈病变早期诊断中的临床意义[J].临床和实验医学杂志，2017，16（10）：970-973.

[12]    徐英，张锋英，王茜，等.宫颈癌组织P16 INK4A，端粒酶，人宫颈癌癌基因表达及其与临床病理的相关性研究[J].检验医学与临床，2019，16（20）：37-41.

（收稿日期：2022-10-19）