非小细胞肺癌患者肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群及血清炎症因子与免疫检查点抑制剂相关性肺炎的关系

张 涵，祖育娜 ，张 华

(1.新乡医学院,河南 新乡 453003;2.郑州大学附属郑州中心医院呼吸重症医学科,河南 郑州 450002)

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是一种最常见的肺癌,其发生率较高;多数患者初诊时即为晚期,经传统化学治疗、放射治疗后,患者预后并不理想[1-2]。随着免疫学、分子生物学的发展,免疫治疗已成为治疗晚期NSCLC的重要方式[3]。免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)是肿瘤患者进行免疫治疗的重要代表药物,其可通过激活宿主的免疫系统,促使机体免疫细胞识别、杀伤肿瘤细胞,从而达到治疗肿瘤的目的[4-5]。程序性死亡受体-1(programmed cell death 1,PD-1)/程序性死亡受体配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)等ICI已被临床用于靶向治疗NSCLC。研究发现,ICI可有效改善部分肿瘤患者的预后,但其也可使患者发生免疫检查点抑制剂相关性肺炎(immune checkpoint inhibitor-related pneumonitis,ICIP);ICIP在接受ICI治疗的NSCLC患者中较为常见,若不及时治疗,会影响NSCLC患者的预后[6]。目前,与NSCLC患者并发ICIP相关且可评估ICIP严重程度的指标较少。NSCLC患者并发ICIP与机体免疫功能紊乱、炎症反应有关[6-7]。有研究显示,NSCLC患者免疫功能低下,CD3+、CD4+、CD8+等免疫功能指标水平异常[8]。白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-10可辅助预测接受单药ICI治疗的NSCLC患者的预后情况[9]。基于此,本研究观察NSCLC患者肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavage fluid,BALF)中CD3+、CD4+、CD8+及血清IL-6、IL-8、IL-10水平,并探讨其与NSCLC患者并发ICIP严重程度的相关性,旨在为ICIP严重程度的评估提供参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月至2022年4月郑州市中心医院收治的接受免疫治疗的60例NSCLC患者为研究对象。病例纳入标准:(1)符合NSCLC诊断标准[10],且经病理学确诊;(2)不可手术切除的晚期(Ⅲ期/Ⅳ期)原发性NSCLC;(3)患者临床资料齐全;(4)发生ICIP的NSCLC患者符合ICIP的诊断标准[11]。排除标准:(1)免疫治疗前患有肺结核者;(2)免疫治疗前有急、慢性感染者;(3)合并肝癌或其他肿瘤者;(4)合并肾脏等重要器官功能不全者。根据是否发生ICIP将患者分为ICIP组和无ICIP组,每组30例。另根据ICIP严重程度判定标准[11]将ICIP组患者分为1～2级组(n=21)和3～4级组(n=9)。本研究经医院医学伦理委员会审核批准,患者和(或)其家属对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集

通过查阅病历资料收集所有患者的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)病史、吸烟史、肿瘤组织学类型、临床分期、突变状态、治疗方案、ICI类型、美国东部肿瘤协作组行为状态(Eastern Cooperative Oncology Group performance status,ECOG PS)评分等资料。

1.2.2 实验室指标检测

收集所有患者的BALF,使用迈瑞BricyteE6流式细胞仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)测定T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)水平,并计算CD4+/CD8+。采集所有NSCLC患者纳入研究24 h内的外周静脉血4～5 mL,置于乙二胺四乙酸抗凝试管中,3 000 r·min-1离心15 min,分离血清,使用迈瑞BricyteE6流式细胞仪测定血清IL-6、IL-8、IL-10水平,试剂盒购自江西赛基生物技术有限公司,严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 无ICIP组与ICIP组患者一般资料比较

无ICIP组与ICIP组患者的年龄、性别、COPD病史、吸烟史、肿瘤组织学类型、临床分期、突变状态、治疗方案、ICI类型、ECOG PS评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。ICIP组NSCLC临床Ⅳ期患者占比显著高于无ICIP组,差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表1。

表1 无ICIP组与ICIP组患者一般资料比较Tab.1 Comparison of general data of patients in the non-ICIP group and ICIP group

2.2 无ICIP组与ICIP组患者BALF中CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平比较

ICIP组患者BALF中CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于无ICIP组,CD3+、CD8+水平显著高于无ICIP组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结果见表2。

表2 无ICIP组与ICIP组患者BALF中CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平比较Tab.2 Comparison of CD3+,CD4+,CD8+ and CD4+/CD8+ levels in BALF of patients between the non-ICIP group and the ICIP group

2.3 无ICIP组与ICIP组患者血清IL-6、IL-8、IL-10水平比较

ICIP组患者血清IL-6、IL-8、IL-10水平显著高于无ICIP组,差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表3。

表3 无ICIP组与ICIP组患者血清IL-6、IL-8、IL-10水平比较Tab.3 Comparison of IL-6,IL-8,IL-10 levels in serum of patients between the non-ICIP group and the ICIP group

2.4 1～2级组与3～4级组患者BALF中T淋巴细胞亚群及血清炎症因子水平比较

3～4级组患者BALF中CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于1～2级组,BALF中CD3+、CD8+水平及血清IL-6、IL-8、IL-10水平显著高于1～2级组,差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表4。

表4 1～2级组与3～4级组ICIP患者BALF中T淋巴细胞亚群及血清炎症因子水平比较Tab.4 Comparison of T lymphocyte subsets in BALF and serum inflammatory factor levels in ICIP patients between the grade 1-2 group and grade 3-4 group

2.5 BALF中T淋巴细胞亚群及血清炎症因子水平与ICIP严重程度的相关性

Spearman分析结果显示,ICIP严重程度与CD3+、CD4+、CD8+水平无关(r=0.108、-0.133、0.137,P>0.05)。ICIP严重程度与CD4+/CD8+呈负相关(r=-0.567,P<0.05),与血清IL-6、IL-8、IL-10水平呈正相关(r=0.426、0.478、0.390,P<0.05)。

3 讨论

NSCLC是一种致死率较高的呼吸系统肿瘤,PD-1/PD-L1等ICI已被临床用于靶向免疫治疗NSCLC,且取得了一定效果,但部分NSCLC患者可发生ICIP,ICIP可使患者病情恶化,生存期缩短[6,12]。另外,不同严重程度的ICIP患者接受的治疗策略不同[10]。因此,寻找与NSCLC患者并发ICIP相关且可评估ICIP严重程度的指标,及时调整治疗方案,对延长NSCLC患者的生命具有重要意义。

多数肿瘤患者处于免疫抑制状态,表现为淋巴细胞亚群比例失衡,使肿瘤细胞能逃避宿主的免疫监视,且ICI也可破坏机体免疫平衡,导致机体免疫功能紊乱,促进炎症因子释放,引发炎症反应,促使肿瘤患者发生ICIP[6,10-12]。CD3+T淋巴细胞能反映人体免疫功能,T辅助淋巴细胞(CD4+)、T抑制淋巴细胞(CD8+)是CD3+T淋巴细胞的重要亚群,二者均可参与细胞免疫,共同维持机体免疫平衡,且CD4+/CD8+水平可反映机体的免疫水平[13-14]。肺炎的发生发展与免疫系统功能紊乱密切相关,T淋巴细胞亚群是参与机体细胞免疫功能的重要组成部分。研究发现,肺炎患儿CD4+、CD4+/CD8+水平较低,CD8+水平较高,经山莨菪碱与布地奈德联合治疗后,CD4+、CD4+/CD8+水平升高,CD8+水平降低,说明CD4+、CD8+等T淋巴细胞亚群的测定可以作为判定肺炎患儿药物治疗效果的临床指标[15]。另外,张消等[16]研究发现,NSCLC患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较低,经放化疗后,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平升高,推测CD3+、CD4+、CD4+/CD8+可能在NSCLC患者的放化疗过程中起免疫调节作用。本研究结果显示,ICIP组患者BALF中CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于无ICIP组,CD3+、CD8+水平显著高于无ICIP组;提示CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平异常可能与NSCLC患者并发ICIP有关,推测ICI可能会加重NSCLC患者体内的免疫紊乱,从而促使NSCLC患者并发ICIP。另外,本研究结果显示,3～4级组ICIP患者BALF中CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于1～2级组,CD3+、CD8+水平显著高于1～2级组;提示CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+可能是评估NSCLC患者ICIP严重程度的潜在指标。进一步行Spearman相关性分析发现,ICIP严重程度与CD4+/CD8+呈负相关,进一步证实CD4+/CD8+与NSCLC患者ICIP严重程度相关,CD4+/CD8+有望成为判断NSCLC患者ICIP严重程度的有效指标。

IL-6可影响血管生成,调节免疫炎症反应,与肿瘤进展相关[17-18];IL-8是构成呼吸道炎症的主要炎症因子,其可趋化T淋巴细胞在呼吸道黏膜聚集,参与炎症反应[12,19-20];IL-10可参与B淋巴细胞增殖,调节炎症因子释放,影响炎症反应[21-22]。研究发现,IL-6水平低的NSCLC患者总生存期较长,因此认为检测血清IL-6水平可能有助于临床预测PD-1/PD-L1抑制剂在NSCLC中的疗效和评估NSCLC患者的预后[18]。CHAO等[12]研究发现,IL-8是NSCLC患者发生ICIP的危险因素。WANG等[21]研究发现,IL-10可作为接受免疫治疗的NSCLC患者发生免疫相关不良事件的标志物。本研究结果显示,ICIP组患者血清IL-6、IL-8、IL-10水平均显著高于无ICIP组,与LIN等[6]、CHAO等[12]的研究结果相符,提示IL-6、IL-8、IL-10可能参与NSCLC患者并发ICIP过程。进一步研究显示,ICIP越严重,血清IL-6、IL-8、IL-10水平越高,三者与ICIP严重程度呈正相关,提示血清IL-6、IL-8、IL-10水平具有评估ICIP严重程度的潜在价值。

4 结论

NSCLC并发ICIP 患者存在T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及炎症因子IL-6、IL-8、IL-10等水平异常,CD4+/CD8+、IL-6、IL-8、IL-10 等可能是评估ICIP严重程度的辅助指标,有利于指导临床制定治疗方案。但本研究样本量较小,结果可能存在偏倚;另外,本研究未动态分析T淋巴细胞亚群、炎症因子水平与ICIP的关系,这也是本研究的不足之处;后期将扩大样本量,动态分析CD4+/CD8+、IL-6、IL-8、IL-10的阈值与NSCLC并发ICIP的关系。