依托泊苷输液在不同储存条件下的稳定性考察*

钞艳惠,聂会娟,张瑞,荆自伟,康健,刘胜利,孙丙军,杜书章

(1.郑州大学第一附属医院药学部,郑州 450052;2.沈阳药科大学药学院,沈阳 110016)

依托泊苷注射液说明书要求,本品最终稀释浓度不应超过0.25 mgmL-1,且稀释以后应立即使用,静脉滴注时间不少于30 min,而对成品输液的储存条件及稳定存放的时间并未明确提及。我院静脉药物配置中心对高危药品实行集中调配、集中配送制度。从药品调配结束到送至相应病区,约需要2 h。成品输液送至病区后,受病情变化等各种因素的影响,患者有时并不能立即使用。1991年由Wilson首创的EPOCH方案(依托泊苷、长春新碱和多柔比星,96 h持续静脉输注)[1],是美国国家综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)《非霍奇金淋巴瘤临床实践指南》和我国国家卫生健康委员会《弥漫大B细胞淋巴瘤诊断与治疗指南》推荐的具有适应证患者的一线治疗方案。我院血液科已经将EPOCH方案用于治疗具有适应证的患者。3种抗肿瘤药,分别使用3个通路,同时持续泵入24 h,连用4 d,而24 h内依托泊苷输液的稳定性变化如何尚未可知。不同厂家制备工艺不同,可能导致药品稀释后稳定性的差异。目前,笔者尚未见关于依托泊苷注射液[齐鲁制药(海南)有限公司)]高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法含量测定和稀释后稳定性的文献报道。本研究设置成品输液浓度为0.04、0.1、0.2、0.25、0.4 mgmL-1,设置储存条件为室温遮光、室温不遮光和2～8 ℃冷藏,在各时间点观察输液外观变化,并使用pH计、高效液相色谱仪测定pH值和含量,以考察依托泊苷成品输液在不同储存条件下的稳定性,为临床合理用药提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 高效液相色谱仪,Waters ACQUITY Xevo UPLC-MS/MS(美国 Waters 公司);Adventurer 电子分析天平(美国奥豪斯公司,感量:0.01 mg);LDZ5-2 型低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂);PHS-2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂);色谱柱:Silversil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)。

1.2试药 依托泊苷注射液[齐鲁制药(海南)有限公司,规格:5 mL：0.1 g,批号:BB1K1015)];依托泊苷对照品(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:E121713,含量:98%);0.9%氯化钠注射液(上海百特医疗用品有限公司,批号:S2207135);乙腈(天津市康科德科技有限公司,批号:220214,含量≥99.9%);去离子水(杭州娃哈哈集团有限公司)。

2 方法与结果

2.1依托泊苷含量测定方法的建立

2.1.1色谱条件 流动相:乙腈-水(40：60);流速:1.0 mLmin-1;检测波长:230 nm;液相柱:C18反相硅胶色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱温:40 ℃,进样量:50 μL。

2.1.2空白对照溶液的配制 于10 mL量瓶中加入无水乙醇200 μL超声,500 μL聚山梨酯-80涡旋超声,甲醇定容至刻度,摇匀,滤过;精密量取续滤液1 mL,置于50 mL量瓶中,0.9% 氯化钠注射液定容至刻度,摇匀,经孔径0.22 μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为空白对照溶液。

2.1.3依托泊苷对照品溶液的配制 精密称取依托泊苷对照品10.0 mg于10 mL量瓶中,按照“2.1.2节”下步骤操作,得依托泊苷对照品液。

2.1.4依托泊苷供试品溶液的配制 精密量取依托泊苷注射液0.5 mL于10 mL量瓶中,按照“2.1.2节”下步骤操作,得依托泊苷供试品溶液。

2.1.5专属性的考察 按照“2.1.1节”下色谱条件,分别进样空白对照溶液、依托泊苷对照品溶液,记录色谱图。结果如图1所示,依托泊苷峰型良好,空白对照溶液对依托泊苷的含量测定无影响。

1.依托泊苷。

2.1.6线性与范围 制备2、5、10、20、50、100、200 μgmL-1的依托泊苷对照品溶液,进样50 μL,记录峰面积。以峰面积(A)对浓度(C,μgmL-1)进行线性回归(图2),得线性回归方程为A=68 164C+72 315,R2=0.999 9。表明依托泊苷浓度在2～200 μgmL-1范围内线性良好。

图2 依托泊苷标准曲线

2.1.7仪器精密度实验 依托泊苷对照品溶液连续进样50 μL,6次,记录峰面积。计算得RSD=1.19%,表明依托泊苷HPLC含量测定方法的精密度良好。

2.1.8方法准确度实验 平行制备6份依托泊苷对照品溶液,分别进样50 μL,记录峰面积。计算得浓度RSD=0.67%,表明依托泊苷HPLC含量测定方法的准确度良好。

2.1.9回收率考察 平行制备含有依托泊苷对照品溶液80%、100%和120%样品9份,低、中、高浓度各3份,分别进样50 μL,计算回收率。结果见表1,低、中、高浓度的平均回收率在98%～102%,RSD≤2%,符合要求。

表1 依托泊苷含量测定方法的回收率

2.2依托泊苷输液稳定性的考察

2.2.1不同浓度依托泊苷输液的配制 分别取依托泊苷注射液1.0、2.5、5.0、6.25、10.0 mL加入0.9%氯化钠注射液输液袋中,配制成终浓度分别为0.04、0.1、0.2、0.25、0.4 mgmL-1的依托泊苷成品输液,并排出多余空气,轻柔摇匀,避免产生气泡。配制好的依托泊苷输液分别于室温遮光、室温不遮光和2～8 ℃冷藏条件下,在0、1、2、4、6、8、10、12、24 h时,肉眼观察输液外观澄清度及颜色是否有变化,并拍照记录;pH计测定pH值;使用建立的HPLC法测定含量。

2.2.2外观 当浓度≤0.25 mgmL-1时,依托泊苷输液在3种储存条件下,24 h内外观均澄清透明,且无颜色、气体、沉淀、浑浊产生;当浓度为0.4 mgmL-1时,依托泊苷输液在3种储存条件下,均出现不同程度的浑浊和沉淀。室温遮光条件下12 h时开始出现浑浊;室温不遮光条件下,6 h时开始出现浑浊;2～8 ℃冷藏条件下,4 h时开始出现浑浊;离心后观察会更明显。

2.2.3pH值 不同浓度的依托泊苷输液分别于室温遮光、室温不遮光和2～8 ℃冷藏条件下放置,在各时间点时,使用pH计测定pH值。结果见表2—4,各浓度依托泊苷输液在3种储存条件下24 h内pH值稳定。

表2 不同浓度依托泊苷输液在室温遮光条件下的pH值

表3 不同浓度依托泊苷输液在室温不遮光条件下的pH值

表4 不同浓度依托泊苷输液在2～8 ℃冷藏条件下的pH值

2.2.4含量 不同浓度的依托泊苷输液分别于室温遮光、室温不遮光和2～8 ℃冷藏条件下放置,在各时间点时,取样,10 000 r·min-1离心10 min后,用孔径0.22 μm的微孔滤膜过滤,取续滤液按照“2.1.1节”下色谱条件进样,记录峰面积。以0时刻时的含量为100%,计算不同时刻各浓度依托泊苷输液的含量变化,结果见表5—7,当浓度≤0.25 mgmL-1时,依托泊苷输液在3种储存条件下24 h内含量几乎无变化,均在95%～105%。当浓度为0.4 mgmL-1时,依托泊苷输液在室温遮光、室温不遮光和2～8 ℃条件下,24 h时含量分别下降至67.07%、61.00%和38.29%。

表5 不同浓度依托泊苷输液在室温遮光条件含量变化

表6 不同浓度依托泊苷输液在室温不遮光条件下含量变化

表7 不同浓度依托泊苷输液在2～8 ℃冷藏条件下含量的变化

3 讨论

3.1方法学 本研究建立了依托泊苷注射液的含量测定方法。研究过程中的药物浓度经稀释均可在HPLC法的线性范围浓度内,色谱条件的选择主要是根据《中华人民共和国药典》2020版以及阅读文献并经后期优化而来,即流动相:乙腈-水(40：60);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:230 nm;液相柱:C18反相硅胶色谱柱(4.6 mm×250 mm),柱温:40 ℃,进样量:50 μL。在该条件下,依托泊苷可与溶剂峰分离,峰型良好,保留时间为5.1 min,HPLC含量测定方法的专属性、准确度、精密度、加样回收率均符合要求,在2～200 μgmL-1范围内线性良好。

3.2配伍稳定性 依托泊苷注射液说明书规定成品输液浓度不得超过0.25 mgmL-1,而原研说明书中规定的配伍浓度为0.2～0.4 mgmL-1,若超过0.4 mgmL-1将会产生析出物沉淀。结合临床常用浓度,本研究设置了0.04、0.1、0.2、0.25和0.4 mgmL-1共5个浓度。考虑到临床使用输液时通常在室温条件下进行,且经常询问输液是否需要遮光,本研究设置了室温遮光和室温不遮光储存条件。一般情况下,温度越低,药物降解速度越慢,成品输液稳定性越好。为了研究温度对依托泊苷输液稳定性的影响,本研究设置了2～8 ℃冷藏的储存条件。

有研究[2-6]考察了依托泊苷与其他药物配伍在同一输液袋中的稳定性,结果表明,依托泊苷浓度不超过0.25 mg·mL-1的混合输液室温下24 h内含量稳定。但是使用的均是江苏恒瑞医药股份有限公司提供的依托泊苷注射液。KLASEN等[7]的研究使用的是以色列梯瓦制药工业有限公司提供的依托泊苷注射液,结果表明,当稀释溶剂为0.9%氯化钠注射液,室温下0.1和0.4 mg·mL-1的依托泊苷输液24 h内含量稳定,0.6 mg·mL-1的依托泊苷输液8 h内含量稳定。本研究使用的是依托泊苷注射液[齐鲁制药(海南有限公司)],结果表明,室温下0.4 mg·mL-1的依托泊苷输液24 h时含量降至约60%。出现这种结果可能是因为不同厂家的制剂,在制备过程中,添加的辅料、采用工艺不同。本研究的局限在于仅考察了依托泊苷输液的化学稳定性,配制的输液24 h内的微生物稳定性如何还有待考察。

3.3研究价值 当依托泊苷输液的配伍浓度不超过0.25 mgmL-1时,室温遮光、室温不遮光和2～8 ℃冷藏条件下,24 h内外观、pH值和含量均稳定,可以不局限于说明书规定的“稀释后立即使用”。虽然静脉用药调配中心调配的输液属于微生物污染低风险,但是有文献报道[8-9],配制好的输液瓶口无论是否经过处理,暴露于病区治疗室环境后,均会有不同程度的细菌污染,因此,建议不能立即使用的患者可以将配制好的输液暂时存放在静脉药物配置中心的洁净环境中,从而减少输液污染的风险。对于使用EPOCH方案化疗的患者,建议每天更换一次输液,以保证输液的质量。当依托泊苷输液的配伍浓度超过0.25 mgmL-1时,依托泊苷的稳定性不太好,容易析出沉淀,因此非必要不建议依托泊苷的配伍浓度超过0.25 mgmL-1。若使用时浓度必须超过0.25 mgmL-1,如某些需要限液的患者,也应注意最大配伍浓度不要超过0.4 mgmL-1,且输液配制后应尽快使用。