海洋来源产蛋白酶Bacillus zhangzhouensis sp.在速酿鱼露中的应用

白妞妞 付志英 陈婵

摘要：文章从海洋来源的8株芽孢杆菌中筛选到了1株碱性蛋白酶活力最好的漳州芽孢杆菌，将其应用到鱼露发酵过程中，利用响应面法优化最佳发酵条件为接种量4.15%、pH 9.13、温度36.3 ℃。在此最佳发酵条件下，分别将鱼露发酵15 h、3 d、7 d、15 d和30 d，结果表明，在发酵第7天时，鱼露的氨基酸态氮和总氮含量较高，对鱼露调味品市场的开发具有重大意义。

关键词：芽孢杆菌；蛋白酶；鱼露；调味品；响应面法

中图分类号：TS264.2      文献标志码：A     文章编号：1000-9973（2023）08-0090-08

Application of Protease-Producing Bacillus zhangzhouensis sp.

from the Sea in Fast-Brewed Fish Sauce

BAI Niu-niu， FU Zhi-ying*， CHEN Chan

（Fujian Vocational College of Agriculture， Fuzhou 350119， China）

Abstract： In this paper， a strain of Bacillus zhangzhouensis sp. with the best alkaline protease activity is screened among 8 strains of Bacillus from the sea， and it is applied to the fermentation process of fish sauce. The best fermentation conditions optimized by response surface methodology are inoculation amount of 4.15%， pH of 9.13 and temperature of 36.3 ℃. Under the best fermentation conditions， fish sauce is fermented for 15 h， 3 d， 7 d， 15 d and 30 d respectively. The results show that on the 7th day of fermentation， the content of amino acid nitrogen and total nitrogen of fish sauce is higher， which is of great significance for the development of fish sauce seasoning market.

Key words： Bacillus; protease; fish sauce; seasoning; response surface methodology

收稿日期：2023-02-04

基金项目：双高计划（师资队伍）2022年校级职业教育教学研究项目（2022G2006）

作者简介：白妞妞（1994－），女，硕士，研究方向：海洋生物资源开发。

通信作者：付志英（1979-），女，副教授，硕士，研究方向：食品微生物及食品发酵技术。

海洋覆盖近70%的地球表面，并拥有巨大的生态、化学和生物多样性。大海恶劣的化学和物理条件，如温度和pH的变化、高压和深层海水、基底有限等孕育了大量具有独特酶学性质的海洋微生物[1]。微生物在工业规模生产细胞内和细胞外酶的技术中扮演着重要的角色，海洋来源的微生物具有产酶丰富、生长周期短、不受季节和地理位置影响等特点，且所产蛋白酶大多为胞外蛋白酶[2]。然而，海洋生物的栖息地仍未得到充分开发。据估计，尽管经过了250年的分类，已经有超过120万种物种被编入中央數据库，但仍有91%的海洋物种有待描述[3]。可见，大力开发海洋微生物资源对进一步掌握蛋白酶在食品行业中的应用价值具有重大意义。

蛋白酶根据其来源可分为动物蛋白酶、植物蛋白酶和微生物蛋白酶[4]。其中微生物蛋白酶约占世界酶总销售额的60%，是工业酶中最重要的一类，根据其种类，蛋白酶可分为酸性、中性和碱性蛋白酶，芽孢杆菌所产蛋白酶具有较高的热稳定性和pH稳定性，甲基营养芽孢杆菌（KE2）被证明通过蛋白酶的作用能有效地提高食品的营养价值和感官特性，异源卤代芽孢杆菌可作为风味增强剂提高鱼露中的天冬氨酸、谷氨酸等鲜味来源物质的含量，而多黏芽孢杆菌D05-1的胺降解活性可作为鱼露发酵剂有效地减少鱼露中生物胺的积累，增强鱼露的风味[5-7]。近年来，研究人员将芽孢杆菌作为一种有益菌用于提高食品的营养和食用价值[8-9]。

据古书记载，鱼露是一种调味品，营养价值高，味道鲜美[10]。传统鱼露发酵是以低值鱼或鱼的下脚料为原料，加入30%～40%的海盐，在太阳下暴晒发酵1～2年后得到的鱼酱油产品，该发酵过程中微生物扮演着重要的角色，从而形成了鱼露产品的独特特性[11-12]。据报道，嗜盐古菌在鱼露发酵过程中起主导作用，对鱼露的风味有显著的贡献作用[13]。鱼体本身含有的内源性微生物将鱼肉蛋白水解为游离氨基酸、小分子肽等风味物质，赋予鱼露独特的鲜香味。其中，盐菌属、盐单胞菌属、四联球菌属和念珠菌属是鱼露风味形成的主要菌属[14-17]。然而，这些游离氨基酸在相应的氨基酸脱羧酶作用下被分解为各种生物胺，不同程度地影响了鱼露的风味，组胺、酪胺、尸胺和腐胺是鱼露最常见的4种生物胺[18]。近年来，科研人员将分离得到的EC-1118酵母菌、植物乳杆菌和清酒曲等应用于鱼露发酵过程中，有效缩短了鱼露的发酵周期，改善了鱼露的风味[19-21]。但高含量生物胺的存在始终没有得到有效的解决，严重限制了消费者对它的接受性[22-25]。

本研究从海洋来源的8株芽孢杆菌中筛选到了1株产碱性蛋白酶活力最好的漳州芽孢杆菌1A08372作为发酵鱼露的发酵剂，对其发酵条件进行了探讨，最后开发了一种快速发酵鱼露的新方法，研究成果对推动海洋资源深加工和鱼露产品高值化具有重要意义。

1 材料与设备

1.1 菌种

8株芽孢杆菌其编号分别为1A08371、1A08372、1A08158、1A00016、1A08094、1A05132、1A14813和1A08647，均来源于自然资源部第三海洋研究所海洋微生物菌种保藏管理中心。

1.2 实验试剂及相关溶液的配制

氢氧化钠、醋酸、浓盐酸（36%～37%）、无水碳酸钠、三氯乙酸、醋酸钠、十二水磷酸二氢钠、十二水磷酸氢二钠、硼酸钠、干酪素、福林酚、L-酪氨酸、生理盐水：均购自Aladdin试剂公司；溶菌酶：购自生工生物工程（上海）股份有限公司。

0.1 mol/L氢氧化钠、6 mol/L醋酸溶液、0.1 mol/L 盐酸溶液、0.2 mol/L磷酸氢二钠、0.2 mol/L磷酸二氢钠、0.4 mol/L碳酸钠溶液、0.4 mol/L三氯乙酸、醋酸-醋酸钠缓冲液（pH 3，适用于酸性蛋白酶）、磷酸缓冲液（pH 7.5，适用于中性蛋白酶）、硼酸缓冲液（pH 10.5，适用于碱性蛋白酶）、0.2 mol/L PBS缓冲液（pH 6.8）：配制方法参照2015年版《中华人民共和国药典》。

2%酪蛋白溶液的配制：准确称取干酪素粉末2 g于烧杯中，并加入0.1 mol/L氢氧化钠10 mL，搅拌使其溶解，并加入相应的缓冲液75 mL，在沸水中加热搅拌使溶解，再转移至100 mL的容量瓶中定容至刻度，当日配用或置于冰箱中保存，有效期为3 d。

福林酚稀释液：使用时将福林酚试剂与超纯水按1∶2混匀。

1.3 培养基

主要培养基见表1。

1.4 仪器与设备

仪器与设备见表2。

2 实验方法

2.1 8株芽孢杆菌生长曲线的测定

将8株芽孢杆菌置于温度为37 ℃的恒温培养箱中培养48 h（1A08371、1A08372、1A08158、1A00016用FS1培养，1A08094、1A05132、1A14813用FS2培养，1A08647用FS3培养），然后于温度37 ℃、摇床转速150 r/min的条件下进行种子液培养24 h。再接入1%的种子液到100 mL的发酵培养基中，于温度37 ℃、转速150 r/min的振荡培养箱中进行不间断发酵培养。将培养液每隔3 h上从发酵培养液中吸取1 mL（在超净工作台上操作），在紫外分光光度计下检测OD600 nm值，最后将每株芽孢杆菌在不同时间段测得的吸光度值绘制成生长曲线。

2.2 产蛋白酶芽孢杆菌的初筛

分别配制400 mL的基础培养基（1A08371、1A08372、1A08158、1A00016用FS1培养，1A08094、1A05132、1A14813用FS2培养，1A08647用FS3培养）和100 mL FS4培养基，在温度为121 ℃的条件下灭菌20 min，灭菌后立即将FS4和基础培养基取出，待降至常温将两者混合倒平板，制成产蛋白酶平板培养基。在超净工作台上用接种环将8株芽孢杆菌点种于所制得的产蛋白酶平板培养基上，倒置于温度37 ℃的恒溫培养箱中培养72 h。观察产蛋白酶平板培养基上是否有透明水解圈出现，测量透明水解圈直径和菌落直径的大小，并计算两者的比值（透明水解圈直径/菌落直径=H/C），初步判定8株芽孢杆菌是否产蛋白酶以及产蛋白酶活力的大小。

2.3 胞内酶和胞外酶的鉴定

将初筛后的芽孢杆菌发酵液于温度4 ℃、转速9 000 r/min的条件下离心5 min，得到细胞外上清液和沉淀，向沉淀中加入0.2 mol/L 的PBS缓冲液（pH 6.8）和溶菌酶各2 mL，混匀，置于37 ℃恒温水浴锅中保温1 h，用超声波细胞粉碎机破碎细胞，60 W，总时长10 min，间隔10 s，持续5 s，然后离心，得到细胞内上清液。用直径为6 mm的打孔器在每个产蛋白酶的平板培养基上打3个孔，其中上2孔注入30 μL细胞外上清液，下1孔注入30 μL细胞内上清液，置于温度为28 ℃的恒温培养箱中培养24 h，观察孔边缘是否有透明圈出现。

2.4 产蛋白酶芽孢杆菌的复筛

2.4.1 L-酪氨酸标准曲线的绘制

准确称取干燥的L-酪氨酸粉末100 mg于烧杯中，加入0.1 mol/L的盐酸60 mL，完全溶解后转移至1 000 mL的容量瓶中，用0.1 mol/L 盐酸定容至刻度，即得浓度约为100 μg/mL的酪氨酸储备液。

精密吸取上述储备液，分别配制10，20，30，40，50，60，70 μg/mL的酪氨酸溶液，并分别从上述溶液中吸取2 mL加入一系列试管中，各加入0.4 mol的碳酸钠5 mL和福林酚稀释液1 mL，振荡混匀，置于40 ℃的恒温水浴锅中显色20 min，用紫外分光光度计在680 nm处测其吸光度（OD值），并计算K值，以OD值为纵坐标、L-酪氨酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.4.2 蛋白酶活力大小的测定

将初筛后得到的产胞外蛋白酶芽孢杆菌发酵液于温度4 ℃、转速14 000 r/min的条件下离心5 min，得到发酵上清液，并用灭菌后的生理盐水稀释一定倍数，作为待测粗酶液。将用不同pH值缓冲液（醋酸-醋酸钠缓冲液pH 3，适用于酸性蛋白酶、磷酸缓冲液pH 7.5，适用于中性蛋白酶和硼酸缓冲液pH 10.5，适用于碱性蛋白酶）定容得到的2% 酪蛋白溶液置于温度为40 ℃的恒温水浴锅中预热5 min，待测粗酶液预热1 min，分别向样品管和空白管中加入待测粗酶液1 mL，然后在样品管中先加入酪蛋白1 mL使其反应，准确反应10 min后，立即加入0.4 mol的三氯乙酸2 mL终止反应。而在空白管中先加入0.4 mol的三氯乙酸2 mL反应10 min促使酶失活，再加入酪蛋白1 mL作为对照，剧烈振荡使其充分混合，于40 ℃水浴锅中保温20 min，然后于温度4 ℃、转速14 000 r/min的条件下离心5 min，得到上清液。分别从样品管和空白管中吸取上清液1 mL，加入0.4 mol 的碳酸钠5 mL、福林酚稀释液1 mL，于温度40 ℃的恒温水浴锅中保温显色20 min，用紫外分光光度计在680 nm处测其吸光度，每个样品和空白对照做3个平行，取平均值。由上述条件规定，1 mL酶液每分钟水解酪蛋白产生l μg酪氨酸为1个酶活力单位（U）。

蛋白酶活力（U/mL）=（A样－A空）×（4/10）×K×N。

式中：A样为样品组的吸光值；A空为空白组的吸光值；K为吸光常数；N为酶液稀释倍数；4为反应液总体积，mL；10为反应总时间，min。

2.5 单因素优化1A08372在速酿鱼露调味品中实验设计

取巴浪鱼加入10%的海盐，1∶1的超纯水，调节pH，作为制备鱼露的原料，添加从海洋中筛选到的1A08372，于摇床转速150 r/min条件下发酵培养15 h，制成速酿鱼露，利用单因素实验分别探讨初始pH、发酵温度和1A08372接种量对速酿鱼露中氨基酸态氮含量的影响。

2.5.1 初始pH对速酿鱼露中氨基酸态氮含量的影响

分别向初始pH为6，7，8，9，10的鱼露原料中接入6%的1A08372种子液，于发酵温度30 ℃、摇床转速150 r/min的条件下发酵15 h，制成速酿鱼露，每个条件做3组平行，测定发酵后速酿鱼露中的氨基酸态氮含量。

2.5.2 温度对速酿鱼露中氨基酸态氮含量的影响

向初始pH为9的鱼露原料中接入6%的1A08372种子液，分别在发酵温度20，25，30，35，40 ℃、摇床转速150 r/min的条件下发酵15 h，制成速酿鱼露，每个条件做3组平行，测定发酵后速酿鱼露中的氨基酸态氮含量。

2.5.3 1A08372接种量对速酿鱼露中氨基酸态氮含量的影响

向初始pH为9的鱼露培养基中分别接入2%、4%、6%、8%、10%的1A08372种子液，在发酵温度35 ℃、摇床转速150 r/min的条件下发酵15 h，每个条件做3组平行，测定发酵后速酿鱼露中的氨基酸态氮含量。

2.6 响应面法优化1A08372在速酿鱼露调味品中实验设计

由单因素实验结果可知，当温度为35 ℃、1A08372接种量为4%、初始pH为9时，速酿鱼露中的氨基酸态氮含量较高。根据中心组合实验设计原理，设计三因素三水平响应面实验，将发酵温度、1A08372接种量和初始pH 3个因素分别用A、B、C表示，且每个因素的低、中、高水平分别用－1，0，1编码表示，以氨基酸态氮含量为响应值（Y），通过响应面分析对发酵条件进行优化。每次试验设3个平行，取平均值。数据采用Design Expert和Microsoft Office Excel 2003 软件进行统计分析。其中P＜0.01表示差异极显著，P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。具体设计方案见表3。

为了验证该模型数据的精确性和可靠性，将响应面分析后得到的最优条件以氨基酸态氮含量为指标进行3次验证实验，与Design Expert软件数据分析后得到的预测值进行对比。

2.7 速酿鱼露调味品发酵时间的确定

取巴浪鱼加入10%的海盐，1∶1的超纯水，调节pH为9.13，分别制备空白对照组（不加1A08372）和外加1A08372种子液4.15%的速酿鱼露样品组，于温度36.3 ℃、搖床转速150 r/min的条件下分别培养15 h、3 d、7 d、15 d和30 d，每组样品做3组平行，分别测定样品中氨基酸态氮和总氮含量。其中，氨基酸态氮的测定参照GB 5009.235－2016《食品安全国家标准 食品中氨基酸态氮的测定》，总氮含量的测定参照GB 5009.5－2016《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》。

3 结果和讨论

3.1 8株芽孢杆菌生长曲线测定结果

由图1可知，细菌的生长曲线从本质上反映了细菌的生长性能，测定了8株海洋来源的芽孢杆菌发酵液在600 nm处的吸光度，绘制出对应的芽孢杆菌生长曲线，结果显示，菌株1A08371、1A08158、1A08372、1A00016的生长性能较好。

3.2 产蛋白酶芽孢杆菌的初筛结果

具有产蛋白酶活力的芽孢杆菌在产蛋白酶平板培养基上能够产生透明圈，且透明圈的大小初步反映了产蛋白酶能力的强弱。由图2可知，8株芽孢杆菌在产蛋白酶培养基上都能够产生透明圈，其中菌株1A08372、1A08371、1A00016、1A08158、1A14813的H/C值大于2（见表4），表明这5株菌有较强的产蛋白酶能力，对其进行胞内酶和胞外酶的鉴定，并进行复筛。

3.3 胞内酶和胞外酶鉴定结果

由图3可知，这5株芽孢杆菌的细胞外上清液能产生透明圈，而细胞内上清液不能产生透明圈，表明这5株芽孢杆菌所产的蛋白酶均为胞外蛋白酶。

3.4 产蛋白酶芽孢杆菌的复筛结果

3.4.1 酪氨酸标准曲线的绘制

由图4可知，L-酪氨酸的标准曲线为y=0.010 2x+0.008 7，其中R2=0.999 6，计算出K值=97.186 3，用于蛋白酶活力的测定。

3.4.2 蛋白酶活力的测定结果

由图5可知，芽孢杆菌1A08372产碱性蛋白酶的活力最好，为（179.14±3.55） U/mL，选取该菌株，并以氨基酸态氮含量为指标做下一步速酿鱼露调味品条件的优化。

3.5 1A08372在速酿鱼露调味品中单因素优化实验结果

3.5.1 初始pH对速酿鱼露中氨基酸态氮含量的影响

由图6可知，随着初始pH的升高，速酿鱼露中的氨基酸态氮含量呈先上升后下降的趋势，当初始pH为9时，氨基酸态氮含量达到最高，为（0.35±0.003） g/dL，这可能是因为pH为9时接近1A08372的最佳产酶条件，此时速酿鱼露原料中的蛋白酶含量最多，迅速将鱼露中的鱼肉蛋白酶分解，从而使氨基酸态氮含量上升，当初始pH超过9时，超出了1A08372的碱性耐受范围，此时速酿鱼露中的蛋白酶含量较少，导致氨基酸态氮含量下降。因此，适宜初始pH能促进微生物发酵，增加速酿鱼露中的氨基酸态氮含量。

3.5.2 温度对速酿鱼露中氨基酸态氮含量的影响

由图7可知，当初始pH为9时，温度的变化能引起速酿鱼露中氨基酸态氮含量的变化，速酿鱼露中的氨基酸态氮含量在温度为20～25 ℃范围中变化不大，而在30 ℃后迅速上升，这可能是由于1A08372在30 ℃时产酶活力最好，速酿鱼露中的氨基酸态氮含量迅速上升，在35 ℃时酶的积累量最多，氨基酸态氮含量也达到最大，为（0.4±0.003） g/dL，当温度继续上升时，1A08372所产的部分蛋白酶失活，从而导致速酿鱼露中氨基酸态氮含量有所下降。因此，适宜的温度能控制1A08372所产的碱性蛋白酶活力，使得速酿鱼露中的氨基酸态氮含量达到最大。

3.5.3 1A08372接种量对速酿鱼露中氨基酸态氮含量的影响

由图8可知，当温度为35 ℃、pH为9时，1A08372的接种量对速酿鱼露中氨基酸态氮含量有一定的影响，且不同接种量的1A08372能不同程度地影响速酿鱼露中的氨基酸态氮含量，随着1A08372接种量的增加，氨基酸态氮含量先升高后下降，当1A08372接种量为4%时，氨基酸态氮含量最高，为（0.53±0.006） g/dL，1A08372接种量过高，消耗了速酿鱼露中的营养物质，氨基酸态氮含量下降，表明适宜接种量的1A08372能增加速酿鱼露中的氨基酸态氮含量。

3.6 1A08372在速酿鱼露调味品中的响应面优化实验结果

由于在第10组中发现最高含量的氨基酸态氮（见表5），因此将其水平确定为中心点，通过RSM确定了这3个影响因素的最优条件。下面的回归方程显示了鱼露培养基条件与氨基酸态氮含量的关系：Y=0.674 8+0.056 5A+0.005 1B+0.013 8C+0.003 9AB+0.010 0AC+0.005 1BC－0.112 6A2－0.045 8B2－0.064 8C2。

其中响应值（Y）表示氨基酸态氮含量（g/dL），A、B和C分别表示温度、接种量和pH。

由表6可知，模型极显著（P<0.01），失拟项（P=0.052 3>0.05）不显著，说明回归方程拟合较好，模型稳定。由F（A）=116.37、F（B）=0.963 0、F（C）=6.94可知A、B、C对氨基酸态氮含量影响的大小顺序为A>C>B，即温度>pH>接种量。其中A的P<0.01，表明发酵温度对氨基酸态氮含量有极显著的影响，而C的P（0.033 7）<0.05，说明pH对氨基酸态氮含量有显著影响。模型的确定系数R2=0.986 9，表示该模型能较好地预测氨基酸态氮含量，调整确定系数RAdj2=0.970 0，说明该模型误差小、准确度高，可以使用该模型来分析响应值的变化情况。

由图9可知，最优条件为A=36.3 ℃、B=4.15%、C=9.13，对应最佳发酵条件为温度36.3 ℃、1A08372接种量4.15%、pH 9.13，在此条件下，预测出的氨基酸态氮含量达到最大，为（0.68±0.002 7） g/dL。经过3次验证实验得到氨基酸态氮含量分别为（0.67±0.033），（0.68±0.004 2），（0.68±0.018） g/dL，与预测的实验结果相差不大，说明该模型具有一定的准确性和可靠性，可用作氨基酸态氮含量的预测。

3.7 速酿鱼露调味品发酵时间的确定

3.7.1 速酿鱼露中氨基酸态氮含量

由图10可知，随着发酵时间的延长，外加1A08372速酿鱼露和空白对照组鱼露中的氨基酸态氮含量总体变化趋势一致，均呈先上升后下降的趋势，且与空白对照组相比，1A08372组能够显著增加速酿鱼露发酵过程中的氨基酸态氮含量。其中，1A08372发酵3 d时（0.96±0.02） g/dL和7 d时（0.91±0.03） g/dL速酿鱼露调味品中的氨基酸态氮含量较高。

3.7.2 速酿鱼露调味品中总氮含量

由图11可知，1A08372速酿鱼露在发酵15 h、3 d、7 d、15 d和30 d时的总氮含量分别为（1.24±0.01），（1.37±0.02），（1.38±0.02），（0.94±0.05），（0.68±0.01） g/dL。与空白对照组相比，1A08372组能够显著增加速酿鱼露发酵过程中的总氮含量。其中，1A08372发酵7 d时速酿鱼露中的总氮含量较高，且达到了一级鱼露的标准。

4 结论

本文用透明圈法对8株海洋来源芽孢杆菌进行了筛选，其中1A08371、1A08372、1A08158、1A00016和1A14813这5株芽孢杆菌的H/C值大于2，表明这5株芽孢杆菌具有较好的产蛋白酶活力，对其进行胞内酶和胞外酶的鉴定并利用福林酚法进行复筛，结果显示，5株芽孢杆菌的细胞内上清液不能产透明圈而细胞外上清液能够产透明圈，表明这5株芽孢杆菌所产蛋白酶均为胞外蛋白酶，且胞外蛋白酶活力最大的为芽孢杆菌1A08372。为了将1A08372较好地应用到速酿鱼露调味品的制备中，利用响应面法研究了1A08372在速酿鱼露调味品制备原料中的最佳发酵条件：种子液接种量4.15%、pH 9.13、温度36.3 ℃。在此发酵条件下，鱼露调味品原料中的氨基酸态氮含量达到最大。最后，分别制备了1A08372快速发酵15 h、3 d、7 d、15 d和30 d的速酿鱼露调味品，对其氨基酸态氮、总氮含量进行了测定和分析，初步得出发酵7 d时速酿鱼露调味品的氨基酸态氮和总氮含量较高，且风味较好，该研究结果为海洋微生物资源在中国调味品市场的利用提供了重要参考。

5 展望

通过采用1A08372作为发酵劑，仅发酵7 d即得到了低盐快速发酵鱼露调味品，缩短了发酵周期，但经此方法快速发酵的鱼露风味远不如利用传统工艺发酵2年以及其他地方传统鱼露调味品的风味[26]。近年来，许多研究者通过在鱼露调味品中添加曲霉、酵母或植物提取物改善鱼露的风味，有了很大突破[27-31]。因此，推测采用1A08372作为低盐鱼露发酵剂的同时添加曲霉、酵母或植物提取物，并对其添加比例进行研究能够获得风味更佳的鱼露调味品。此外，有研究表明，谷氨酰胺转氨酶（TG酶）能够通过控制氨基酸的转化途径从而抑制生物胺的形成[32]，且许多研究者采用多种发酵剂混合发酵鱼露得到了较好的效果[33-35]，因此，筛选能够产TG酶的海洋微生物与1A08372作为混合发酵剂，可有效提高生物胺的控制效果，进一步改善鱼露调味品的风味和品质。

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