子痫前期患者血清中aD1和aANXA5效价与炎症和凝血指标的相关性*

刘 洪,魏 敏,王 焱,吴 颖,罗彩霞,单燕丽,卡迪丽亚,江雅丽,王晓玉,路宗林

1.徐州医科大学研究生院,江苏徐州 221000;2.徐州医科大学附属医院妇产科,江苏徐州 221000;3.伊犁哈萨克自治州友谊医院产科,新疆伊犁 835000;4.伊犁哈萨克自治州临床医学研究院,新疆伊犁 835000

子痫前期是妊娠期特有的疾病,其发病原因及机制尚不明确,但可导致全身重要脏器的损伤,严重危及母儿健康和生命。抗磷脂综合征(APS)是一种自身免疫性血栓性疾病,其特征为复发性血管血栓形成和(或)妊娠并发症[1]。抗磷脂抗体的存在是APS的标志性特征,也是病理妊娠诊断的重要指标[2]。研究显示抗磷脂抗体与子痫前期关系密切,APS也被公认为导致子痫前期的高危因素[3]。目前研究集中于传统型抗磷脂抗体如抗心磷脂抗体、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(aβ2GPⅠ)及狼疮抗凝物,而对于非传统型抗磷脂抗体与子痫前期关系的研究相对较少。同时在临床上会遇到临床表现符合APS但传统型抗磷脂抗体持续阴性的患者,被称之为血清阴性抗磷脂综合征[4],以及由抗磷脂抗体引发的一系列特异性的临床症状的病态妊娠称为产科抗磷脂综合征。非传统型抗磷脂抗体检出率较高,且按APS治疗后的妊娠结局多得到明显改善。作为非传统型抗磷脂抗体的代表—抗β2-糖蛋1-D1抗体(aD1)和抗膜联蛋白A5抗体(aANXA5)在既往相关研究中表明与晚期病态妊娠、血管血栓之间有显著相关性,但是与子痫前期的关系仍在探讨中[5-6]。除血栓形成外,由抗磷脂抗体介导的免疫及炎症反应也是病理妊娠发病的主要机制[7]。本研究旨在探讨子痫前期患者血清中非传统型抗磷脂抗体aD1和aANXA5效价与炎症及凝血指标相关性,进一步探讨其与子痫前期病情严重程度的相关性及其临床意义,现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2021年1月至2022年1月于徐州医科大学附属医院(简称“本院”)妇产科收治的子痫前期重度患者50例(子痫前期重度组)和子痫前期非重度患者50例(子痫前期非重度组)共100例子痫前期患者(子痫前期组)为研究对象,研究对象均符合第9版《妇产科学》的子痫前期诊断标准[8]。其中子痫前期伴有下面任何一种表现纳入子痫前期重度组:(1)收缩压≥160 mmHg 和 (或)舒张压≥110 mmHg;(2)血小板计数<100×109/L;(3)肝或肾功能受损;(4)肺水肿;(5)新发中枢神经系统异常或视觉障碍。排除标准:(1)既往高血压病史;(2)多胎妊娠;(3)合并其他妊娠期疾病;(4)肝肾功能不全;(5)免疫系统疾病;(6)心血管系统疾病;(7)内分泌系统疾病;(8)有过抗凝治疗。另同期选取在本院产检正常的孕妇50例作为正常对照组。正常对照组孕妇均无妊娠合并症和并发症,血压在140/90 mmHg以下,尿蛋白阴性,排除既往不良妊娠史。本研究通过本院医学伦理委员会审批(伦理审批号:XYFY2022-KL042-01),所有研究对象均知情同意。

1.2仪器与试剂 BH-5360CRP 型全自动血液细胞分析仪(桂林优利特医疗电子有限公司)、TEK8520 型全自动凝血分析仪(江西特康科技有限公司)、aD1试剂盒购自美国依诺瓦诊断公司、aANXA5试剂盒购自江苏博深生物科技公司。

1.3方法 抽取3组孕妇产前空腹肘静脉血3 mL,置于含有抗凝试管中,静置、凝血后进行离心,设定离心机3 000 r/min,离心10 min,收集血清后置于-80 ℃冰箱统一保存备用,待血液标本收集完后,采用化学发光免疫分析法检测待检者aD1效价,用酶联免疫吸附试验法检测待检者aANXA5效价。均严格按照抗体相应试剂盒说明书进行操作;另同时抽取所有入组孕妇4 mL肘静脉血,分别应用BH-5360CRP 型全自动血液细胞分析仪检测血液指标[白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NC)、淋巴细胞计数(LY)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数 (PLT) ]及TEK8520型全自动凝血分析仪检测凝血指标[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、D -二聚体(D-D)]。

2 结 果

2.13组孕妇一般资料比较 3组孕妇一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。见表1。

表1 3组孕妇一般资料比较

2.23组孕妇血清中各指标水平比较 3组孕妇血清中aD1效价比较差异无统计学意义(P>0.05);子痫前期重度组血清中aANXA5效价、WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D水平均较子痫前期非重度组及正常对照组升高,而PLT、PT、APTT水平低于其他两组,差异均有统计学意义(P<0.05);子痫前期非重度组血清中aANXA5效价、WBC、NC、LY、FIB水平较正常对照组升高,而PT、APTT水平低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);子痫前期非重度组血清中CRP、PLT、TT水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05) 。见表2。

表2 3组孕妇血清中各指标水平比较

2.3子痫前期患者血清中aD1和aANXA5效价与炎症及凝血指标的相关性 子痫前期患者血清中aD1效价与D-D呈正相关(P<0.05),与APTT、TT呈负相关(P<0.05);子痫前期患者血清中aANXA5效价与WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D呈正相关(P<0.05),与 PLT、PT、APTT呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 子痫前期患者血清中aD1和aANXA5效价与炎症及凝血指标的相关性

2.4影响子痫前期重度的多因素Logistic回归分析 先以子痫前期组患者各观察指标的中位数为分界标准,采用“先单因素分析后多因素分析法”纳入单因素分析差异有统计学意义的指标(aANXA5效价、LY、CRP、PLT、PT、APTT、TT、FIB、D-D)作为自变量,以子痫前期作为因变量(子痫前期重度=1,子痫前期=0),进行多因素Logistic回归分析,结果显示aANXA5效价、CRP、APTT、FIB为子痫前期重度的独立影响因素(P<0.05) 。见表4、5。

表4 影响子痫前期重度的单因素分析

2.5Logistic回归模型对子痫前期重度发生预测价值的初步评价 ROC曲线以子痫前期重度为研究对象,以1-特异度作为横坐标,以灵敏度作为纵坐标绘制曲线。见图1。ROC曲线分析结果显示Logistic回归模型预测子痫前期重度的曲线下面积为0.919(P<0.001)。

图1 Logistic回归模型预测子痫前期重度发生的ROC曲线

表5 影响子痫前期重度的多因素 Logistic 回归分析

3 讨 论

子痫前期是妊娠期常见的并发症之一,其发病机制复杂,目前还不是很明确。现有研究认为子痫前期的发病与免疫反应异常、炎症反应和血管内皮损伤相关[9]。而抗磷脂抗体是一组以血小板和内皮细胞膜上负电荷磷脂作为靶抗原,识别磷脂或磷脂结合蛋白并与其结合的自身免疫性抗体[10]。研究提示抗磷脂抗体通过相关机制可致内皮细胞功能受损,从而活化血管内皮细胞、血小板、中性粒细胞等,使血液凝固性增加;可直接作用于滋养细胞,从而改变其分化和成熟,可导致胎盘病理改变和功能损伤,以及螺旋动脉的血管病变,进而参与相关病理妊娠的进展[9,11]。

既往研究提示,膜联蛋白A5(ANXA5)是一种胎盘抗凝蛋白,能与活化细胞(血小板、内皮细胞等)或凋亡细胞的质膜外层暴露的磷脂酰丝氨酸(PS)结合形成屏障以防止促凝剂复合物的活化,从而发挥抗凝、抗炎、抗凋亡的作用[12]。aANXA5是妊娠期间暴露于循环免疫细胞中ANXA5产生的自身抗体,两者相结合会破坏抗凝血剂屏障,暴露前凝血PS,从而易使血栓形成。本研究结果显示,子痫前期组孕妇血清中aANXA5效价显著高于正常对照组,其中,子痫前期重度组孕妇的aANXA5效价显著高于子痫前期非重度组,提示aANXA5在子痫前期患者中呈高表达水平,且可能参与病情发展。aD1是aβ2GPⅠ氨基末端的D1结构域,与APS发病机制密切相关[13]。有研究显示,aD1可抑制凝血酶原活性及二磷酸腺苷介导的血小板聚集,并且在体外激活单核细胞并增加其细胞因子的表达,并且激活自然杀伤细胞和CD8+T淋巴细胞,进而引起血栓形成及病理妊娠的发生[14]。本研究中3组孕妇血清中aD1效价比较差异无统计学意义(P>0.05)。

结合抗磷脂抗体的“一击再击”模型解说[15],当机体局部或全身发生炎症或者损伤时,细胞表面的磷脂成分发生结构的改变,隐蔽的磷脂分子便会暴露于免疫系统,致使机体免疫系统产生抗磷脂抗体,机体在受到抗磷脂抗体的“攻击”时会产生一系列病理改变,进而导致疾病的发生,会加重血栓前状态。WBC、NC、LY、CRP都是机体炎症反应即免疫防御重要组成部分[16]。另外子痫前期患者往往存在血小板减少、凝血功能异常等情况,从而导致血液高凝容易发生血栓事件[17]。本研究结果显示,子痫前期重度组患者的WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D水平均较子痫前期非重度组及正常对照组高,而PLT、PT、APTT低于其他两组。这与已有相关研究结果一致[18-20]。本研究中虽然子痫前期组有些指标水平与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但是并没有超过正常检验范围,例如WBC、LY、PLT、TT,这可能是因为妊娠妇女体内原本就存在着非感染性炎症反应,整体数据偏态分布所致,但结合结果来看,子痫前期会加重孕妇体内炎症反应和凝血功能指标的异常变化,且与疾病严重程度有关。本研究将aD1和aANXA5效价与炎症和凝血相关指标进行相关性分析,结果显示,子痫前期患者血清aANXA5效价与WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D呈正相关,与PLT、PT、APTT呈负相关。提示aANXA5在血清中的高表达可能加重全身炎症反应及血栓高凝状态,这可能是因为aANXA5破坏抗凝血剂屏障,同时促进母体发生免疫炎症反应及加重血栓前状态,从而加速子痫前期病情的进展。回归分析结果也显示,aANXA5是影响子痫前期重度病情的独立危险因素。ROC曲线分析结果显示Logistic回归模型预测子痫前期重度的曲线下面积为0.919,提示该回归模型对预测子痫前期重度的发生具有较高价值,但Logistic回归模型对子痫前期重度预测有一定的局限性和漏诊率,所得结果仍需后期更多数据验证。3组孕妇血清中aD1效价没有可比性,但进行相关性分析结果显示子痫前期患者血清aD1效价与D-D呈正相关,与APTT、TT 呈负相关。虽然DE LAAT等[21]的多中心研究发现aD1与产科并发症显著相关,尤其是在妊娠10周后。而文献[22-23]研究显示,aD1是血栓事件和病理妊娠显著的危险因素,特别是妊娠晚期。但本研究显示,aD1与子痫前期没有相关联系,但是aD1的高表达使APTT、TT缩短,D-D升高,加速了血栓形成。这也与ZHANG等[24]研究结果一致,即aD1与血栓形成有一定的相关性,但与病理妊娠无关。在aD1与产科合并症的研究中仍存在较多争议,结合既往相关研究不排除地区地域及种族所造成的这种结果差异。同时这也可能与各研究纳入标准、检测时机不完全一致有关。

综上所述,子痫前期组孕妇血清中aANXA5水平明显高于正常对照组,是影响子痫前期重度病情的独立危险因素,同时在临床上加强炎症和凝血指标的检测,对评估子痫前期病情有一定的帮助。但目前aD1与病理妊娠的相关性尚无定论,其在临床上的应用价值亟需更多的临床证据及进一步的实验研究来证实。