前列腺癌组织肿瘤出芽与临床病理特征及预后的关系分析

张 帆, 申文凤, 汪 锋, 钗丽干, 都吉雅, 崔宏伟, 苏依图

前列腺癌(prostate cancer,PCa)是全球范围的常见恶性肿瘤,具有发病率、致死率较高等特点,位居男性恶性肿瘤致死率排名的第5位。恶性肿瘤的侵袭与转移是影响患者预后生存质量的关键,近年研究指出[1],肿瘤出芽(Tumor Budding)是肿瘤浸润性生长状态,常见于肿瘤浸润性前缘,也被认为是上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的组织学形态表现。肿瘤出芽是指分散于肿瘤侵袭前缘的瘤细胞簇,各细胞簇由1～4个瘤细胞组成,已被认为是评估直肠癌恶性程度的代表性指标,可评估直肠癌的侵袭、转移与预后[2]。随着学术界对肿瘤出芽的深入研究,在肺癌、食管癌、口腔癌等实体瘤中,肿瘤出芽具有相同的特性及作用[3]。然而,肿瘤出芽在PCa中的研究处于空白状态,国内外均未见报道。对此,本研究就PCa组织肿瘤出芽与患者临床病理特征及预后生存的关系展开分析,以评估PCa组织肿瘤出芽生物学特性及其临床应用价值,如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:收集2018年1月至2021年12月101例我院行根治术治疗的PCa患者临床资料。纳入标准:行择期腹腔镜前列腺癌根治术治疗,且手术病理证实为PCa(由年限≥5年的病理科医师阅病理切片,以六分区法评估前列腺肿瘤分布,发现某区域病灶直接≥5mm且Gleason评分≥3分即可确诊PCa);年龄为18～80岁;病理切片、实验室检查等资料完整。排除标准:前列腺癌根治术前行放化疗等抗肿瘤治疗;术后随访期间发生自杀、车祸死亡等非肿瘤因素死亡。101例PCa患者年龄52～78(67.39±6.22)岁;术日清晨血清前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)(酶联免疫分析法,美国BIO TEK公司试剂盒) 4.6～69.7(29.11±6.08)ng/mL;TNM分期T1期42例,T2期34例,T3期25例,Gleason评分2～10分(6.78±0.63)分;淋巴结转移22例,包膜侵犯28例,精囊侵犯30例,手术切缘阳性40例(手术切除标本墨染固定,墨染边缘镜下发现肿瘤细胞即为切缘阳性)。

1.2方法:收集前列腺癌根治术中切除的PCa组织标本,常规切片,行HE染色,由2名工作年限≥5年的病理科医师独立阅片,结果不一致时讨论得到统一结论;虽然国际肿瘤出芽共识会议2016年[4]提出了直肠癌肿瘤出芽的分级方法,但Ueno[5]等提出的肿瘤出芽计数及分级方法使用更广,在非直肠癌领域使用更多,故本研究采用Ueno等给出的判断方法:在×40倍镜下挑选“肿瘤出芽”最多的区域,再在×200倍镜下技术,每张切片取5个视野,其中计数最大值为该标本的最终肿瘤出芽计数,以出芽数0～4个为低级别,出芽数≥5个为高级别。并另取切片,枸橼酸盐缓冲盐(0.01mmoL/L,pH6.0,30min)抗原修复,使用免疫组化Envision两步法(试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)检测E-cadherin表达情况,以细胞膜棕染为E-cadherin表达阳性,细胞E-cadherin阳性表达率≤50%为阴性,>50%为阳性。并收集101例患者术日清晨血清PSA(化学发光免疫分析法,试剂盒购自德国罗氏公司)、Gleason评分及TNM分期等临床病理特征。

2 结 果

2.1PCa组织肿瘤出芽情况及判断一致性:101例PCa患者肿瘤出芽最小计数为0,最大计数为31,中位数为4,有45例标本为高级别肿瘤出芽,56例标本为低级别,其中21例标本未发现出芽;2名病理科医师判断肿瘤出芽级别具有良好一致性(Kappa系数=0.880,P<0.001),见表1。

表1 2名病理科医师判断肿瘤出芽情况分析

2.2PCa患者临床病理特征与肿瘤出芽级别的关系:PCa患者中,高TNM分期、高Gleason评分及合并淋巴结转移、包膜侵犯、精囊侵犯、E-cadherin表达阴性者肿瘤出芽高级别率更高(P<0.05),见表2。

表2 不同临床病理特征者肿瘤出芽级别比较n(%)

2.3不同肿瘤出芽级别者随访2年生存状态分析:术后随访时间≥2年者62例,其中高级别肿瘤出芽者26例,低级别肿瘤出芽36例;以术后随访时间2年为终点,分析其生存时间,高级别肿瘤出芽者术后生存时间10～24个月(21.27±0.91)个月;低级别肿瘤出芽者术后生存时间19～24个月(23.75±0.17)个月;Log-rank检验显示,高级别肿瘤出芽者术后生存率明显低于低级别肿瘤出芽者(χ2=7.555,P=0.006),生存曲线见图1。

3 讨 论

肿瘤出芽在显微镜下可见肿瘤细胞丧失细胞间连接及去分化,这种改变与EMT特征性改变一致,基于此,肿瘤出芽通过EMT参与肿瘤的浸润及转移过程,也是目前的主流观点[6]。EMT早期,上皮细胞极性减弱或消失,导致E-cadherin表达下调,促进EMT进展,细胞骨架转变,引起细胞向瘤体外转移,是肿瘤获得侵袭及运动能力的过程,E-cadherin下调被认为是EMT的标志性改变[7]。本研究发现,PCa患者中,E-cadherin表达阴性者肿瘤出芽高级别率更高,提示PCa组织肿瘤出芽也与EMT密切相关,即肿瘤出芽在PCa中也具有其生物学特性。目前,肿瘤出芽被认为是直肠癌由局灶病变向全身疾病发展的一个状态[8]。Huang[9]等研究还发现,肿瘤出芽可作为评估乳腺癌等实体瘤浸润转移能力的指标,预测患者不良预后。对此,可推测肿瘤出芽与PCa病理特征及预后有一定关联性。

徐程[10]等指出,肿瘤出芽与pT1期胃腺癌浸润转移能力密切相关,可评估肿瘤侵袭性,并建议将肿瘤出芽纳入pT1期胃腺癌的规范病理报告,以指导临床诊疗。卢远响[11]等发现,肿瘤出芽与反映胰腺神经内分泌瘤侵袭性的临床病理指标高度相关,且高级别肿瘤出芽与肝转移、血管侵犯等共为导致胰腺神经内分泌瘤不良预后的影响因素。近年,已有专家基于肿瘤出芽活性及其肿瘤细胞巢大小制定新分级系统,将其用于预测结肠癌的无瘤生存时间[12]。由上述报道可知,肿瘤出芽的相关研究已不再局限于直肠癌领域,其与多种恶性实体瘤的病理特征及预后有关。本研究结果显示,PCa患者中,高TNM分期、高Gleason评分及合并淋巴结转移、包膜侵犯、精囊侵犯者肿瘤出芽高级别率更高,表明肿瘤出芽与PCa的侵袭及转移能力密切相关,可与常规病理特征指标共同指导临床诊疗。还有学者指出[13],肿瘤出芽与EMT发生密切相关,可能较传统的病理特征指标可更早地提供信息,而准确地预测预后。本研究中,高级别肿瘤出芽者术后平均生存时间21.27个月,低级别肿瘤出芽者术后平均生存时间23.75个月,且高级别肿瘤出芽者术后2年生存率明显低于低级别肿瘤出芽者,提示肿瘤出芽可用于预测PCa预后,为临床治疗提供指导意见。

虽然国际肿瘤出芽共识会议提出的肿瘤出芽判断标准为0～4个(低级别)、5～9个(中级别)、10个及以上(高级别),但大多数学者仍使用Ueno提出的分级方法,该方法(即本研究使用的分级方法)在食管癌等非直肠癌报道中更为常见[14]。故本研究参考相关报道,使用了Ueno提出的分级方法,一致性检验也显示,2名病理科医师判断肿瘤出芽级别具有良好一致性,提示Ueno提出的分级方法评估PCa肿瘤出芽的稳定性良好,具有其推广价值。

综上所述,肿瘤出芽与PCa的侵袭及转移能力有关,可用于评估患者预后生存情况,具有可借鉴性,有望成为新的病理特征指标在临床推广。