不同检测方法对念珠菌性阴道炎的诊断效能比较

孙园圆 赵建萍

（郑州市妇幼保健院检验科，河南 郑州 450000）

念珠菌性阴道炎是由念珠菌感染导致的一种阴炎症性疾病，临床表现为不同程度的外阴瘙痒、白带增多、异味、外阴道及阴道内有灼烧感等症状，影响患者的生活质量。念珠菌性阴道炎患者若得不到及时诊治会导致念珠菌长期潜伏于外阴阴道褶皱处，后即使接受抗真菌药物治疗也容易复发而难以治愈，成为带菌者，给患者精神和心理上造成巨大痛苦[1]。因此，早期发现并及早进行有效治疗十分必要。

目前，真菌培养是念珠菌性阴道炎诊断的金标准，其可直接使用患者的白带标本进行菌落培养，菌落形态直观、颜色明显，培养阳性率几乎均可达100%，可实现真菌菌属的准确检测。但是，真菌培养时间偏长，难以实现早期快速诊断[2]。乳胶凝集法、显微镜镜检法、荧光聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）核酸扩增法现已经广泛用于临床微生物检验中，且均取得一定价值[3-4]。但上述检测方法中哪种对念珠菌性阴道炎的诊断效能更为显著仍需进一步探究。鉴于此，本研究旨在比较乳胶凝集法、显微镜镜检法、荧光PCR核酸扩增法对念珠菌性阴道炎的诊断效能。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究经郑州市妇幼保健院医学伦理委员会审核批准，前瞻性纳入2020年7月-2022年7月本院接收的130疑似念珠菌性阴道炎患者为研究对象。

纳入标准：患者疑似念珠菌性阴道炎，表现为阴道分泌物增多、稠厚、明显外阴瘙痒、灼热痛、排尿痛等症状；检查前24h未进行阴道用药与冲洗；2d内无性生活；患者情绪稳定，依从性良好，可配合本次研究。排除标准：合并未控制的急性生殖道炎症；严重意识障碍或精神疾病；合并恶心肿瘤；合并心、肝、肾器质性病变；伴全身急慢性感染。

患者年龄23-34岁，平均年龄（29.85±2.01）岁；体重指数22.15-25.42 kg·m-2，平均（23.78±0.65）kg·m-2；病程3-7 m，平均（5.12±0.64） m；受教育程度：初中及以下87例，中专/高中及以上43例。患者均签署研究知情同意书。

1.2 方法

患者取膀胱截石位，医护人员在窥阴器的辅助下（禁止涂抹润滑剂，防止阴道分泌物样品受到污染），将无菌棉拭子置入患者阴道后穹窿或阴道内部，顺时针旋转3-5圈，用细胞保存液容器保存阴道侧壁分泌物，同时做好标识、记录。

1.2.1 乳胶凝集法检测

将收集的样品安放在软琼脂试管底部作为凝集法检验样本，将其保存在-40℃低温环境中培养12h后，采用凝集测定试剂盒对样品进行快速检验，若样本内能够观察到紫色凝集颗粒，则诊断患者念珠菌性阴道炎阳性，反之则诊断为阴性。试剂盒购自购自上海纪宁实业有限公司。

1.2.2 显微镜镜检法检测

将收集的样本进行涂片处理，向涂片中滴加2滴氢氧化钾溶液（浓度控制在10%），当样本于溶液混合均匀时，采用显微镜高倍视野（×200）对样本进行观察，当检测出涂片中是存在真菌孢子、菌丝或假菌丝则诊断患者念珠菌性阴道炎阳性，反之则诊断为阴性。

1.2.3 荧光PCR核酸扩增法检测

以离心柱法对收集的样本进行处理，获取阴道分泌物DNA，每次将5μL的提取液加入念珠菌性阴道炎相关菌群核酸特异性Taqman探针PCR反应液管中（NCBI genbank序列），经美国ABI荧光定量QSDX仪扩增后记录反应结果，并将反应结果与对照样本进行比较。

阳性标准：条带宽度≤1 mm，并在预期碱基范围内，背景无药斑或引物二聚体。其余情况则诊断为阴性。

1.2.4 真菌培养方法

将采集的患者阴道分泌物接种于培养皿中，提供适量的细菌培养液并将培养皿置于培养箱中（温度控制在32℃，湿度控制自50%），于培养5d后使用微生物鉴定质谱系统（上海复星诊断科技有限公司，型号：MicroIDSys）进行细菌鉴定。当鉴定培养皿内出现典型念珠菌落则确诊患者为念珠菌性阴道炎阳性。

1.3 统计学处理

采用SPSS 25.0软件处理数据，全部计量资料均经Shapiro-Wilk正态性检验，符合正态分布的资料以±SD表示，计数资料用n和%表示，组间比较采用χ2检验，采用Kappa进行一致性检验，Kappa＜0.4，一致性较差；0.4≤Kappa＜0.75，一致性一般；Kappa≥0.75时一致性较好。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 真菌培养结果

真菌培养结果显示，130例疑似念珠菌性阴道炎患者中确诊念珠菌性阴道炎101例，占比77.69%（101/130）；非念珠菌性阴道炎29例，占比22.31%（29/130）。

2.2 不同检测方法检查念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果分析

以真菌培养结果为金标准，经Kappa一致性度量，乳胶凝集法检查念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果的一致性一般（Kappa=0.433，P＜0.001），见表1。

表1 乳胶凝集法检查念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果分析（n）

显微镜镜检法检查念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果的一致性一般（Kappa=0.589，P＜0.001），见表2。

表2 显微镜镜检法检查念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果分析（n）

荧光PCR核酸扩增法检查念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果的一致性较好（Kappa=0.888，P＜0.001）。见表3。

表3 荧光PCR核酸扩增法检查念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果分析（n）

2.3 不同检测方法对念珠菌性阴道炎的诊断价值

以真菌培养结果为金标准，荧光PCR核酸扩增法检查念珠菌性阴道炎的准确度、灵敏度均高于乳胶凝集法、显微镜镜检法检查，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 不同检测方法对念珠菌性阴道炎的诊断价值%（n）

3 讨论

念珠菌性阴道炎患者若得不到及时诊治会导致念珠菌长期潜伏于外阴阴道褶皱处，后即使接受抗真菌药物治疗也容易复发而难以治愈，成为带菌者，给患者精神和心理上造成巨大痛苦[1-3]。对疑似为念珠菌阴道炎的患者多采用真菌培养法进行检查，其优点是可直接使用患者的白带标本进行菌落培养，菌落形态直观、颜色明显，培养阳性率几乎均可达100%[2,3]。但真菌培养时间偏长，部分患者得到检测结果需5-7d，难以实现早期快速诊断。现阶段，乳胶凝集法、显微镜镜检法、荧光PCR核酸扩增法临床检查人体微生物感染常用检测方法，但具体采用何种检查效果更好仍存在诸多争议。本研究结果显示，乳胶凝集法、显微镜镜检法检测念珠菌性阴道炎结果与真菌培养结果的一致性一般，荧光PCR核酸扩增法检测结果与真菌培养结果的一致性较好；三者中，荧光PCR核酸扩增法检查念珠菌性阴道炎的准确度、灵敏度高。乳胶凝集法是利用在电解质协助下颗粒性抗原和相关抗体出现结合现象的一种检查方法，可用肉眼观察到凝聚状况，进而判断阴道局部念珠菌感染状况。但其对反应条件的要求较高，抗体特异性一般，导致其诊断的准确度、灵敏度受到诸多负面影响[4-7]。

显微镜镜检法利用显微镜的显微放大效果对经过氢氧化钾溶液溶解的念珠菌菌株进行实时观测，当检出真菌孢子、菌丝或假菌丝等念珠菌菌株时则确诊为阳性。但镜检法隶属于一种人为的操作方法具有较强的主观性，易受到检测医师自身经验、技术等外界因素影响，可能会导致假阳性或者假阴性的概率增加，出现漏诊、误诊[4-7]。

荧光PCR核酸扩增法在传统的PCR反响体系中参加荧光染料或荧光基团，免除PCR后续操作流程，可降低产物污染的风险性；且荧光物质有其特定的波长，对不同的细菌可呈不同荧光信号。目前荧光PCR核酸扩增法已经有数千种细菌的荧光对照谱，检测人员通过将反应结果与对照样本进行比较，即可准确检测出患者是否患有念珠菌性阴道炎[4-7]。

综上所述，乳胶凝集法、显微镜镜检法、荧光PCR核酸扩增法对念珠菌性阴道炎具有一定的诊断效能，但与前二者比较，荧光PCR核酸扩增法检查念珠菌性阴道炎的准确度、灵敏度更高。对于有临床表现而乳胶凝集法或显微镜镜检结果为阴性的患者，可行荧光PCR核酸扩增法检查来实现念珠菌性阴道炎有效诊断。