血清Presepsin、GRP78水平在溃疡性结肠炎诊断、病情严重程度评估中的价值*

张 峰,王瑞雪,朱 琳

济南市中西医结合医院检验科,山东济南 271199

溃疡性结肠炎(UC)是一种复杂的炎症性结肠疾病,其特征为远端开始的黏膜炎症,可向近端延伸至整个结肠[1]。目前,全球UC发病率和流行率持续增加,病因涉及环境、免疫系统、肠道微生物群和遗传等因素[2],临床表现为疲劳、带血腹泻、腹痛和大便失禁[3]。寻找UC疾病严重程度的预测指标对UC的治疗具有重要意义。可溶性白细胞分化抗原14亚型(Presepsin)是CD14的可溶性N端片段,CD14是一种在先天免疫细胞表面表达的多功能糖蛋白[4]。有关文献报道显示,Presepsin高表达是老年重症肺炎患者死亡的危险因素,且与病情严重程度呈正相关[5]。脓毒症急诊患者Presepsin表达水平较高,患者预后较差,Presepsin检测对该疾病的诊断及预后评估有较高价值[6]。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是一种在内质网内表达的应激诱导分子伴侣,充当未折叠蛋白反应途径的主要调节因子。GRP78在多发性骨髓瘤中高表达,是多发性骨髓瘤潜在的新型生物标志物和治疗靶点[7]。在妊娠期糖尿病患者中GRP78呈高表达,GRP78在该疾病发生、发展过程中发挥重要作用[8]。然而,关于Presepsin和GRP78在UC患者血清中的水平及扮演的角色目前仍不清楚。基于此,本研究通过检测UC患者及表观健康的体检者血清中Presepsin及GRP78的表达水平,分析其与UC患者病情严重程度的关系,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价Presepsin、GRP78对UC的临床诊断价值,以期为UC的临床诊断和病情严重程度评估提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2019年3月至2021年3月于该院住院治疗的100例UC患者纳入研究作为研究组。纳入标准:(1)符合UC的诊断标准[9];(2)患者本人及直系亲属了解本研究并签署知情同意书;(3)首次确诊并接受治疗;(4)心、肝、肾功能正常。排除标准:(1)精神状态异常,无法正常沟通交流;(2)合并恶性肿瘤者;(3)合并肠梗阻者;(4)临床信息不完整;(5)妊娠或哺乳期女性;(6)存在感染性疾病;(7)存在自身免疫性疾病。采用Truelove-Witts评分标准[10],根据UC患者病情严重程度将研究组患者分为轻度组(32例)、中度组(38例)和重度组(30例)。另外,选取同期于该院体检的90例表观健康者作为对照组。收集并整理纳入研究者年龄、性别、体重指数等资料。研究组:男51例、女49例,年龄24～60岁、平均(45.56±5.13)岁,体重指数(22.86±3.07)kg/m2。对照组:男48例、女42例,年龄20～68岁、平均(43.98±5.92)岁,体重指数(22.56±3.16)kg/m2。研究组与对照组年龄(t=0.744,P=0.458)、性别(χ2=0.103,P=0.748)、体重指数(t=0.663,P=0.508)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。本研究经本院伦理委员会审批通过(审批号:2019-0216)。

1.2方法

1.2.1血清Presepsin、GRP78的检测 研究组和对照组分别于入院后次日和体检当日抽取清晨空腹静脉血4 mL,室温静置10～20 min后,3 000 r/min,离心20 min,收集上清液待测。使用酶联免疫吸附法检测Presepsin及GRP78表达水平。Presepsin试剂盒(货号:EKL60088)购自艾美捷科技有限公司,GRP78试剂盒(货号:ml037942)购自上海酶联生物科技有限公司,测定步骤均严格按照说明书进行,利用多功能酶标仪(赛默飞世尔科技有限公司)测定各标本在450 nm处的吸光度值,依据标准曲线计算血清Presepsin、GRP78水平。

1.2.2UC患者白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)检测 研究组和对照组分别于入院后次日和体检当日抽取清晨空腹静脉血3 mL,采用全自动血液细胞分析仪(上海聚慕医疗器械有限公司)检测WBC、PLT。

2 结 果

2.1两组血清Presepsin、GRP78水平比较 研究组血清Presepsin、GRP78水平均高于对照组(P<0.05),见表1。

表1 两组血清Presepsin、GRP78水平比较

2.2UC患者血清Presepsin、GRP78水平与临床资料的关系 分别以UC患者血清Presepsin、GRP78水平的平均值455.78 pg/mL、245.48 pg/mL为临界值,分别将UC患者分为Presepsin高、低表达组和GRP78高、低表达组。Presepsin、GRP78表达水平与患者年龄、性别、体重指数、饮酒史无关(P>0.05),与PLT、WBC有关(P<0.05)。见表2、3。

表2 Presepsin表达水平与UC患者临床资料的关系或n(%)或n/n]

表3 GRP78表达水平与UC患者临床资料的关系或n(%)或n/n]

2.3不同病情严重程度的UC患者血清Presepsin、GRP78表达水平比较 随着病情严重程度的增加,轻度组、中度组、重度组的UC患者血清Presepsin、GRP78表达水平均依次升高(P<0.05)。见表4。

表4 不同病情严重程度的UC患者血清Presepsin、GRP78水平比较

2.4UC患者血清Presepsin与GRP78水平的相关性分析 Pearson相关分析显示,UC患者血清Presepsin与GRP78水平呈正相关(r=0.291,P<0.05),见图1。

图1 UC患者血清Presepsin与GRP78水平的相关性分析

2.5Logistic回归分析UC发生的影响因素 以是否发生UC为因变量(1=发生,0=未发生),以年龄(连续变量)、性别(1=男,0=女)、体重指数(连续变量)、饮酒史(1=有,0=无)、PLT(1=异常,0=正常)、WBC(1=异常,0=正常)、Presepsin(连续变量)及GRP78(连续变量)为自变量,进行多因素Logistic分析。结果显示,PLT、WBC、Presepsin、GRP78均是UC发生的独立影响因素(P<0.05),见表5。

表5 Logistic回归分析发生UC的影响因素

2.6血清Presepsin、GRP78水平对UC患者的诊断效能 经ROC曲线分析可知,Presepsin、GRP78单独诊断UC患者的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.842,灵敏度分别为67.00%、69.00%,特异度分别为92.22%、94.44%,约登指数分别为0.592 2、0.634 4;Presepsin、GRP78联合诊断UC患者的AUC为0.924,灵敏度为77.00%,特异度为96.67%,约登指数为0.736 7。两者联合诊断的效能优于血清Presepsin、GRP78各自单独诊断(Z=3.921、3.048,P<0.05)。见表6、图2。

图2 血清Presepsin、GRP78水平对UC患者的诊断效能

表6 血清Presepsin、GRP78水平对UC患者的诊断效能

3 讨 论

UC是一种胃肠道慢性炎症性疾病,可通过遗传、环境、微生物群和黏膜免疫失调相关的多因素机制影响结肠和直肠。在我国UC的发病率逐年升高,给患者家庭带来了较大的经济负担,若不能及时发现并治疗,UC有转化成结肠癌的风险[11]。目前,UC的发病机制尚不清楚,临床表现程度轻重不同,早期检出率较低。因此,寻找潜在的UC血清学指标,对减轻患者痛苦、改善患者预后尤为重要。

Presepsin相对分子质量约为13×103,是分化标记蛋白CD14的可溶性N端片段,是识别病原体相关分子模式并启动先天免疫反应的Toll样受体。研究发现,Presepsin水平可预测急性肾衰竭严重程度[12]。血清Presepsin可参与急性胰腺炎的病理生理过程,与急性胰腺炎的病情密切相关[13]。在急性胆管炎中,血浆Presepsin与其感染程度、病情严重程度呈正相关[14]。在败血症中,患者Presepsin水平与细菌感染的严重程度呈正相关[15]。本研究结果显示,与表观健康的体检者相比,UC患者血清Presepsin水平明显升高,并且Presepsin水平随着病情严重程度的增加而升高,这提示Presepsin表达增加与UC的病理发展程度有关。并且,Presepsin水平与患者体内PLT、WBC有关。推测其可能原因:Presepsin作为CD14的可溶性N端片段,通过影响细胞免疫炎症反应进而在UC发生、发展中发挥作用。

GRP78是细胞内的一种分子伴侣。刘晨等[16]研究发现,GRP78在急性心肌梗死患者中高表达。在胃癌组织中,GRP78表达水平与淋巴结转移、临床分期及预后有关[17]。有研究表明,增强GRP78的活性可以缓解氧化应激诱导的细胞损伤和细胞死亡,GRP78在保护细胞免受氧化应激方面起着至关重要的作用[18]。GRP78的表达水平与人肺腺癌细胞[19]、人肺癌细胞[20]的凋亡率呈正相关。本研究结果显示,与对照组相比,UC患者血清GRP78水平明显升高,轻度组、中度组、重度组的UC患者血清GRP78水平依次升高,且GRP78水平与PLT、WBC有关,提示GRP78在UC的进程中发挥一定的促进作用,有利于对UC患者的病情评估。另外,沈雁等[21]研究显示,UC小鼠的结肠组织中GRP78呈高表达,与本研究结果相一致。

本研究结果显示,UC患者血清Presepsin与GRP78呈正相关,这提示Presepsin与GRP78之间的联系十分紧密,并且PLT、WBC、Presepsin、GRP78均是UC发生的影响独立因素。本研究探究了血清Presepsin、GRP78对UC的诊断价值,结果发现,血清Presepsin诊断UC的AUC值为0.834,当血清Presepsin浓度大于435.58 pg/mL时,可增加患有UC的风险,而血清GRP78诊断UC的AUC值为0.842,当血清GRP78浓度大于236.94 pg/mL时,也可增加患有UC的风险,这提示Presepsin、GRP78对UC均有一定的诊断效能。Presepsin、GRP78两者诊断UC患者的AUC为0.924,其灵敏度、特异度及约登指数分别为77.00%、96.67%、0.736 7,优于各自单独诊断。可见,临床上对血清Presepsin、GRP78水平进行检测时,血清Presepsin、GRP78两者联合检测对UC的诊断价值更高,能够弥补单项血清Presepsin或单项血清GRP78检测的不足,在UC的临床诊断中具有较高的应用价值。

综上所述,UC患者血清Presepsin、GRP78水平均上调,并且均随着UC病情严重程度的增加而增加,两者联合检测对UC的诊断价值优于Presepsin、GRP78各自单独检测,两者有望成为UC临床诊断的血清学指标。