滴虫性阴道炎患者阴道局部Th1/Th2细胞因子与pH值、菌群密集度的相关性分析

门 霞

天津市河东区大王庄街社区卫生服务中心化验室 300020

滴虫性阴道炎(Trichomonal vaginitis,TV)为妇科常见生殖道感染性疾病,发病率较高,若未及时给予抗感染治疗,还可引发其他生殖器官疾病[1]。近年阴道炎相关研究中对于阴道局部免疫细胞因子的关注较多,认为与TV等病原菌感染发生有关[2]。有研究指出,阴道炎病情进展过程中T淋巴细胞亚群介导的免疫功能异常,其中Th1/Th2细胞因子失衡与阴道病原菌感染密切相关[3]。本文分析TV患者阴道局部Th1型细胞因子[白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(INF-γ)]、Th2型细胞因子[白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)]比值与pH值、菌群密集度的相关性,旨在为临床预防、干预TV病情发生、进展,改善患者预后提供参考,报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年6月—2021年6月我院收治的104例TV患者,根据阴道分泌物Nugent评分分为过渡态TV组(Nugent评分4～6分,33例)、中度TV组(Nugent评分7～8分,54例)、重度TV组(Nugent评分9～10分,17例);另以1∶3比例选取同期312例健康体检者为对照组。其中对照组年龄24～42岁,平均年龄(33.06±4.28)岁;过渡态TV组年龄23～43岁,平均年龄(32.36±4.45)岁,病程29～50d,平均病程(39.32±5.12)d;中度TV组年龄22～42岁,平均年龄(32.83±4.47)岁,病程30～52d,平均病程(40.03±4.95)d;重度TV组年龄24～43岁,平均年龄(33.51±4.30)岁,病程30～51d,平均病程(40.27±4.81)d。各组基线资料均衡可比(P>0.05),本研究经我院伦理委员会审批通过。

1.2 选择标准 纳入标准：(1)符合《2018欧洲国际性病控制联盟/世界卫生组织关于阴道分泌物(阴道炎症)管理指南》中TV相关诊断标准[4];(2)可合并泌尿道感染;(3)阴道口、外阴瘙痒;(4)阴道分泌物增多、颜色异常、有异味;(5)近1个月无避孕药用药史;(6)生殖部位可出现灼热、疼痛;(7)3d内未进行阴道冲洗及性生活;(8)患者及近亲属均了解本研究并签署知情同意书。排除标准：(1)伴有宫颈癌等生殖系统肿瘤;(2)妊娠期或哺乳期女性;(3)伴有阴道混合感染;(4)伴有免疫功能障碍;(5)存在精神相关疾病。

1.3 方法 Th1/Th2细胞因子、pH值及阴道菌群密集度均于入组第2天检测。

1.3.1 Th1/Th2细胞因子检测。采用一次性Dacron拭子于阴道后穹隆处停置30s,取Ep管加入1ml生理盐水,置入拭子,充分溶解混匀阴道分泌物,将混悬液离心(2 000r/min,20min)处理,取上清液;采用酶联免疫吸附法检测IL-2、INF-γ等Th1型细胞因子及IL-4、IL-10等Th2型细胞因子,计算Th1/Th2细胞因子比值。

1.3.2 pH值检测。采用细菌性阴道病检测试纸(南通戴尔诺斯生物科技有限公司,批准文号：苏械注准20182400247),放置于玻璃片,玻璃棒蘸取被稀释阴道分泌物样本,与标准比色卡比对,检测阴道分泌物pH值。

1.3.3 阴道菌群密集度检测。以一次性Dacron拭子取阴道分泌物标本,滚动均匀涂片,完全干燥,革兰染色：(1)固定涂片,(2)结晶紫染1min,(3)蒸馏水冲洗,(4)加碘液染1min,(5)水洗并以吸水纸吸去水分,(6)加数滴酒精(95%)脱色,20s后水洗并吸去水分,(7)蕃红染色液染,1min后蒸馏水冲洗,(8)干燥,镜检。通过100×油镜观察细菌分布、排列,观察30个视野,根据油镜下观察到的每个视野细菌平均数进行分级,分为1级(视野细菌平均数1～9)、2级(视野细菌平均数10～99)、3级(视野细菌平均数>100)、4级(无法计算)。

1.4 观察指标 (1)对比各组阴道局部Th1/Th2细胞因子,IL-2/IL-4、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10。(2)对比各组pH值。(3)对比各组菌群密集度检出情况。(4)分析阴道局部Th1/Th2细胞因子与pH值、菌群密集度的相关性。

2 结果

2.1 各组阴道局部Th1/Th2细胞因子对比 各组阴道局部Th1/Th2细胞因子对比差异有统计学意义(P<0.05);过渡态TV组、中度TV组、重度TV组IL-2/IL-4、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10水平均低于对照组(P<0.05),中度TV组IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10低于过渡态TV组(P<0.05),重度TV组IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-10低于中度TV组(P<0.05),见表1。

表1 各组阴道局部Th1/Th2细胞因子对比

2.2 各组pH值对比 对照组pH值(5.39±0.08)低于过渡态TV组(5.86±0.22)、中度TV组(6.03±0.17)、重度TV组(6.12±0.28),差异有统计学意义(F=631.451,P<0.05)。

2.3 各组菌群密集度检出情况对比 各组菌群密集度分级情况对比差异有统计学意义(P<0.05);过渡态TV组、中度TV组、重度TV组菌群密集度1级占比较对照组小,菌群密集度4级占比较对照组大(P<0.05),见表2。

表2 各组菌群密集度检出情况对比[n(%)]

2.4 阴道局部Th1/Th2细胞因子与pH值、菌群密集度的相关性分析 将菌群密集度进行赋值：菌群密集度1级=1,菌群密集度2级=2,菌群密集度3级=3;菌群密集度4级=4;进行Spearman相关性分析显示,IL-2/IL-4、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10与pH值呈负相关,与菌群密集度呈正相关(P<0.05),见表3。

表3 相关性分析

3 讨论

阴道毛滴虫是急慢性TV的主要致病因子,临床研究认为在TV发生与局部免疫功能紊乱有关[5]。TV防御机制中,相比于机体系统免疫,阴道局部免疫功能发挥更多作用,Th1/Th2细胞因子极化紊乱是影响细胞分化、调节免疫应答的重要因素[6]。本文结果显示,过渡态TV组、中度TV组、重度TV组IL-2/IL-4、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10水平均低于对照组(P<0.05),提示Th1/Th2细胞因子水平改变与阴道毛滴虫的感染、TV病情进展过程有关。Th1型细胞因子中IL-2可增强单核巨噬细胞、自然杀伤细胞的病菌清除作用,提高机体抗病原菌活性。IL-2浓度可随机体细胞免疫功能变化而改变[7]。有研究表明,IL-2可提高巨噬细胞对阴道毛滴虫的吞噬作用,达到抗感染效果[8]。INF-γ不仅可激发单核巨噬细胞活性,增强其介导的抗感染机制;还可作用于中性粒细胞,为防止病原微生物入侵,阴道局部激活黏膜免疫系统,中性粒细胞的激活在黏膜免疫、先天免疫作用机制中发挥重要作用,对于细胞内部寄生菌亦可实现抗感染效果[9]。正常状态中Th1、Th2型细胞因子可互相影响,达到动态平衡。IL-4作为Th2型细胞因子,可通过减少IL-2、INF-γ合成、表达,使巨噬细胞失活,减弱中性粒细胞吞噬阴道毛滴虫的能力,并阻断INF-γ对巨噬细胞的活化效应[10]。IL-10具有多向性生物活性,可作用于肥大细胞,抑制机体炎症反应、天然免疫,调节Th1、Th2型细胞因子平衡状态,改变阴道局部免疫应答;进而抑制机体免疫反应,增加阴道毛滴虫的易感性,维持免疫功能正常,是抑制TV炎症反应的重要细胞因子[11]。

pH值等微生态参数可反映阴道酸碱度调节能力,客观评价阴道微生态状况[12]。本文结果显示,对照组pH值低于过渡态TV组、中度TV组、重度TV组(P<0.05),说明随着TV病情进展,阴道局部pH值明显改变,可一定程度上反应阴道微生态异常。进一步分析相关性显示,IL-2/IL-4、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10与pH值呈负相关,与菌群密集度呈正相关(P<0.05)。菌群密集度反映菌群总量,微生态菌群间制衡强度随菌群密集度升高而增强,菌群失调是引发TV等阴道感染疾病的重要因素[13-14]。因此,Th1/Th2细胞因子水平可作为评估阴道微生态环境、菌群平衡状态的参考指标。

综上所述,TV患者阴道局部IL-2/IL-4、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10等Th1/Th2细胞因子与pH值呈负相关,与菌群密集度呈正相关,检测Th1/Th2细胞因子可为临床不同感染情况制定相应干预措施,增强TV患者免疫功能。