疑似非洲猪瘟感染实验室诊断初探

李华高　荀绍雄　李方志　晏波　潘基　马万圣　潘爱查

摘要：大河镇是养殖业重镇，养殖业是农民增收的支柱之一。非洲猪瘟是养猪业的头号杀手，若生物安全防控落实不到位，对养殖业的损失就会极其惨重，到现在都研制不出合格的疫苗，从客观上讲，养殖业确实遇到了瓶颈。非洲猪瘟防控措施、方案，几经修改，现已转为常态化的防控，隐性传染不容易发现，症状不明显，临床上呈现的多数为混合性感染，因此进行实验室诊断就显得很重要。

关键词：非洲猪瘟；疑似；感染；实验室诊断

0 引言

自2018年8月初我国首次发生非洲猪瘟疫情以来，党中央、国务院、省委省政府、市委市政府、县委县政府对此高度重视，认真组织，狠抓落实，各项防控工作有序推进。

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病。世界动物卫生组织（ OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，是我国重点防范的外来动物疫病之一。根据《中华人民共和国动物防疫法》等法律法规和农业农村部《非洲猪瘟疫情应急预案》、《云南省非洲猪瘟应急工作方案》、《曲靖市非洲猪瘟应急工作方案》、《富源县突发重大动物疫情应急预案》有关要求，县局会议精神，切实做好全镇非洲猪瘟疫情防控工作，进一步压实责任、明确任务、细化措施，结合大河实际，开展了非洲猪瘟防控一系列的工作。制定印发了《大河镇非洲猪瘟疫病防控工作实施方案》（大政发[2018]47号）文件，明确了目标任务和各相关部门的工作职责。同时印发了《大河镇非洲猪瘟疫病防控工作领导小组》（大政发[2018]48号）文件，成立了以镇长为组长的领导小组，负责统筹协调做好非洲猪瘟防控工作。

1 材料与方法

1.1 养殖基本情况排查

按照县指挥的安排部署，认真组织人员对全镇各村及25个规模养殖场进行排查1470次，排查场（户）43000余头，未发现异常情况。11月10日，进行全镇大排查。散户由村委会、村兽医进行排查，规模户由畜牧站组织进行排查。此次大排查，未发现非洲猪瘟，累计排查生猪67415头，其中母猪9733头，仔猪23277头，肥猪33456头。摸清底子，掌握了生猪存栏情况，为下一步开展工作提供了依据。又分别安排了村兽医，根据各自辖区情况，进行走村串户，随机抽查，适时了解畜禽健康状况，早发现，早诊断，确保将非洲猪瘟日排查工作落到实处。

1.2 对异常情况重点排查和处理

大河镇辖区内大、中、小型养殖场共45个，经2021年3月12日排查发现，某养殖场生猪存栏450头，其中能繁母猪32头。经调取养殖生产档案，查看免疫记录，猪瘟、蓝耳疫苗全部有免疫记录，且在有效免疫期内。发病120头，其中母猪14头，肥猪106头，经一星期死亡母猪6头，肥猪64头。临床检查：T值41.3℃，皮肤发紫，呕吐。解剖：肝部肿大黄染，脾脏边缘轻微梗死，无肿大，其他组织器官无异常。对病死猪70头全部送大河镇无害化处理中心进行集中无害化处理。

1.3 病料送检

按无菌操作及采样要求，对刚死亡的病死猪进行肝、心、脾、肺、肾等实质器官的采集，委托云南农业大学牧医楼进行了实验室诊断。在无菌条件下，取新鲜组织或关节液、心包液等置于肉汤中培养，置于 37℃生化培养箱培养 12～15h 后，然后用接种环蘸取菌液且划线于 3%血琼脂培养基中，置于 5%CO2 培养箱 37℃培养 24±2h后，观察菌落形态并挑取可疑菌落进行革兰氏染色镜检。

2 实验样品采集与运输原则

2.1 组织和实质器官的采集

在选择样品采集部位时，最好采集病变和健康交界部位的组织或脏器。病料的采集必须采用无菌操作。最好采取送检发病期和濒死期动物，如动物已死亡、冬天需在死亡2h以内、夏天需在死亡1h以内采样，用手术剪无菌采集病变部位的肝、脾、肺等病料，放双层自封袋或塑料袋内，标记清楚，结扎密封。

病毒学检测病料可冷藏送检，或可置于-20℃以下冰箱冷冻1晚上待病料冻结实后快递送检。细菌学及药敏试验检测病料不需要冷冻，在保温箱里放冰块、4℃冷藏快递送检。每群猪或每栋鸡不少于3头或3只动物的病料组织。

2.2 血清采集

采集好的血液样品倾斜放置，凝固后会自动析出血清，将血清吸出注入另一个新的灭菌离心管中；有条件的可用离心机分离出血清，将血清吸出放置新的灭菌离心管中，标记清楚，置于-20℃冰箱冷冻12h，将冰冻血清放入保温箱内加冰袋快递送检。

2.3 饮用水采集

采集同栋畜舍水井、水箱、水线的水，无菌取300ml 水后放至灭菌玻璃瓶或刚开封的矿泉水瓶（倒掉矿泉水），迅速拧紧瓶盖，标记清楚，6h内送至实验室，如果6h送不到，请用保温箱进行冷藏保存，即在保温箱里放冰块，且用报纸等包住。

3 检测结果

图1，图2分别为1号、2号样品菌液在血琼脂平板上形成圆形、微凸、表面光滑、湿润、边缘整齐、半透明的菌落，直径约0.3～1mm，大多数菌株呈草绿色α溶血，部分菌株不产生溶血环。

图3，图4分别为1号、2号血琼脂培养基产生溶血环的单个菌落革兰氏染色镜检结果，发现单个及成对存在、形态均一的蓝紫色阳性杆菌。

4 结果

经过实验室诊断，该猪场患有猪链球菌病，导致了猪气喘病等混合性感染致死。

5 小结与讨论

该养殖场此次发病，自己要承受巨大的损失，看似偶然，其实是必然的。经过仔细的调查分析，存在的问题确实很多，从大的方面看，有以下几点是值得讨论的，也是值得沉思，养殖场应当尽量避免的，必须提前进行有效规避的。

5.1 选址

养殖场的选址按照《动物防疫合格证》申办条件上的要求去做，尽量远离村庄，河流。該养殖场位于河道边上，且在下游，容易受上流水源的影响，直接与村庄相接，人、物、畜禽的密切接触，防控难度非常大。

5.2 布局一定要科学合理

该养殖场占地面积1860m2，猪舍紧密相接，20世纪80年代半开放式，外留露天运动场2.3m2，中间孤形与猪睡觉的地方隔开，遇到极端天气猪舍无法升温保暖。猪舍紧密相连，是养殖场 的通病，中间缺乏缓冲地段，夏天不能有效散，尤其是肥猪舍，极易导致呼吸系统疾病的发生，遇到重大传染病根本无法有效隔离和及时止损。人畜混居，饲养员、兽医员、养殖场老板，儿童、学生全部住养殖场内，尤其是这几年畜禽重大传染病，人畜共患病，对人对猪都是非常不利的。现在的养殖防控理念是“关口前移，人病兽防”，必将是一种趋势。

5.3 保持环境卫生

养殖场对环境卫生的要求很高，按照正常的，也是最简单的检验方法是人住进猪舍，只要自己觉得能适应，猪就肯定能适应。该养殖场饲料仓库、兽药、衣服全部共堆一间屋子，防鼠防霉措施全无。

5.4 注意消毒

消毒室设计不合理，与杂物间无异，消毒药水没有及时更换，进出的车辆不能有效消毒，细菌病毒入场极其便利。

6 结论

未来的养殖业，养殖生猪必须要把非洲猪瘟生物安全防控放在首位，认真抓好猪的基础免疫工作，提升生猪养殖水平，提高猪群的整体抵抗力，不相信神药，认真落实非洲猪瘟防控措施，不走捷径。

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