1例猪圆环病毒2 型和3 型混合感染的诊治

杨 玲

贵州省铜仁市万山区丹都街道办事处，贵州铜仁 554300

猪圆环病毒病(PCVD)是生产中常见的猪群感染不同种类猪圆环病毒(PCV)而引发的一类病毒性传染疾病的统称。PCV 是单股负链DNA 病毒，属于圆环病毒科圆环病毒属，该病毒无囊膜，目前有PCV-1、PCV-2、PCV-3 3 个基因型。其中PCV-1 发现于1974 年，对猪群没有致病性[1]；PCV-2 发现于1998 年，不同品种、不同性别以及不同年龄的猪都具有致病性，尤其是仔猪和母猪感染后，其危害性更大，猪感染PCV-2 后可以引起免疫抑制及各器官损害，PCV-2 呈世界性分布，严重阻碍着全球生猪养殖行业高效发展[2]；PCV-3 于2016 年被首次报道，研究表明PCV-3、PCV-2 在致病性和临床表现方面具有较大的相类性，但PCV-3 与PCV-2 之间无交叉反应，故PCV-2 疫苗无法对PCV-3 提供有效保护，且PCV-3 的流行使PCV-2 的防控更加困难[3]。据报道，PCV-2 和PCV-3 是当前我国养猪业中对免疫系统有抑制作用的2 种主要疫病。2022 年3月，贵州省某养猪场仔猪发生一起断奶仔猪多器官衰竭综合征死亡病例，在诊断时，将临床表现与PCR 诊断技术相结合,最终确定该猪场病例同时感染了PCV-2 和PCV-3 病毒。

1 发病情况

2022 年3 月初，贵州省某养猪场10 周龄仔猪发病，发病仔猪消化功能降低、持续性腹泻、进行性消瘦、生长不良甚至停滞、死亡率较低，发病后曾用抗生素治疗无效。经询问，该猪场接种了CSFV、PRV、PRRSV、PEDV 等疫苗，但未进行PCV-2、PCV-3 疫苗的免疫接种。

2 临床症状

临床上病猪表现为精神颓废、食欲衰退、皮肤发绀、被毛无光泽、反复腹泻、发烧、气喘、最后因机体脱水、消瘦、衰竭而死亡。

3 剖检特征

解剖病死仔猪胃黏膜可见溃疡，肾组织水肿，肠黏膜有充血和出血现象，脾肿大，全身多处淋巴结肿大。

4 实验室诊断

4.1 样品处理

将无菌采集的病死猪肠黏膜、淋巴结、脾脏等组织与灭菌后的生理盐水按照1∶5 的体积比例混合后，用组织匀浆机进行研磨，并在-20 ℃条件下冷冻后再解冻，如此反复进行3 次，然后离心15 min（12 000 r/min），离心后吸取上清，并将其保存在-20 ℃冰箱中备用。

4.2 分子生物学试剂与试剂盒

病毒基因组RNA/DNA 提取试剂盒购于美国AXGEY 公司；DL 2000 Marker、2×Taq PCR Master Mix、一步法RT-PCR 试剂盒购于宝生物工程(大连)有限公司。

4.3 引物设计与合成

设计PEDV、CSFV、PRV、PRRSV、PCV2、PCV3的特异性检测引物[4-6]，引物信息详见表1，引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

表1 引物信息表

4.4 核酸提取

取-20 ℃保存的冷冻上清液200 μL，用病毒基因组提取试剂盒提取病毒DNA/RNA，然后置于-80 ℃冰箱保存待用。

4.5 PCR/RT-PCR 扩增

以本文4.4 中提取核酸样品为模板，进行PCR/RT-PCR 扩增[4-6]，扩增体系及反应程序见表2，扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测。

5 综合诊断结果

PCR/RT-PCR 结果如图1 所示，扩增后PEDV、CSFV、PRV、PRRSV 4 种病毒均无任何特异性条带，为阴性，而PCV-2 病毒在大小约为486 bp 处有特异性扩增条带，PCV-3 在大小约为270 bp 处有特异性扩增条带，故PCV-2 和PCV-3 的检测结果均为阳性。这就从分子水平上证实临床病料样品中存在PCV-2 和PCV-3 的核酸，说明该猪场发生了PCV-2 和PCV-3 混合感染。

图1 临床病料样品的PCR/RT-PCR 扩增结果

6 治 疗

临床上，猪圆环病毒一般不会出现单独感染的现象，在感染该病的同时经常伴随着其他疾病的发生，如猪蓝耳病。因此，在治疗时应控制好其他病原，做好综合治疗。根据病情，每天给病猪注射头孢噻呋钠1～2 次,持续给药3 d，注射量为3～5 mg/kg；对于10 日龄的患病仔猪还可选择用黄芪多糖注射液稀释过的猪白细胞干扰素来治疗，每头猪注射1 mL，对于体重为10～50 kg 的病猪可加大用量，注射量为4 mL/头，超过50 kg 的病猪剂量为6 mL/头，根据病情每天注射1～2 次，3 d 不间断用药。

7 讨论

近年来，我国生猪养殖的规模不断扩大，但疫病防控技术相对落后，各种猪病呈现出日趋复杂的流行态势，多种疾病同时感染发病的现象频繁发生，这不仅对猪群有巨大的危害性，还使得疫病的综合防控难度进一步加大。

由于PCV 感染后会导致免疫抑制，使PCV 在临床中更容易发生与其他致病原的混合感染或继发感染，国内经常有PCV 与CSFV、PRRSV 或其他细菌性疾病发生混合感染的报道[7-10]。在致病性、临床表现等方面，PCV-2 和PCV-3 具有明显的相似性，故在临床上必须要采用实验室检测的方法来进行鉴别诊断。PCR 检测法不仅能够准确检测出致病原的核酸，还具有操作方便、简单易行、成本较低等优点，故该法在基层养殖场兽医检查中得到了广泛应用，因此对贵州省某养猪场的病例采用PCR 技术进行分子水平上的鉴定,使得诊断结果更加可靠、更加准确。

在本试验中，将临床表现和PCR 检测技术相结合的方法不仅能够准确鉴别猪圆环病毒病，还能为养殖场抓住该病的最佳治疗机会提供保障。同时，通过该病例的诊断也使基层兽医工作者意识到实验室诊断在疫病综合防控中的重要性，对不能确诊、临床症状复杂、混合感染或继发感染的病例要果断采用实验室诊断的方法进行确诊，防止因诊断不清楚而错失治疗良机，从而带来更大的损失。