内皮脂肪酶基因rs2000813 位点多态性与冠心病的关系研究

宋星明，帕丽达·阿布来提，哈力沙·艾日肯江，迪丽胡玛尔·阿布来提，高颖

冠心病（coronary heart disease，CHD）主要是由脂代谢紊乱、冠状动脉内皮损伤、慢性炎症反应等综合因素造成的［1］。研究表明，基因遗传突变可参与CHD的众多病理生理过程［2］。近年血脂代谢紊乱、慢性炎症反应相关临床预防、治疗用药及临床诊疗指南的相继发布，在很大程度上解决了CHD诊疗的部分问题，但CHD发病率升高的趋势仍未在根本上得到遏制［3］。为了从源头发现问题、解决问题，研究基因遗传突变在CHD患者血脂代谢、炎症反应、血管内皮损伤等过程中的调控机制成为CHD预防与治疗领域新的科研突破口［4］。血管内皮细胞在炎症因子、内毒素等刺激下可生成大量内皮脂肪酶（endothelial lipase，EL），其在脂蛋白代谢中发挥了重要作用，并参与了炎症反应、代谢紊乱和动脉粥样硬化等病理生理过程［5］。目前国内外有关EL基因rs2000813位点多态性与CHD的关联性研究较少，且部分研究结果异质性较大。本研究旨在分析EL基因rs2000813位点多态性与CHD的关系，以期为CHD的临床诊疗新思路、新方法的形成提供理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2019—2021年于新疆医科大学第一附属医院行冠状动脉造影检查的CHD患者903例为病例组。纳入标准：（1）因典型心绞痛症状或无创性检查提示有心肌缺血证据就诊，冠状动脉造影检查明确心外膜下冠状动脉狭窄＞50%，并诊断为CHD［6-7］；（2）自愿参与本研究。排除标准：（1）临床资料不完整者；（2）患有高血压心脏病、先天性心脏病、主动脉夹层、重度心力衰竭、心源性休克、恶性心律失常、肿瘤、自身免疫性疾病、精神疾病及肝肾功能不全、脑血管疾病者。选取同期于新疆医科大学第一附属医院经冠状动脉造影或冠状动脉CTA检查确诊的非CHD（神经官能症、肋间神经炎等非心源性胸痛疾病）患者628例为对照组。纳入标准：（1）因典型心绞痛症状或无创性检查提示有心肌缺血证据就诊，冠状动脉造影检查明确心外膜下冠状动脉狭窄≤50%，排除CHD；（2）自愿参与本研究。排除标准同病例组。本研究已在新疆医科大学第一附属医院伦理中心备案（IACUC20170925-02），患者均签署相关知情同意文件。

1.2 研究方法

1.2.1 一般资料收集 收集患者一般资料，包括性别、年龄、民族、吸烟史、饮酒史、高血压发生情况、糖尿病发生情况、BMI。

1.2.2 生化指标检测 采集患者清晨空腹静脉血，送至新疆医科大学第一附属医院检验科，采用全自动生化分析仪（日本OLYMPUS，1000/2700型）检测生化指标，包括三酰甘油（triglyceride fatty acid，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol cholesterol，LDL-C）、载脂蛋白A（apolipoprotein A，Apo-A）、载脂蛋白B（apolipoprotein B，Apo-B）、脂蛋白a（lipoprotein a，Lp-a）。

1.2.3 EL基因rs2000813位点多态性检测 抽取患者肘静脉血3 ml，加入2% EDTA抗凝，5 000 r/min离心10 min（离心半径16 cm），分离白细胞，以酚-氯仿法抽取外周血白细胞基因组DNA，于-80 ℃环境下保存备用。DNA样本外送高通量测序以检测EL基因rs2000813位点基因型及等位基因。rs2000813上游引物序列为：5'-AAACTCGTGTCAGCCCTGCAGAC-3'；下游引物序列为：5'-AAACTCGTGTCAGCCCTGCAGAT-3'。

1.3 统计学方法 采用SPSS 26.0软件进行统计学分析。计数资料以相对数表示，组间比较采用χ2检验；符合正态分布的计量资料以（±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；非正态分布的计量资料以M（P25，P75）表示，两组间比较采用Mann-WhitneyU检验，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验，组间两两比较采用Kolmogorov检验；采用Hardy-Weinberg遗传平衡检验评估研究群体遗传平衡状态；采用多因素Logistic回归分析探讨女性疑似CHD患者发生CHD的影响因素；采用GraphPad Prism 8.0.2绘制ROC曲线以评估EL基因rs2000813位点CT基因型及其联合其他影响因素对女性疑似CHD患者发生CHD的预测效能。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料、生化指标比较 两组年龄、汉族者占比、TG、Lp-a比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；病例组男性占比、有吸烟史者占比、有饮酒史者占比、高血压发生率、糖尿病发生率、BMI、TC、LDL-C、Apo-B高于对照组，HDL-C、Apo-A低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组一般资料、生化指标比较Table 1 Comparison of baseline data and biochemical parameters between the two groups

2.2 Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果 Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果显示，对照组、病例组EL基因rs2000813位点基因型分布及等位基因频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（χ2值分别为0.681、0.469，P值分别为0.630、0.685）。

2.3 两组EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较 两组EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 两组EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较〔n（%）〕Table 2 Comparison of genotype and allele frequency at rs2000813 locus of EL gene between the two groups

2.4 两组不同性别患者EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较 两组男性患者EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。两组女性患者EL基因rs2000813位点基因型比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组女性患者EL基因rs2000813位点等位基因频率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；病例组女性患者EL基因rs2000813位点CC基因型占比低于对照组，CT基因型占比高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表3 两组男性患者EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较〔n（%）〕Table 3 Comparison of genotype and allele frequency at rs2000813 locus of EL gene of male patients between the two groups

表4 两组女性患者EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较〔n（%）〕Table 4 Comparison of genotype and allele frequency at rs2000813 locus of EL gene of female patients between the two groups

2.5 女性疑似CHD患者发生CHD影响因素的多因素Logistic回归分析 以年龄（实测值）、民族（赋值：汉族=1，少数民族=0）、吸烟史（赋值：有=1，无=0）、饮酒史（赋值：有=1，无=0）、高血压（赋值：有=1，无=0）、糖尿病（赋值：有=1，无=0）、BMI（实测值）、TG（实测值）、TC（实测值）、HDL-C（实测值）、LDL-C（实测值）、Apo-A（实测值）、Apo-B（实测值）、Lp-a（实测值）、EL基因rs2000813位点基因型（赋值：CC=0，CT=1，TT=2）为自变量，女性疑似CHD患者CHD发生情况为因变量（赋值：发生=1，未发生=0），进行多因素Logistic回归分析，结果显示，高血压、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a、EL基因rs2000813位点基因型为女性疑似CHD患者发生CHD的影响因素（P＜0.05），见表5。

表5 女性疑似CHD患者发生CHD影响因素的多因素Logistic回归分析Table 5 Multivariate Logistic regression analysis of influencing factors of CHD in female patients with suspected CHD

2.6 EL基因rs2000813位点CT基因型及其联合其他影响因素对女性疑似CHD患者发生CHD的预测效能ROC曲线分析结果显示，EL基因rs2000813位点CT基因型及其联合其他影响因素（高血压、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a）预测女性疑似CHD患者发生CHD的AUC分别为0.554〔95%CI（0.508，0.600）〕、0.770〔95%CI（0.732，0.808）〕，见图1。

图1 EL基因rs2000813位点CT基因型及其联合其他影响因素预测女性疑似CHD患者发生CHD的ROC曲线Figure 1 ROC curve of CT genotype at rs2000813 of EL gene and its combination with other influencing factors in predicting CHD in female patients with suspected CHD

3 讨论

研究显示，HDL-C升高是动脉粥样硬化的保护因素，其通过抗炎、抗氧化、抑制血小板聚集、促进再内皮化等机制发挥抗动脉粥样硬化的作用，且HDL-C与CHD的发生和患者预后密切相关［8］。EL主要由血管内皮细胞生成，具有较高的磷脂酶活性及偏低的三酰甘油脂肪酶活性，且具有调控血清HDL-C代谢的作用［9］。既往研究表明，EL是通过调控血清HDL-C的代谢来影响CHD发病的［10］，但此后的研究发现，炎症状态下EL还可促进巨噬细胞在血管内皮表面吸附、血小板聚集［11］、血管内皮细胞增殖，其是三酰甘油脂肪酶家族中促动脉粥样硬化作用最强的代谢酶［12］，而抑制炎症状态下EL过表达可减轻冠状动脉粥样硬化病变程度［13］。

本研究结果显示，病例组男性占比、有吸烟史者占比、有饮酒史者占比、高血压发生率、糖尿病发生率、BMI、TC、LDL-C、Apo-B高于对照组，HDL-C、Apo-A低于对照组，与既往研究结果［14］相似。本研究结果还显示，对照组、病例组EL基因rs2000813位点基因型分布及等位基因频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，提示所选研究个体来自同一孟德尔群体；两组EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较，差异无统计学意义，提示EL基因rs2000813位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）与疑似CHD患者发生CHD可能无关。但ABUDUREYIMU等［15］研究显示，EL基因SNPs是CHD的影响因素；ELNAGGAR等［16］研究发现，EL基因rs2000813位点T等位基因可能是CHD的保护性等位基因；ZHAO等［17］研究发现，EL基因rs2000813位点CC基因型或C等位基因可能是CHD的遗传性危险因素，本研究结果与之存在差异，分析原因，本研究将疑似CHD患者作为对照人群，而其他研究将健康体检人群作为对照人群。此外，本研究结果显示，两组男性患者EL基因rs2000813位点基因型及等位基因频率比较无统计学差异，提示EL基因rs2000813位点SNPs与男性疑似CHD患者发生CHD可能无关；两组女性患者EL基因rs2000813位点等位基因频率比较无统计学差异，而病例组女性患者EL基因rs2000813位点CC基因型占比低于对照组、CT基因型占比高于对照组，提示EL基因rs2000813位点等位基因频率可能与女性疑似CHD患者发生CHD无关，而EL基因rs2000813位点基因型可能与女性疑似CHD患者发生CHD有关。进一步进行多因素Logistic回归分析，结果显示，EL基因rs2000813位点基因型为女性疑似CHD患者发生CHD的影响因素。MEHILLI等［18］研究发现，男、女性CHD患者在临床表现、合并症、心血管危险因素等方面存在差异；女性由于炎症、精神压力、自主神经和神经内分泌功能障碍等独特因素，易发生内皮功能障碍和隐匿型冠状动脉性心脏病［19］。WANG等［20］研究发现，性激素可能介导肝脏EL功能，从而影响脂蛋白代谢；增加肝脏EL表达可以预防饮食诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化。COLE等［21］研究发现，EL基因突变导致的EL缺乏与高脂蛋白血症相关，EL变异体导致的高脂蛋白血症在女性中较为常见。

单纯SNPs对CHD的影响有限，将传统的心血管病危险因素与人类CHD相关基因的SNPs相结合，可增加其对CHD的预测效能。研究显示，冠状动脉粥样硬化病变可能比相应的临床症状早出现几十年［22］，因而积极消除可控危险因素可以降低不良心脏事件的发生风险，早期识别无症状的晚期冠状动脉粥样硬化患者［23］。PATTARABANJIRD等［24］研究显示，TID3基因rs11574位点GG基因型联合CHD传统危险因素预测冠状动脉病变严重程度的正确率为87%，AUC为0.84，其预测效能高于TID3基因rs11574位点GG基因型单独预测。本研究ROC曲线分析结果显示，EL基因rs2000813位点CT基因型及其联合其他影响因素（高血压、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a）预测女性疑似CHD患者发生CHD的AUC分别为0.554、0.770，提示EL基因rs2000813位点CT基因型联合其他影响因素对女性疑似CHD患者发生CHD有一定预测效能。

综上所述，EL基因rs2000813位点SNPs与疑似CHD患者发生CHD可能无关，与男性疑似CHD患者发生CHD可能无关；而EL基因rs2000813位点CT基因型是女性疑似CHD患者发生CHD的危险因素，且其联合其他影响因素（高血压、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a）对女性疑似CHD患者发生CHD具有一定预测效能。但本研究尚存在一定局限性：首先，本研究为单中心研究，样本量较小，导致入选患者可能存在偏倚，使结果的代表性受到影响；其次，关于EL基因rs2000813位点CT基因型联合其他影响因素对女性疑似CHD患者发生CHD的预测效能，缺乏内部验证和外部验证，其实际临床应用及推广价值仍有待进一步评估。因此，未来仍需要大样本量、多中心、前瞻性研究进一步证实EL基因rs2000813位点多态性对女性疑似CHD患者发生CHD的预测价值。

作者贡献：宋星明、帕丽达·阿布来提进行研究设计；宋星明、哈力沙·艾日肯江、迪丽胡玛尔·阿布来提进行数据收集与整理；宋星明进行统计学分析，并撰写与修订论文；高颖负责文章的质量控制及审校，对文章整体负责、监督管理。

本文无利益冲突。