QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定普洱茶中3 种杀虫剂残留

王 蕊，李丽鑫，万 静，许 秦，代佳和，朱强强*

（1.昆明市食品药品检验所，云南昆明 650032；2.云南省食品药品审核查验中心，云南昆明 650000；3.云南农业大学，云南昆明 650201）

普洱茶是云南特色茶叶，主要产自西双版纳、临沧、普洱等地区，本文通过查阅文献并结合茶农在种植过程中常用的农药种类，参考以往检验数据，以找出问题、监控风险点为目的，选取3 种常见的杀虫剂内吸磷、茚虫威、克百威进行检测。目前，农药残留检测技术主要有气相色谱法、液相色谱法、气质联用法和液质谱联用法。其中，液相色谱–串联质谱法应用广泛、发展较为完善[1-2]。在检测分析中，样品净化是较为关键的一个环节，目的是对目标物最大限度地提取，将干扰降到最低、误差降到最小，样品的净化效果直接影响到检测结果的可靠性[3]。QuEChERS 方法是近几年发展起来的一种样品前处理方法，具有便捷、高效及可靠安全等优势[4]。本试验将高效液相色谱-串联质谱法与前处理技术QuEChERS 方法相结合，建立了一种简便、高效、灵敏的分析方法应用于普洱茶的检测。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

普洱茶：普洱50 批，市售；茚虫威、内吸磷、克百威标准溶液（100 μg·mL-1）：农业农村部环境保护科研监测所；乙腈、甲醇、甲酸，色谱纯；醋酸、PSA、C18、GCB，分析纯；QuEChERS AOAC 萃取盐提取包（组分：6 g 无水MgSO4、1.5 g 醋酸钠）。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪（型号：4500QTRAP/LC/MS/MS，配ESI 离子源）；电子天平（型号：AL104）；振荡器（型号：Multi Reax）；高性能通用台式离心机（型号：ST16）。

1.3 试验方法

1.3.1 样品处理

称取2 g 茶试样（粉碎均匀）于50 mL 塑料离心管中，加入10 mL 水，旋涡振荡，静置30 min。加入20 mL 乙腈-醋酸溶液（体积比99 ∶1）和一个陶瓷均质子，涡旋振荡1 min，在具塞离心管冰浴条件下加入QuEChERS AOAC萃取盐提取包并剧烈振荡。待温度降低后，涡旋振荡2 min，再以4 200 r•min-1的转速离心5 min，盐析分层待净化。

移取上清液8 mL 加到内含PSA 400 mg、C18400 mg、GCB 200 mg、MgSO41 200 mg 的塑料离心管中，涡旋振荡1 min，4 200 r•min-1离心5 min，静置待分层，移取1 mL 上清液过0.22 μm 微孔滤膜，待测。

1.3.2 标准系列溶液配制

分别移取茚虫威、内吸磷标准溶液（100 μg·mL-1）0.5 mL 至5 mL 容量瓶中，乙腈定容，制成10 μg·mL-1的标准中间溶液。移取克百威标准溶液（100 μg·mL-1）0.05 mL 至5 mL 容量瓶中，乙腈定容，制成1 μg·mL-1的标准中间溶液。用乙腈稀释标准中间溶液，分别制得茚虫威、内吸磷浓度为10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1、400 ng·mL-1、500 ng·mL-1及克百威浓度为0.5 ng·mL-1、1.0 ng·mL-1、2.0 ng·mL-1、4.0 ng·mL-1、8.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1的标准系列工作溶液。

1.3.3 液相色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC®HCC T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动相A 为甲醇，流动相B 为0.1%甲酸水；柱温：40 ℃；流速：0.2 mL·min-1；进样体积：3 μL。梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

1.3.4 质谱条件

采用AB SCIEX 公司的4500QTRAP 质谱系统，在电喷雾离子源正离子模式下，使用多反应监测模式检测目标物。离子源温度为550.0 ℃，离子源电压为5.5 kV，气帘气30 psi，喷雾气（Gas1）50 psi，喷雾气（Gas2）50 psi。优化得到各目标物质谱条件见表2。

表2 茚虫威、内吸磷、克百威质谱条件

2 结果与分析

2.1 提取和净化条件的选择

乙腈与水部分互溶，加入萃取盐包后，盐析、分层和除杂效果明显，因此采用乙腈-醋酸作为提取溶剂。茶叶中含有的脂肪酸、生物碱、色素及酚类化合物使得净化过程具有一定的难度，易对色谱柱产生污染，采用PSA 400 mg+C18400 mg+GCB 200 mg+MgSO41 200 mg 进行净化[5]。该净化剂结合了常用净化剂的成分，疏水性较强，C18能有效去除脂肪酸和色素；GCB 能有效去除色素，排除干扰；PSA 能有效去除脂肪酸，对色素也有一定的去除能力，同时对农药残留吸附作用较小，且运用分散固相萃取，操作简便快速。

2.2 线性关系、检出限、定量限

对标准系列工作溶液进行测定，以各标准品质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得到相关系数和回归方程。检测限以离子对信噪比≥3考察，定量限以离子对信噪比≥10 考察，试验结果见表3。茚虫威、内吸磷在10 ～500 ng·mL-1，克百威在0.5 ～50 ng·mL-1线性关系良好，相关系数均大于0.999，检出限为0.010 9 ～0.019 2 μg·kg-1，定量限为0.036 4 ～0.063 9 μg·kg-1，可以满足定性、定量分析的需要。

表3 茚虫威、内吸磷、克百威的线性方程、定量限、检出限、保留时间

2.3 回收率与精密度

称取2 g 阴性茶试样进行加标试验，在茶试样中分别添加5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-13 个浓度水平的茚虫威、内吸磷、克百威标准溶液，每个水平进行6 次平行试验，试验结果见表4。茚虫威、内吸磷、克百威在3 个加标水平下的平均回收率为91.26%～105.66%，RSD 为0.67%～2.58%。符合《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）的规定，提示本方法加标回收率和精密度好，能准确测定茶叶中茚虫威、内吸磷、克百威含量。

表4 茚虫威、内吸磷、克百威回收率与精密度

2.4 样品测定

对50 批市售普洱茶中茚虫威、内吸磷、克百威的含量进行测定，结果显示在50 个样品中，茚虫威、内吸磷均未检出，有2 批次样品检出克百威，检出率为4%，其含量分别为0.014 mg·kg-1、0.013 mg·kg-1。《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021）规定茶叶中茚虫威、内吸磷、克百威的限量值分别为5 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1，本次检测的50 批普洱茶样品中3 种杀虫剂含量均符合国家标准要求。

3 结论

本文建立了一种基于QuEChERS 的高效液相色谱-串联质谱法用于同时检测普洱茶中3 种杀虫剂，该方法简便、高效、灵敏，适合普洱茶中茚虫威、内吸磷、克百威农药残留的快速检测及定量分析。此外，该方法也可为茶叶制品及其他茶叶农药残留检测提供一定的参考。检测的50 批普洱茶样品中3 种杀虫剂含量均符合国家标准要求，提示普洱茶中3 种杀虫剂残留情况较为乐观。这与近年来云南建立生态茶园息息相关，为了提高普洱茶原料的品质，近年来云南省政府及企业投入大量资金改造有机生态茶园，茶园病虫害防控趋向于更安全、可靠、绿色。