甘露寡糖对波纹龙虾叶状幼体生长的影响

何艺宾 黄标武 林金华

摘要：为探索甘露寡糖（mannose-oligosaccharides，MOS） 对波纹龙虾叶状幼体生长的促进作用，本研究设置3个试验组，分别投喂用不同浓度甘露寡糖强化的卤虫，统计各试验组培养3d、5d、7d后波纹龙虾叶状幼体的成活率。实验结果表明，1#饵料组（0.4 %甘露寡糖强化）培养3d、5d、7d的成活率分别为（72.5±2.5）%、（57.5±2.5）%、（42.5±2.5）%，明显高于其它试验组。饵料中添加甘露寡糖可提高波纹龙虾叶状幼体的成活率，甘露寡糖最佳添加浓度为0.4 %。

关键词：甘露寡糖；波纹龙虾；叶状幼体；生长发育

中图分类号：S962     文献标识码：A

基金项目：厦门海洋职业技术学院海洋生物学院2019年高层次人才科研专项。

作者简介：何艺宾（1981-），男，讲师。研究方向： 海洋生物技术， E-mail： 59948397@qq.com．

波纹龙虾 （Panulirus homarus）属于节肢动物门，甲壳纲，十足目， 龙虾科， 龙虾属，分布于印度洋-西太平洋海域，常栖息在水质清新的岩礁有沙地带。波纹龙虾不仅肉味鲜美具有极高的食用价值 ， 而且在工业、医药及工艺欣赏等方面也具有一定的价值，深受人们的喜爱。近年来，波纹龙虾的人工养殖越来越引起人们的关注，然而中国海区龙虾资源缺乏，以捕捞天然龙虾苗种进行人工养殖无法满足长期需求［1］。

波纹龙虾的幼体分为叶状幼体和游龙虾幼体。由于叶状幼体期较长，饵料组成较复杂，叶状幼体人工培育迄今还是世界难题［2］。目前国内关于波纹龙虾人工繁殖的报道较少，陈昌生等（2003年）对波纹龙虾早期叶状幼体培育进行了初步研究，经过 69 d培育获得了蜕皮8次的幼体。刘慧玲等（2008年）研究发现将藻类与卤虫作为饵料喂食波纹龙虾早期叶状幼体，培育效果较好，经过 54 d培育获得了脱皮9次的叶状幼体［3］。波纹龙虾人工育苗技术迄今仍未突破，严重阻碍了波纹龙虾人工养殖业的发展。

甘露寡糖是从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活性物质，具有提高成活率、促进生长和提高免疫力等作用，已作为饲料添加剂广泛用于饲料工业［4-5］。张炎灼［6］等（2014年）报道在大黄鱼饲料中添加0.2 %甘露寡糖能有效促进大黄鱼幼鱼生长并提高幼鱼的抗病能力。Sang［7］等（2010年）报道饵料中添加甘露寡糖不仅能够促进锦绣龙虾幼体的生长，而且还能提高波纹龙虾幼体的成活率。本研究中先用甘露寡糖对卤虫幼体进行营养强化，进而喂食波纹龙虾叶状幼体，研究甘露寡糖对波纹龙虾叶状幼体生长发育的影响，为波纹龙虾的人工繁育提供一种新的思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料

波纹龙虾：由厦门海沧某水产种苗有限公司提供。

主要实验试剂：甘露寡糖购自Sigma公司。

1.2 实验方法

1.2.1 抱卵波纹龙虾培育

从养殖池中将抱卵的波纹龙虾挑选出来，放入网箱暂养于水泥池（约 30 m2）中，盐度 30 ‰，水温保持在28～29℃，早晚各投喂新鲜花蛤 1次，花蛤投喂前先用高猛酸钾中浸泡10 min，充气，隔天清理花蛤壳并更换10 %的水，暂养过程中注意观察卵的颜色变化。

1.2.2 叶状幼体培育

从暂养池中将卵的颜色为棕红色的波纹龙虾挑选出来，放入新的水泥池继续培养7～10 d后可孵出叶状幼体，灯诱收集龙虾幼体，培养于新的水泥池中，密度：2万～3万尾/m3，盐度 30 ‰，水温保持在28～29℃，pH保持在8.0～8.2，第一天投喂卤虫幼体，第二天投喂卤虫和丰年虫各半，第三天以后投喂丰年虫，早晚各投喂2次，定期观察叶状幼体的形态变化并记录各期所用时间。

1.2.3 甘露寡糖对波纹龙虾叶状幼体成活率的影响

设置3个试验组，每组1个重复，投喂饵料分别为1#饵料：卤蟲，0.4 %甘露寡糖强化；2#饵料：卤虫，0.2 %甘露寡糖强化；3#饵料：卤虫。各随机选取20尾刚孵化出来的叶状幼体，移入5 L的容量瓶中充气培养，盐度 30 ‰。每天投喂饵料2次早上9∶00和 下午17∶00，分别培养3d、5d、7d后统计各试验组的存活率。

1.2.4 数据处理

采用GraphPad Prism 5软件对实验数据进行整理分析。

2 实验结果

2.1 波纹龙虾受精卵颜色变化观察

波纹龙虾受精卵发育过程中会发生颜色变化，培养初期为橘黄色，随着培养时间的增加，卵的颜色逐渐加深，变为棕红色，如图1所示。

2.2 叶状幼体形状观察

波纹龙虾叶状幼体每蜕皮1次即为一个新的发育时期，其肝胰脏、第 1步足外肢羽状刚毛的对数等形态特征会发生相应的变化。本研究以第 1足外肢羽状刚毛的对数为分期标准， 5对羽状刚毛时期为发育Ⅰ期，6对羽状刚毛时期为发育Ⅱ期，以此类推。随着发育时期的进行，叶状幼体肝胰脏逐渐变大、中叶瓣状边缘内陷程度也逐渐加深。不同发育时期的第 1步足外肢羽状刚毛对数，如图2所示。

2.3 甘露寡糖对波纹龙虾叶状幼体成活率的影响

分别统计用3种不同饵料投喂3d、5d、7d后，各试验组中波纹龙虾叶状幼体的成活个数，并计算各试验组的存活率。从如图3可知：投喂3天后，1#饵料组的成活率为（72.5±2.5）%，2#饵料组的成活率为（62.5±2.5）%，3#饵料组的成活率为（57.5±2.5）%；投喂5d后，1#饵料组的成活率为（57.5±2.5）%，2#饵料组的成活率为（47.5±2.5）%，3#饵料组的成活率为（37.5±2.5）%；投喂7d后，1#饵料组的成活率为（42.5±2.5）%，2#饵料组的成活率为（32.5±2.5）%，3#饵料组的成活率为（22.5±2.5）%；与其它试验组相比较，1#饵料组的成活率明显高于2#饵料组和对照组。

3讨论

由于波纹龙虾叶状幼体期较长，饵料组成较复杂，波纹龙虾人工育苗迄今仍未取得突破，未能形成产业化。波纹龙虾叶状幼体每蜕皮1次即为一个新的发育时期，但养殖水体不同、投喂的饵料不同，各发育时期的时间长短也不相同。适合的饵料、合理的养殖密度是幼体人工培育成功的关键 。陈昌生等用鱼油强化过的丰年虫幼体投喂龙虾幼体，经过 69 d培育获得了蜕皮 8 次的幼体。刘慧玲等扁藻加卤虫作为饵料投喂喂龙虾幼体，经过 54 d培育获得了脱皮 9 次的幼体。本研究利用水泥池（约30 m2）进行幼体培育，用 0.4 % 甘露寡糖、小球藻强化过的丰年虫幼体投喂龙虾幼体，经过 37 d培育获得了蜕皮 6 次的幼体，幼体的生长速度介于陈昌生和刘慧玲报道的生长速度之间，后续研究中将继续对叶状幼体的饵料组成进行优化。

近年来，甘露寡糖作为一种功能性寡糖，具有提高养殖动物的生产性能、改善肠道微生物区系以及提高免疫功能等功能，已被广泛应用于水产动物饲料中。甘露寡糖对水产动物生长的促进作用也越来越引起广大科研工作者的兴趣。于艳梅［8］等报道在黄颡鱼饲料中添加甘露寡糖可显著提高黄颡鱼血液白细胞吞噬活性，降低饵料系数进而促进黄颡鱼的生长。胡凌豪［9］等（2019年）报道斜带石斑鱼饲料中添加寡聚糖通过提高肠道绒毛高度、绒毛宽度，改善幼鱼肠道形态，促进营养吸收、消化，促进幼鱼的生长。Lu z y［10］等（2020年）報道草鱼饲料中添加甘露寡糖可显著提升头肾和脾脏的免疫功能，提高草鱼的抗病能力。本研究发现甘露寡糖能提高波纹龙虾叶状幼体的成活率，甘露寡糖对龙虾幼体生长的促进作用机理有待进一步深入研究。

参考文献

［1］ 沈铭辉，范薇.波纹龙虾工厂化养殖技术［J］.中国水产，2008，05：52，59.

［2］ 陈昌生，纪德华，吴坤杰，等.波纹龙虾人工繁殖及早期叶状幼体培育的初步研究［J］.集美大学学报，2003，08（03）：197-202.

［3］ 刘慧玲，李长玲，黄翔鹄，等. 波纹龙虾早期叶状幼体的培育及其形态观察［J］.渔业现代化，2008，35（04）：36-40.

［4］ Dimitroglou A， Merrifield D L， Spring P， etal. Effects of mannan oligosaccharide （MOS） supplementation on growth performance， feed utilisation， intestinal histology and gut microbiota of gilthead sea bream （Sparus aurata）. Aquaculture，2010，300：182-188.

［5］ 翟浩杰.饲料中添加甘露寡糖对刺参生长性能、肠道及免疫功能的影响［D］.大连海洋大学，2022.

［6］ 张炎灼，张蕉南，胡兵.饲料中添加甘露寡糖对大黄鱼幼鱼生长性能的影响［J］.水产养殖，2014，35（18）：30-33.

［7］ Sang H M， Fotedar R. Effects of mannan oligosaccharide dietary supplementation on performances of the tropical spiny lobsters juvenile （Panulirus ornatus， Fabricius 1798）. Fish & Shellfish Immunology，2010，28：483-489.

［8］ 于艳梅，吴志新，陈孝煊，等.魔芋甘露寡糖对黄颡鱼非特异性 免疫功能及生长的影响［J］.华中农业大学学报，2010，29（3）：351-355.

［9］ 胡凌豪，杨红玲，赵芸，等.果寡糖对斜带石斑鱼免疫功能和肠道形态的影响［J］.水产科学，2019，3（05）：499-594.

［10］ Lu Z Y， Jiang W D， Wu P， et al. Mannan oligosaccharides supplementation enhanced head kidney and spleen immune function in on-growing grass carp （Ctenopharyngodon idella）［J］. Fish & Shellfish Immunology， 2020， 106（4）： 596-608.