HPLC测定注射用前列地尔干乳剂中油酸钠含量

王艳娟，李龙英，朱倩颖，李海燕，王 锦，周三云

（浙江圣兆药物科技股份有限公司，浙江 杭州 310051）

注射用前列地尔干乳剂处方中含油酸钠，其作为常用的药用辅料，属于一种阴离子表面活性剂，具有很强的乳化能力。注射剂中，表面活性剂的用量需进行严格控制。2020年版《中国药典》[1]中采用气相色谱法（面积归一化法）检测油酸钠含量，也有文献报道采用气相色谱法测定药用辅料[2]、食品[3-4]中油酸和亚油酸含量，但气相色谱法均应经甲酯化前处理，操作步骤繁琐，且面积归一化法定量也较粗略。且干乳剂中油酸钠辅料含量较少，其他辅料成分较多，干扰较大，检测分离要求高，因此不宜采用气相色谱法。

采用文献[5-9]或专利[10]报道的液相相色谱法来测定干乳剂中油酸钠含量，难以达到分离检测的要求。本文采用高效液相色谱（HPLC）法分离油酸与其他组分，按外标法测定油酸含量，依据油酸和油酸钠分子量的关系，换算出干乳剂中油酸钠的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

e2695高效液相色谱仪（美国Waters）；XP205分析天平（瑞士Mettler Toledo）；ML204/02分析天平（瑞士Mettler Toledo）；SEVEN EXCELLER多参数测试仪（瑞士Mettler Toledo）；SHB-B95A真空泵（郑州长城）。

1.2 试药

注射用干乳剂（自制，批号：A170202）；注射用空白干乳剂（自制）；磷酸二氢钾（AR，国药集团）；磷酸（AR，国药集团）；乙腈（HPLC，美国TEDIA）；无水乙醇（HPLC，美国TEDIA）；超纯水（美国Millipore）；油酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111621-201205，0.2 ml/支，含量：99.6 %）；参比制剂（批号：17010330，重庆药友）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB C8（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱温：40 ℃；流速：1.0 ml/min；紫外检测器，检测波长：210 nm；进样量：60 μl；流动相A：0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 2.0），流动相B：乙腈，按表1进行梯度洗脱。

表1 梯度洗脱程序

2.2 溶液制备

2.2.1 稀释剂（60 %乙醇） 量取乙醇600 ml，用纯化水稀释至1000 ml，混匀，超声，即得。

2.2.2 对照品溶液 取油酸对照品13 mg，精密称定，置于20 ml量瓶中，用稀释剂溶解并定容，摇匀，即得储备液；精密移取储备液2.0 ml于20 ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得油酸浓度为0.06 mg/ml的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液 精密称取注射用干乳剂250 mg于5.0 ml量瓶中，加2.0 ml水，使其完全复乳，再加乙醇定容，振摇2.0 min，超声2.0 min，使其完全破乳，室温静置30 min，摇匀，取适量溶液，离心（15 000 r/min，15 min），取上清，即得供试品溶液。

2.2.4 基质溶液（空白辅料样品溶液） 精密称取不含油酸钠的干乳剂（不含油酸钠，其他组分均按制剂处方比例投料）250 mg于5 ml量瓶中，加水2.0 ml，使其完全复乳，再加乙醇定容，振摇2.0 min，超声2.0 min，使其完全破乳，室温静置30 min，摇匀，取适量溶液离心（15 000 r/min，15 min），取上清，即得空白辅料样品溶液。

2.3 专属性试验

取稀释剂、空白辅料样品溶液、供试品溶液、对照品溶液分别进样，记录色谱图，结果，稀释剂与空白辅料样品溶液对供试品测定均无干扰，方法专属性好，色谱图见图1。

图1 专属性考察色谱图

2.4 检测限和定量限

取2.2.2项下对照品储备液，逐步稀释后得到检测限和定量限溶液，油酸浓度为0.0049 mg/ml，信噪比（S/N）≥3.0；油酸浓度为0.0131 mg/ml，信噪比（S/N）≥10，经换算后，方法油酸钠检测限、定量限分别为0.005，0.014 mg/ml。

2.5 线性试验

按2.2.2项下对照品溶液配制方法，精密称取油酸对照品13.13 mg于20 ml量瓶中，加稀释剂溶解并定容，摇匀，即得对照品储备液，分别精密移取对照品储备液1.0，1.0，2.0，3.0，4.0 ml于50，20，20，20，20 ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系列线性溶液，浓度分别为0.0131，0.0327，0.0653，0.0981，0.1308 mg/ml。

取系列线性溶液，进样分析，记录色谱图。以峰面积Y为纵坐标，浓度X（mg/ml）为横坐标，进行线性回归，线性方程：Y=2 192 733.11X+30 096.31，R2=1.0000，表明浓度在0.01～0.13 mg/ml范围内，峰面积和浓度线性关系良好。

2.6 精密度（重复性和中间精密度）试验

按2.2.3项下方法配制供试品溶液，平行配制6份，分别进样测定，油酸钠含量结果的RSD为2.2 %（n=6）；由不同人员在不同日期，取相同批次的样品，按2.2.3项下方法配制供试品溶液，平行配制6份，用另一台高效液相色谱仪进样测定，油酸钠含量的RSD为2.6 %（n=6），12份供试品溶液的油酸钠含量的RSD为2.3 %（n=12），表明该方法精密度良好。

2.7 准确度（回收率）试验

按2.2.4项下方法配制空白辅料溶液，加入对照品溶液，考察浓度等级50 %，100 %，150 %的回收率，各浓度等级平行3份，计算回收率、平均回收率及RSD（n=9），结果见表1。油酸的回收率在99.53 %～103.60 %范围内，平均回收率为101.08 %，RSD为1.4 %（n=9），表明该方法准确度良好。

表2 回收率试验（n=9）

2.8 稳定性试验

取2.2.2、2.2.3项下溶液，冷藏放置（2～8 ℃），分别在0，1，2，3 d进行分析，考察对照品和供试品溶液的稳定性。结果3 d内样品中油酸钠含量与0 d相比，均在95 %～105 %范围内，表明冷藏条件下放置3 d，溶液稳定性良好。

2.9 耐用性考察

在其他条件不变的情况下，考察了流速±0.1 ml/min、柱温±5 ℃、波长±2 nm、流动相pH±0.5、不同品牌的色谱柱，分别检测供试品溶液，油酸钠的含量变化在95 %～105 %范围内，表明方法耐用性良好。

2.10 样品的测定

取自研品（批号：A170202）、参比制剂（批号：17010330），按2.2.3项下方法配制供试品溶液，分别平行配制3份，进样测定，记录色谱图，采用外标法计算供试品中油酸钠的含量，结果见表3。

表3 样品检测结果（n=3）

3 结论

本文建立了一种通用性更强的HPLC方法来测定前列地尔干乳剂中油酸钠的含量，样品处理简单，操作便捷，改进了国家药典标准中样品处理方法，也提高了定量的准确性。

结果分析表明，此方法专属性强、准确度高、精密度良好，适用于前列地尔干乳剂中油酸钠含量的准确测定，也适用于油酸钠辅料中油酸含量的测定，对其他药物或辅料中油酸、其他脂肪酸含量的测定具有重要参考价值。