肺癌患者外周血Tim-3的表达及临床意义

高继绪,张修华

(临沂市肿瘤医院,山东 临沂 276000)

有文献报道,T 细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)是大多数免疫细胞表面表达的抑制分子,半乳凝素-9是其配体,两者结合后可以抑制免疫应答,从而促进肿瘤的发生[1]。本研究通过检测肺癌患者Tim-3 的表达,分析其与临床相关指标的关系,探讨是否可作为肺癌患者特异分子标志物。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2021年6月—2023年1月本院收治的56例肺癌患者(病例组)。纳入标准:均经临床病理确诊;均行手术治疗;签署知情同意书。排除标准:术前接受放化疗及生物治疗等;伴有其他恶性肿瘤、呼吸和血液系统以及自身免疫疾病;肝肾和心脏等脏器严重功能障碍。56 例患者中,男34例,女22例;年龄43～69岁,平均(56.21±11.52)岁;导管癌22例,腺癌26例,腺鳞癌8例。以同期在该院体检的30例健康者为对照组,其中男19例,女11例;年龄42～70岁,平均(55.86±10.73)岁。两组一般资料比较无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 试剂和仪器 人Ficoll淋巴细胞分离液(中国科学院天津试剂厂),Trizol(Invitrogen公司),Tim-3试剂(日本Ta KaRa公司),实时荧光定量PCR 仪(厦门科华生物工程公司),全自动电化学发光分析仪及原装试剂(美国罗氏诊断公司)。

1.3 方法

1.3.1 标本的采集和处理 EDTAK2抗凝管采集空腹全血3 m L,用淋巴细胞分离液分出单个核细胞后立即按照TRIzol法提取细胞总RNA。

1.3.2 Tim-3 实时定量检测 按试剂说明书把RNA 逆转录成cDNA,逆转录反应条件为:37℃、60 min,95℃加热5 min灭活酶。引物序列及产物大小:Tim-3F:CCCAAGCTTCCACCATGTTTTCACATCTTCC,Tim-3R:TATGCGGCCGCCTATGGCATTGCAAAGCGAC, 906 bp; B-actin F:GGCATCGTGATGGACTCCG,B-actin R:GCTGGAAGGTGGACAGCGA,613 bP。荧光定量PCR扩增反应体系为40μL,反应体系含DDW1 0.5μL,Taq Mix 12.5μL,Tim-3F 0.5μL,Tim-3R 0.5μL,cDNA 5μL,1μL 灭菌水。扩增条件为:95℃预变性5 min后,进行下述循环:95℃、45 s,56℃退火45 s,72℃延伸92 s,32个循环。结果判读:每次扩增设置阴性和内参对照,阴性对照用灭菌蒸馏水,样本设三个复孔,取Ct平均值,所有扩增产物均经溶解曲线分析,采用比较2-△Ct法进行Tim-3的相对定量。

1.3.3 CEA 的测定 抽取2 m L 空腹静脉血,分离血浆,采用罗氏E601及配套试剂盒检测。

2 结果

2.1 两组Tim-3m RNA 表达水平的比较 病例组术前Tim-3 m RNA 表达水平显著高于对照组(t=9.78,P＜0.01),术后与对照组比较无统计学意义(t=1.49,P=0.141)。不同类型肺癌术前及术后比较均无统计学意义(F=1.32,0.61;P＞0.05)。

表1 两组Tim-3 m RNA 表达水平的比较(±s)

组别类型n术前术后病例组56 0.94±0.34 0.41±0.32导管癌 22 0.87±0.30 0.37±0.26腺 癌 26 1.03±0.38 0.46±0.37腺鳞癌 8 0.92±0.34 0.35±0.33对照组30 0.31±0.25

2.2 病例组PBMCs中Tim3 m RNA 的表达水平与CEA 的相关性分析Tim-3mRNA 与肺癌辅助诊断指标CEA 呈显著正相关(r=0.30,P＜0.01)。

3 讨论

有研究发现,Tim-3可与其配体半乳糖凝集素-9结合进而调节Th1、Th2、Th17及其他多种免疫细胞反应的免疫调控因子[2]。Tim-3在口腔癌、肾癌、肝癌、肺癌、结直肠腺癌等恶性肿瘤中异常表达[3-6];TIM-3也在单核-巨噬细胞、自然杀伤细胞以及树突状细胞中表达[7];Tim-3还通过提高调节性T 细胞扩增、抑制树突状细胞活化而产生肿瘤免疫逃逸[8]。本研究采用实时定量PCR 检测了肺癌患者术前、综合治疗后及健康对照组PBMCs中Tim-3的表达水平,结果发现Tim-3在肺癌患者外周血中的表达显著高于对照组,术后综合治疗后与对照组比较无统计学意义,且肺癌患者Tim-3的表达量与病理类型无关。其可能机制在于Tim-3在抗肿瘤的免疫过程中发挥负性调控作用,使肿瘤细胞发生免疫逃逸,有利于肿瘤在原位点向组织深层侵袭[9]。本研究还发现,肺癌患者PBMCs中Tim-3的相对表达量与其血浆CEA 的浓度显著正相关。肺癌患者综合治疗后Tim-3含量显著下降,提示Tim-3对肺癌的发生、发展发挥作用,对肺癌患者实行治疗能解除Tim-3的肿瘤免疫负调控,改善预后。

综上所述,Tim-3可作为监测肺癌患者治疗或预后评估的分子标志物,帮助临床评估肺癌患者。本研究不足之处在于实验对象较少,缺少随访数据,后续研究中进一步探讨。