粤北地区围产期孕妇 B 族链球菌感染情况及妊娠结局分析

黄文波，范舒舒，徐静，刘玉兰，陈惠英，张浔，马占忠

B 族链球菌（group B streptococcus，GBS）又称无乳链球菌，属革兰氏阳性球菌，是女性生殖道与肠道的条件致病菌[1]。全球 10% ～ 35% 的孕妇伴有 GBS 感染，可引起早产、胎膜早破、宫内感染等不良妊娠结局。其中约 50% 会引起新生儿肺炎、脑膜炎和败血症等疾病[2-3]。GBS 是导致孕产妇和新生儿感染的首要致病菌之一，严重威胁母婴健康[4-5]。研究显示，GBS 感染率在不同国家和地区的女性中有差异[6-7]。本研究旨在探讨粤北地区围产期孕妇 GBS 感染情况及对不良妊娠结局的影响，为 GBS 的临床诊疗提供科学依据。

1 对象与方法

1.1 对象和材料

1.1.1 研究对象 以 2021年 1 - 12月在广东省粤北人民医院就诊的 3082 例围产期孕妇为研究对象。年龄 18 ～ 47 岁，平均（29.88 ± 4.57）岁；孕周 35 ～ 37 周，平均（36.0 ± 0.7）周。

纳入标准：① B 超确认妊娠 35 ～ 37 周；②取样前 24 小时内无性生活、无阴道洗液及药膏处理等；③所有孕妇知情同意，自愿进行 GBS 检测。

排除标准：① 2 周内使用过抗生素；②妊娠合并糖尿病、高血压等疾病；③有严重心、肝、肾功能异常疾病；④有其他生殖道感染。

1.1.2 试剂与仪器 采用实时荧光定量 PCR 法检测 GBS。核酸提取试剂和 GBS 核酸检测试剂盒均购自福建泰普生物科学（中国）有限公司；CFX96荧光定量 PCR 仪为美国 Bio-Rad 公司产品。

1.2 方法

1.2.1 采集样本 参照美国疾病控制与预防中心发布的《围产期 GBS 预防指南》，对孕妇进行阴道及直肠分泌物取材[8]。孕妇取仰卧位，先擦去阴道内过多的分泌物，将无菌拭子在阴道 1/3 处轻轻旋转取得分泌物；再将另一无菌拭子插入肛门，在肛门括约肌以上 2 ～ 3 cm 处，沿肠壁轻轻旋转取得标本。将采集好的分泌物拭子放回无菌拭子管中，密封送检。

1.2.2 提取 DNA 采集的拭子管中加入 0.5 ml清洗液，充分振荡洗脱后将同一孕妇的阴道分泌物及直肠分泌物样本倒入同一个 1.5 ml 离心管，13 000 r/min 离心 5 min，弃上清；加入 1 ml 清洗液振荡重悬，13 000 r/min 离心 5 min，弃上清；加入 50 μl 清洗液重悬，样本管中各加入 1 管提取固形物，高速涡旋振荡 5 min，95 ℃ 干浴 2 min，13 000 r/min 离心 2 min，上清液用于 PCR 扩增。

1.2.3 GBS 基因扩增 PCR 反应体系：GBS-PCR反应液 44.3 μl，Taq DNA Polymerase 0.5 μl，UNG 0.2 μl，DNA 模板 5 μl，总体积 50 μl。PCR 反应条件：37 ℃，2 min；94 ℃，2 min；94 ℃，20 s，55 ℃，45 s，40 个循环；采集 FAM 和 Texas Red荧光信号。

1.2.4 结果判读 ①GBS 阴性：FAM 荧光通道循环阈值（cycle treshold，Ct）= 40，Texas Red（内参）Ct 值 ＜ 40，且有较好的对数增长曲线；② GBS阳性：FAM 通道 Ct 值 ≤ 33，且有较好的对数增长曲线；Texas Red 通道 Ct 值 ≤ 40。

1.3 统计学处理

采用 SPSS22.0 统计软件进行数据分析。计数资料以例数和率表示，组间比较采用 χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 围产期孕妇 GBS 感染情况

在 3082 例围产期孕妇中，实时荧光定量PCR 法检出 GBS 阳性 341 例，感染率 11.06%（341/3082）。GBS 阳性和阴性的荧光 PCR 扩增曲线如图1 所示。

图1 PCR 扩增曲线（A：GBS 阴性；B：GBS 阳性）Figure 1 PCR amplification curve (A: GBS negative; B: GBS positive)

孕妇按年龄段划分为 4 组，各年龄组 GBS阳性率见表1，各年龄组阳性率相比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05）。

表1 不同年龄组孕妇 GBS 阳性分布Table 1 The positive distribution of GBS among pregnant women in different age groups

2.2 GBS 感染对不良妊娠结局的影响

GBS 阳性孕妇中不良妊娠结局的发生率为32.55%（111/341），其中早产 16 例，胎膜早破54 例，宫内感染 21 例和产后出血 20 例。GBS阴性孕妇中不良妊娠结局的发生率为 15.18%（416/2741）。GBS 阳性孕妇早产、胎膜早破、宫内感染的不良妊娠发生率均显著高于 GBS 阴性孕妇，差异具有统计学意义（P＜ 0.01），两组间产后出血差异无统计学意义（P＞ 0.05），见表2。

表2 两组孕妇不良妊娠结局的比较[n（%）]Table 2 Comparison of adverse pregnancy outcomes between two groups of pregnant women [n (%)]

3 讨论

近年来，孕妇 GBS 感染所致的母婴安全问题受到越来越多的关注，有学者认为 GBS 对绒毛膜吸附和穿透力强，并通过产生蛋白水解酶和吞噬作用侵袭胎膜，导致胎膜早破[9]。另外，GBS 感染也会增加胎儿早产、宫内感染、呼吸窘迫、脑膜炎等不良结局，因此，有必要对妊娠期孕妇进行 GBS筛查，对 GBS 感染的孕产妇进行抗感染干预，有助于降低不良妊娠的发生[10]。

不同国家和地区报道的孕妇 GBS 感染率有较大差异。Russell 等[2]对 85 个国家的 299 924 名孕妇进行 Meta 分析报道：全球孕产妇 GBS 感染率约为 18%，存在区域差异（10% ～ 35%），南亚的感染率约 12.5%、东亚 11%。中国大陆孕妇 GBS感染率为 3.7% ～ 14.52%[6]。杨玉妮[7]对 252 207 名孕妇进行 Meta 分析报道：我国孕妇平均 GBS 感染率为 8.1%，其中中部地区为 9.3%、东部地区8.3%、西部地区 6.8%。广东省孕妇 GBS 感染率为 8.9%，江苏省 8.7%，浙江省 8.6%，陕西省5.2%，北京市 7.1%[11-13]。广东省内广州地区孕妇GBS 感染率为 6.3%[14]，深圳地区 4.5%[15]，佛山地区 10.15%[16]。2015年，郑海燕等[17]报道的韶关地区 GBS 感染率 5.60%。本研究采用荧光定量PCR 法检测粤北地区围产期孕妇 GBS 感染率为11.06%。高于全国平均水平（8.1%）和广东省平均水平（8.9%）。各地报道的孕妇 GBS 感染率存在较大差异，可能与检测方法、样本采集部位等因素有关。左麦红等[18]研究报道荧光定量 PCR 检测GBS 阳性率（6.41%）显著高于培养法（3.66%），直肠分泌物 GBS 阳性率（6.34%）显著高于阴道分泌物（3.10%）。国内的研究报道也基本一致认为PCR 法阳性率高于培养法，直肠分泌物的阳性率高于阴道分泌物[19-20]。肠源性感染是阴道感染的潜在途径，临床采样时应该阴道和直肠同时采样。美国CDC 围产期 GBS 预防指南指出对孕妇进行阴道分泌物和直肠分泌物标本的联合采集[8]。因此，推荐采用荧光定量 PCR 法同时检测阴道分泌物和直肠分泌物，提高 GBS 检出率，减少漏诊。

综上所述，粤北地区围产期孕妇 GBS 感染率较高，GBS 感染增加了不良妊娠结局的发生率，应对围产期孕妇开展 GBS 常规筛查和干预，减少不良妊娠结局的发生，提高母婴安全保障。