肺癌组织中USP3及FOXF1表达与临床特征的关系及其与肺癌组织EMT标识物的相关性

冯佳 袁傲 黄芳 章建国

肺癌是常见恶性肿瘤，一般起源于支气管黏膜上皮细胞，目前临床通过放化疗、手术、靶向治疗等延缓肺癌发展[1]。由于肺癌早期临床表现不明显，部分患者确诊时已发展为中晚期，癌细胞已发生转移，治疗难度较大，预后较差，因此，研究肺癌的转移机制对于肺癌的治疗具有重要意义[2]。细胞上皮间质转化（EMT）是指上皮细胞转化为具有间质表型细胞的过程，参与癌细胞的转移，有研究显示EMT 在癌细胞迁移、侵袭的时候显著增强，因此，了解肺癌细胞EMT 的机制是目前肺癌领域研究的重点[3-4]。EMT 标志物主要有上皮型钙黏附素（E-cardherin）及波形蛋白（Vimentin），目前科研人员致力于寻找更多与肺癌EMT 相关的因子，以探究肺癌细胞EMT。有研究发现，去泛素化酶3（ubiquitin-specific protease 3，USP3）在非小细胞癌中高度表达，能够参与非小细胞癌细胞增殖，促进非小细胞癌的发展[5]。叉头蛋白1（forkhead box F1，FOXF1）属于叉头框基因，在人体内通过转录作用，对多种基因的表达进行调控，在癌细胞的发生发展中起到重要作用[6]。本研究旨在探究USP3、FOXF1 的表达与肺癌细胞EMT 的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2016 年1 月-2019 年12 月南通大学附属医院收治的130 例肺癌患者的临床资料。纳入标准：（1）符合文献[7]《中华医学会肺癌临床诊疗指南（2019 版）》中肺癌的诊断标准，均进行影像学诊断，并确诊为肺癌；（2）均有病理诊断结果；（3）均首次确诊为肺癌。排除标准：（1）均为原发性肺癌；（2）术前进行过放疗或辅助化疗；（3）精神类疾病；（4）凝血功能障碍；（5）免疫系统疾病；（6）既往有肺部疾病手术史。男69 例，女61 例，年龄40～80 岁，平均（66.57±7.87）岁，临床分期：Ⅰ期33 例，Ⅱ期33 例，Ⅲ期64 例，病理类型：鳞癌64 例，腺癌46 例，小细胞癌20 例。本研究已经医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法（1）FOXF1、USP3 表达情况：采用免疫组化法检测FOXF1、USP3 的表达，切片中出现棕褐色或棕黄色颗粒视为阳性细胞，无色、黄色、棕黄色及棕褐色分别为0～3 分：阳性细胞占0～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%分别为1～4 分，总分≥3 分视为阳性表达，＜3 分视为阴性[8]。（2）E-cadherin 阳性：切片中出现棕黄色颗粒为阳性细胞（细胞膜或细胞浆），阳性细胞占比≥10%，视为表达阳性。Vimtemin 阳性：切片中出现棕黄色颗粒为阳性细胞（细胞膜或细胞浆），500 个细胞中，阳性细胞占比≥10%，视为表达阳性[9-10]。

1.3 统计学处理 应用SPSS 22.0 分析，计量资料用（x-±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验；等级资料比较采用秩和检验；采用Spearman 分析USP3、FOXF1 表达与EMT 标识物的相关性。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 USP3、FOXF1 在肺癌及癌旁组织中的表达情况 肺癌组织的USP3 及FOXF1 阳性表达率均高于癌旁组织（P＜0.05），见表1。

表1 USP3、FOXF1在肺癌及癌旁组织中的表达情况[例（%）]

2.2 肺癌组织中USP3 及FOXF1 表达与临床特征的关系 不同USP3 及FOXF1 表达情况患者的性别、年龄及病理类型比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同USP3 及FOXF1 表达情况患者的临床分期比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2、3。

表2 USP3表达与临床特征的关系[例（%）]

表2 （续）

表3 FOXF1表达与临床特征的关系[例（%）]

表3 （续）

2.3 肺癌组织EMT 标识物表达情况 130 例肺癌组织样本中Vimentin 阳性81 例，阳性表达率为62.31%，E-cadherin 阴性90 例，阴性表达率为69.23%。

2.4 USP3、FOXF1 表达与EMT 标识物的相关性分析经Spearman 相关分析，USP3、FOXF1 与Vimentin 均呈正相关，USP3、FOXF1 与E-cadherin均呈负相关（P＜0.05），见表4。

表4 USP3、FOXF1表达与EMT标识物的相关性分析

3 讨论

近年来，肺癌的发病率呈上升趋势，导致其死亡率不断升高，有研究显示，约80%的死亡病例均发生了不同程度的癌细胞转移，因此了解肺癌转移机制对于肺癌的早期诊断、治疗及其预后均有积极作用[11]。目前关于肺癌细胞转移的机制尚无确切定论，由于EMT 参与癌细胞转移，其逐渐成为肺癌细胞转移机制研究的热点[12]。近年来，研究发现FOXF1 与结直肠癌及乳腺癌的疾病发展密切相关，有研究显示，FOXF1 通过SNAI1 的转录激活诱导EMT 在结直肠癌细胞转移中起关键作用[13]。USP3则在胃癌的发展及预后，胶质母细胞瘤的EMT 中发挥重要作用，因此推测FOXF1、USP3 在肺癌的发展及EMT 中具有一定作用[14-15]。目前关于USP3、FOXF1 的表达与肺癌细胞EMT 关系的研究较少，本文对此进行探究，以期为肺癌的治疗提供新的研究方向。

130 例肺癌组织标本中USP3 及FOXF1 阳性表达率分别为92.31%、86.15%，癌旁组织中分别为31.54%、29.23%，其中肺癌组织的USP3 及FOXF1阳性表达率均高于癌旁组织，提示USP3 及FOXF1在肺癌组织中表达明显。不同USP3 及FOXF1 表达情况患者的临床分期比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。表明USP3、FOXF1 表达与肺癌的临床分期具有相关性。分析原因为，USP3 具有促进细胞凋亡，调节细胞增殖、发育等作用，USP3在胃癌、肝癌等多种癌症中均呈异常高度表达[16]。FOXF1 是叉头基因的一种，通过转录因子对多种靶向基因进行调控，并参与肿瘤的形成。E-cardherin是EMT 相关蛋白的一种，有研究显示，E-cardherin是FOXF1 的靶点之一，FOXF1 沉默后，E-cardherin表达上调，同时Vimtemin 蛋白表达下调，从而抑制EMT 形成，抑制癌细胞的侵袭能力[17-18]。本研究结果显示USP3 及FOXF1 在肺癌组织中表达明显，且与临床分期有关，而EMT 则在癌细胞的转移中发挥重要作用，因此推测USP3、FOXF1 与肺癌细胞EMT 存在某种联系。为进一步探究USP3、FOXF1与肺癌细胞EMT 的关系，本研究对130 例肺癌组织样本中EMT 指标进行检测，其中Vimentin 阳性表达率为62.31%（81/130），E-cadherin 阴性表达率为69.23%（90/130），经Spearman 相关分析，USP3、FOXF1 与Vimentin 均呈正相关，USP3、FOXF1 与E-cadherin 均呈负相关（P＜0.05）。由于Vimtemin表达阳性且E-cadherin 表达阴性视为EMT，因此USP3、FOXF1 的表达与EMT 密切相关。部分研究也得到类似的结论，如在口腔癌中，FOXF1 与E-cadherin 呈负相关，与本研究结果相符[19-20]。

综上所述，USP3、FOXF1 在肺癌组织中表达明显，与肺癌患者临床分期具有一定的联系，同时USP3、FOXF1 与Vimtemin 和E-cadherin 具有明 显的相关性，与肺癌的发展密切相关。本研究结果显示，USP3、FOXF1 有可能是肺癌药物治疗的新靶点，为肺癌的药物研究提供新的研究思路。