哮喘合并肺炎支原体感染患儿血清CD4+/CD8+、IL-5、维生素D对肺功能的影响

孙先琳，刘冬阳，罗兵兵，尹显源，王君霞，姚 浩

(西部战区总医院1.儿科；2.血液内科，四川 成都 610000)

哮喘是临床上较常见的一类呼吸道疾病，其发病机制复杂，与气道慢性炎症、呼吸道感染、气道高反应等多因素相关，发病率较高[1]。肺炎支原体(mycoplasma pneumonia，MP)为呼吸道感染的主要病原微生物，其感染多发于小儿。10%～40%的小儿社区获得性肺炎因MP引发[2]。有研究认为，MP能诱导炎性细胞增殖促进炎症因子释放，加剧哮喘患儿病情[3]。另有报道显示，MP感染继发支气管哮喘发病率呈显著攀升态势[4]。但目前二者具体关系尚未完全探明，T淋巴细胞亚群被认为在哮喘发病过程中扮演关键角色。而维生素D属于脂溶性维生素，主要在免疫应答过程发挥作用，并且已有维生素D治疗儿童呼吸道感染的相关报道[5]。既往研究表明，白细胞介素-5(interleukin-5，IL-5)在MP感染患者血清中较高，可能由于IL-5是参与哮喘合并MP患儿呼吸系统喘息症状的主要细胞因子[6]。为此，本研究观察并分析了哮喘合并MP感染患儿的血清CD4+/CD8+、IL-5、维生素D水平，以期为该类患儿的临床治疗提供可靠的理论依据。

1研究对象与方法

1.1研究对象

选取2019年7月至2021年7月西部战区总医院儿科收治的哮喘患儿120例，根据MP抗体检测结果将其分为MP感染组69例与未感染组51例。参考相关标准诊断：MP抗体检测结果呈阳性，血清MP-免疫球蛋白M(IgM)滴度>1/80[7]。另外纳入同期体检健康儿童40例作为对照组。

纳入标准：①年龄<12岁；②符合临床对小儿支气管哮喘的诊断标准[8]；③患儿及其家属对研究内容了解知情，并签署同意书。排除标准：①既往MP感染史；②支气管畸形；③其他因素引发哮喘，如异物吸入等；④合并恶性肿瘤；⑤近期有药物治疗史；⑥凝血功能障碍。本研究符合《世界医学会赫尔辛基宣言》的相关原则。本研究经我院伦理委员会审核并批准通过。

1.2方法

全部受试小儿于2021年8月2日入组后进行各项指标的检测。

1.2.1 T淋巴细胞亚群的检测

分别抽取所有受试小儿的外周血4mL，送至本院检验科，加入4mL外周血淋巴细胞分离液(Ficoll)(国药公司提供)于15mL离心管，经肝素抗凝后缓慢加至离心管，使用低速离心机(蜀科TDZ4-WS)于室温中以1 500r/min离心20min，将单核细胞层吸出，移至新的15mL离心管，得到外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)。用2支流式细胞仪试管分别按CD4和CD8标记，然后使用1mL重悬细胞清洗PBMC细胞2次，调整细胞密度为1×106个/mL，将其分为2份，每份100μL，加入鼠抗人CD4-FITC抗体和CD8-FITC抗体(美国BD公司提供)各5μL混匀，室温下避光孵育20min，加入200μL红细胞裂解液(美国BD公司提供)，加入2mL磷酸盐缓冲液(PBS)，以1 500r/min离心5min，舍弃上清液，加入0.5mL PBS，通过流式细胞仪(美国贝克曼库尔特有限公司，EPICS-XL型)检测CD4+T、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值。

1.2.2 IL-5、维生素D、超敏C反应蛋白和IgG水平的检测

使用全自动酶标仪(赛默飞公司，multiskan)，采用酶联免疫吸附法检测受试小儿的IL-5、维生素D、超敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein，hs-CRP)水平，采用免疫比浊法检测免疫球蛋白G(IgG)水平，试剂盒为美国贝克曼库尔特有限公司配套生产。严格按照仪器、试剂盒说明书步骤进行操作。

1.2.3肺功能指标的检测

使用肺功能测定仪(耶格Master screen Diff+body)对所有受试小儿肺功能指标进行检测，包括用力肺活量(forced vital capacity，FVC)、潮气量(tidal volume，Vt)、潮气呼气峰流速(tidal peak expiratory flow rate，PTEF)。

1.3统计学方法

2结果

2.1三组小儿的一般资料

三组小儿的性别分布及年龄和体质量指数比较差异均无统计学意义(P>0.05)，感染组与未感染组的哮喘程度分布比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 三组小儿一般资料的比较Table 1 Comparison of general data of the children among the three

2.2三组小儿的T淋巴细胞亚群情况

三组小儿的CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+及IgG水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)；感染组和未感染组的CD4+T、CD4+/CD8+均明显低于对照组，而CD8+T、IgG水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；感染组的CD4+T、CD4+/CD8+均明显低于未感染组，而CD8+T、IgG水平均明显高于未感染组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 三组小儿T淋巴细胞亚群检测结果的比较Table 2 Comparison of serum levels of T-lymphocyte subsets of the children among the three

2.3三组小儿的IL-5、维生素D、hs-CRP水平情况

三组小儿的IL-5、维生素D、hs-CRP水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)；感染组和未感染组的维生素D水平均明显低于对照组，而IL-5、hs-CRP水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；感染组的维生素D水平明显低于未感染组，而IL-5、hs-CRP水平均明显高于未感染组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 三组小儿IL-5、维生素D、hs-CRP水平的比较Tabel 3 Comparison of serum levels of IL-5,vitamin D and hs-CRP of the children among the three

2.4三组小儿的肺功能指标

三组小儿的FVC、Vt和PTEF水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)；感染组和未感染组的FVC、Vt、PTEF水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；感染组的FVC、Vt和PTEF水平均明显低于未感染组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 三组小儿肺功能指标的比较Table 4 Comparison of pulmonary function parameters of the children among the three

2.5哮喘合并MP患儿CD4+/CD8+、IL-5、维生素D与肺功能指标的相关性

经Pearson法分析显示，哮喘合并MP患儿的CD4+/CD8+和维生素D分别与FVC、Vt和PTEF呈正相关(P<0.05)，而IL-5和IgG及hs-CRP分别与FVC、Vt、PTEF呈负相关(P<0.05)，见表5。

表5 哮喘合并MP患儿CD4+/CD8+、IL-5、维生素D与肺功能指标的相关性分析Table 5 Correlations of CD4+/CD8+,IL-5 and vitamin D with pulmonary function parameters in asthmatic children with MP infection

3讨论

MP已被众多研究认为是引起青少年儿童呼吸道疾病和肺病变的病原体，MP感染发病率逐年上升[9]。国外研究表明，MP感染是导致儿童喘息发作的原因之一[10]。越来越多的学者开始研究MP感染与儿童哮喘之间的关系。有研究表明，MP感染肺炎患儿体内T淋巴细胞亚群失衡[11]；也有研究认为IL-5高水平可表现为慢性炎症及气道高反应[12]。

3.1 T淋巴细胞亚群对哮喘合并MP感染的影响

本研究显示，感染组患儿的CD4+T、CD4+/CD8+比值均明显低于未感染组和对照组，而CD8+T、IgG水平均明显高于未感染组和对照组，提示哮喘合并MP感染患儿体内T淋巴细胞亚群失衡。T淋巴细胞亚群的CD4+T、CD8+T作为细胞免疫的效应细胞，其计数值及CD4+/CD8+比值反映了小儿细胞免疫的状态，而CD4+/CD8+比值下降可能是MP感染后哮喘患儿免疫功能下降的主要原因；另外，IgG由B细胞诱导分化形成，其水平上调则可能进一步说明MP感染患儿体内存在Th1/Th2失衡现象。江静等(2021年)研究指出，MP侵袭人体激活免疫系统，免疫功能指标异常导致功能被抑制，使得机体抵抗力下降。这与本研究结果较为吻合，说明MP感染哮喘患儿的免疫功能受到抑制。

3.2 IL-5、维生素D、hs-CRP水平对哮喘合并MP感染的影响

本研究显示，感染组患儿的IL-5、hs-CRP水平均明显高于未感染组和对照组，但维生素D水平明显低于未感染组和对照组，提示哮喘合并MP感染患儿炎症反应较明显，IL-5和维生素D水平异常。IL-5通过刺激B细胞分化来抑制辅助性T细胞活性，介导体液免疫应答，而维生素D的活性代谢物1,25-(OH)2D3与机体免疫调节有紧密联系[13]。维生素D水平降低可能导致呼吸道黏膜变性、增生，引发炎症反应，最终造成肺组织损伤。有研究显示，哮喘合并MP感染患者的IL-5水平明显高于常人，且维生素D水平亦有所下降[14]。这与本研究结果一致。

3.3肺功能指标对哮喘合并MP感染的影响

本研究显示，感染组、未感染组和对照组小儿的肺功能存在明显差异，感染组患儿的FVC、Vt、PTEF水平均明显低于未感染组和对照组，未感染组患儿的FVC、Vt、PTEF水平均明显低于对照组，提示哮喘患儿肺功能相比正常儿童有所下降，其中哮喘合并MP感染患儿肺功能明显受损。分析其原因，可能是MP感染破坏了呼吸道纤毛结构，形成空泡，消耗大量葡萄糖，感染细胞表面脱落，大量炎性因子聚集发生炎症反应，造成气道壁增厚、管腔狭窄，损伤患儿肺功能。但吾曼莉等[15]研究显示，MP感染合并支气管哮喘的患者与健康者的肺功能比较无差异，与本研究结论不同，推测可能是患者均属于成年人，与本研究中小儿呼吸道发育状况尚存差异，并且该研究样本量仅有120例，具体关系仍有待之后大样本量研究予以证实。

3.4哮喘合并MP患儿的CD4+/CD8+、IL-5、维生素D与肺功能指标的相关性

本研究显示，哮喘合并MP患儿的CD4+/CD8+和维生素D与肺功能指标均呈正相关，而IL-5、IgG、hs-CRP与肺功能指标均呈负相关，提示CD4+/CD8+、IL-5、IgG、hs-CRP和维生素D与肺功能均具有相关性。有研究显示，CD4+/CD8+与MP感染、疾病严重程度相关[16]。分析其原因，MP感染可能导致哮喘患儿CD4+/CD8+比值下降，同时炎症反应加剧，IL-5和维生素D水平异常，损伤患儿肺功能。

综上所述，哮喘合并MP患儿存在明显的T淋巴细胞亚群紊乱、维生素D缺乏，以及较明显的炎症反应，因此应及时给予患儿免疫调节，并进行相关因子的检查，以保护患儿肺功能，防止病情发展。