多发性硬化症患者外周血辅助性T细胞17、调节性T细胞及其相关炎症因子和血清铁蛋白水平变化

裴利宏，王国戗

(新乡医学院第一附属医院检验科，河南 卫辉 453100)

多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)通常被认为是遗传易感性和包括肥胖、饮食、生活习惯等各种环境因素相互作用导致的神经免疫炎性损伤[1-2]。病理表现为 T淋巴细胞介导的多种炎症因子参与、最终导致机体免疫功能异常的一种中枢神经系统免疫性炎症性疾病，主要累及脊髓和大脑白质，常伴有神经脱髓鞘、轴突丧失[3-4]。目前，MS的确切病因尚不完全清楚，本研究旨在探讨辅助性T细胞(helper T cell,Th)17、调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)及其相关炎症因子和血清铁蛋白水平在MS发生发展中的变化和临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2018年1月至2021年12月新乡医学院第一附属医院神经内科收治的46例MS患者为MS组，其中男29例，女17例；年龄16～70(56.3±13.8)岁，体质量指数25.1～33.4(27.8±2.6)kg·m-2；复发进展期18例，缓解期28例；所有患者符合MS诊断标准[5]，并排除其他病原体感染、自身免疫性疾病等。另选择同期体检健康者46例为对照组，其中男27例，女19例；年龄 18～70(57.1±12.2)岁，体质量指数25.3～33.7(28.2±2.7)kg·m-2。2组受试者的性别、年龄及体质量指数比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究通过医院医学伦理委员会批准(批准文号：20180105)，所有受试者签署知情同意书。

1.2 检测指标抽取所有受试者晨起空腹肘静脉血3 mL，3 000 r·min-1离心5 min，取上层血清，采用免疫比浊法检测血清铁蛋白水平(试剂盒购自北京九强生物技术有限公司)，磁微粒化学发光法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平(试剂盒购自北京热景生物技术股份有限公司)，严格按照试剂盒说明书操作。抽取所有受试者晨起空腹肘静脉血3 mL，置于乙二胺四乙酸二钾抗凝管，采用流式荧光法检测Th17细胞和Tr细胞水平(Navios 流式细胞仪及配套试剂购自美国贝克曼库尔特公司)，并计算Th17细胞与Tr细胞的比值(Th17/Tr)。

2 结果

2.1 2组受试者外周血Th17、Tr细胞水平及Th17/Tr比较结果见表1。MS组患者外周血Th17细胞水平及Th17/Tr显著高于对照组，Tr细胞水平显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；复发进展期MS患者外周血Th17细胞水平及Th17/Tr显著高于缓解期患者，Tr细胞水平显著低于缓解期患者，差异有统计学意义(P<0.05)；缓解期MS患者外周血Th17、Tr细胞水平及Th17/Tr与对照组受试者比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 2组受试者外周血Th17、Tr细胞水平及Th17/Tr比较

2.2 2组受试者血清TNF-α、IL-6和铁蛋白水平比较结果见表2。MS组患者血清TNF-α、IL-6水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；2组受试者血清铁蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。复发进展期MS患者血清TNF-α、IL-6水平显著高于缓解期患者，差异有统计学意义(P<0.05)；复发进展期与缓解期MS患者血清铁蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。缓解期MS患者血清TNF-α、IL-6和铁蛋白水平与对照组受试者比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 2组受试者血清TNF-α、IL-6和铁蛋白水平比较

2.3 MS患者外周血Th17、Tr细胞水平及Th17/Tr与血清TNF-α、IL-6水平的相关性结果见表3。MS患者外周血Th17/Tr与血清TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)，MS患者外周血Th17、Tr细胞水平与血清TNF-α、IL-6水平无显著相关性(P>0.05)。

表3 MS患者外周血Th17、Tr细胞水平及Th17/Tr与血清TNF-α 、IL-6水平的相关性

3 讨论

MS的病因目前尚不清楚，肥胖、饮食结构、体育锻炼等因素近年来备受研究者关注[6-9]，其中肥胖可导致机体内铁代谢的异常，铁是人体代谢必需的微量元素，但过多的铁可以通过调节自由基的释放对人体组织和器官造成损伤，继而导致多种脏器病变。铁主要以铁蛋白的形式储存，因此，血清铁蛋白水平可以反映机体内铁的整体代谢状态。研究显示，MS患者中枢神经系统灰质内铁蛋白过量沉积[10]。究竟是铁蛋白在脑实质局部沉积导致神经脱髓鞘病变，还是脱髓鞘后神经膜损伤导致铁蛋白沉积，目前尚存在争议，但脑组织局部铁蛋白的沉积可能会影响疾病的迁延、复发及慢性化过程[11]。本研究结果显示，2组受试者血清铁蛋白水平比较差异无统计学意义，复发进展期与缓解期MS患者血清铁蛋白水平比较差异亦无统计学意义；提示MS患者脑组织内铁过量沉积与机体整体铁的代谢状态无相关性，因此，铁蛋白在脑组织内过度沉积与MS发生发展的关系还有待进一步研究。

不管是遗传还是肥胖、饮食习惯、生活方式等因素，大多数情况下均通过调节免疫细胞、激活免疫系统进而影响机体。MS在病理机制上呈现出具有时间多发性与空间多发性特征的慢性中枢神经系统炎症、免疫性脱髓鞘疾病，其病理过程主要是脱髓鞘改变、轴索损伤及炎症细胞浸润，临床表现以中枢神经系统累及的部位不同而呈现多样性。Th17细胞是一种不同于Thl和Th2的免疫细胞，其具有强大的促炎作用。Th17细胞与Tr细胞有密切联系，二者在功能方面相互拮抗，而在分化过程中却具有同源性，二者的数量及功能异常可导致机体免疫功能异常，最终参与某些疾病的发生发展过程。本研究结果显示，MS组患者外周血Th17细胞水平及Th17/Tr显著高于对照组，Tr细胞水平显著低于对照组；复发进展期MS患者外周血Th17细胞及Th17/Tr显著高于缓解期患者，Tr细胞水平显著低于缓解期患者；提示MS患者机体内Th17细胞与Tr细胞的比例失衡，免疫功能异常，且与MS的病情程度有关。有研究显示，机体内Th17细胞过量可能是造成MS患者血-脑脊液屏障损伤的因素之一，在中枢神经系统内Th17细胞数量的局部增加亦可诱发神经炎症[12]。近年来，针对MS患者开展的自体造血干细胞移植可重建正常的免疫系统功能，循环系统中自身反应性、效应性Th17减少，新的胸腺T细胞出现，使机体内环境得以重新恢复[13]，且体内存在较强的活性免疫炎症状态的MS患者受益更大[14]，这在一定程度上也证实免疫活性失衡在MS发生发展中的作用。

细胞因子在免疫炎症疾病中发挥调节免疫反应及炎症反应的多重性作用，Th17细胞通过分泌 IL-17 参与固有免疫和某些炎症反应的发生，招募中性粒细胞，促进多种炎症因子的释放。Tr细胞是一类特异性表达转录因子、具有免疫负性调节功能的CD4+T细胞，其可通过分泌抑制性炎症因子而发挥抗炎和维持自身免疫耐受的作用[15]。本研究结果显示，MS组患者血清TNF-α、IL-6水平显著高于对照组，复发进展期MS患者血清TNF-α、IL-6水平显著高于缓解期患者，且MS患者外周血Th17/Tr与血清TNF-α、IL-6水平均呈正相关，可见相关细胞因子的分泌水平与MS病理状态是相伴随的，提示MS患者Th17细胞与Tr细胞的比例失衡及相关炎症因子水平异常在MS的发生发展起一定的作用。

综上所述，Th17细胞与Tr细胞的比例失衡可能在MS的免疫病理过程中发挥重要作用，Th17细胞和Tr细胞的比例升高会诱导TNF-α、IL-6等炎症因子表达，过表达的炎症因子会促进炎症反应迁延不断，因此，Th17细胞与Tr细胞比例失衡及相关炎症因子水平异常可能与MS的发生发展有关。