血清IL-17、HMGB1的水平与原因不明复发性流产患者发病及Th17/Treg细胞免疫失衡的关系①

郑为强

(福清市妇幼保健院，福建 福清 350300)

复发性流产是指孕妇在妊娠的过程中，连续性3次或者3次以上的流产情况，造成以上原因是患者自身存有内分泌混乱，感染，遗传等[1]。而原因不明复发性流产中会有大约50%的患者发病原因不详，临床将其命名为原因不明复发性流产(recurrentspontaneous abortion,URSA)。随着研究的深入，发现URSA是因为孕妇在妊娠早期母体对胎儿产生一定的免疫反应造成，最明显的为免疫反应为辅助性T 细胞17(Thelper cell 17,Th17)，Treg，以上细胞在母体内和胎儿之间，相互影响以及作用，随之出现免疫耐受，并产生免疫排斥，TH17，Treg失衡；高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein 1，HMGB1)、晚期糖基化终产物属于免疫炎性反应较强的因子，参与到机体内炎性反应，让体内的炎性反应加剧[2,3]，为更好的进行治疗，需分析出有效治疗方案，基于以上的背景资料，本文针对本院2020-03～2021-03进行收治的原因不明复发性流产患者34例以及健康孕妇34例进行分析，评定HMGB1的水平和URSA患者发病、Th17/Treg细胞免疫失衡之间的联系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2020-03～2021-03选取于本院收治的原因不明复发性流产患者34例作为研究对象，列为研究组，年龄22～36岁，平均(28.03±5.56)岁，孕周8～14周，平均(11.21±1.02)周；另外选取健康孕妇34例列为参照组，年龄22～37岁，，平均(28.56±5.89)岁，孕周9～13周，平均(11.05±1.13)周。两组年龄及孕周相比，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

患者住院后，在空腹状态下，采集静脉血液5mL，将其加入抗凝管内，并且用离心机进行离心，以此获得外周血单细胞，并制作成细胞液悬液，再利用Th17细胞流式检测盒测定患者Th17、Treg，并且计算出Th17/Treg。血液样本通过高速离心机进行离心，以此得到血清，并且采用酶联免疫吸附法检测HMGB1，晚期糖基化终产物，白细胞介素-6(Interleukin 6 ，IL-6), 白细胞介素-17(Interleukin 7，IL-17), 白细胞介素-10(Interleukin 10，IL-10)，所有的检测步骤严格按照要求进行。

1.3 观察指标

记录和分析组内HMGB1、Th17/Treg、晚期糖基化终产物、Th17、Treg、组内IL-6、IL-17、IL-10、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)含量。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 HMGB1、Th17/Treg、晚期糖基化终产物、Th17、Treg对比

研究组HMGB1、晚期糖基化终产物，Th17、Th17/Treg含量高于参照组，研究组Treg含量低于参照组，组间对比存有同质性(P<0.05)，见表1。

表1 两组HMGB1、Th17/Treg、晚期糖基化终产物、Th17、Treg对比

2.2 IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β含量比较

研究组IL-6、IL-17高于参照组，研究组IL-10、TGF-β含量低于参照组，组间存有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β含量比较

2.3 HMGB1和其它疾病的指标关系

血清IL-17、HMGB1与URSA呈现出正相关性(r=0.522，P<0.05)；HMGB1和Th17、Th17/Treg、晚期糖基化终产物、IL-6、IL-17呈现出正相关性(r=0.457、0.490、0.530、0.400、0.440，P均<0.05)；和Treg、IL-10、TGF-β呈现出负相关性(r=-0.554、-0.526、-0.440，P均<0.05)。

3 讨论

近些年复发性流产患者增加，其中以不明原因自发性流产居多，对女性身心健康造成影响，不利于正常妊娠和分娩[4]。对于自发性流产的病因随着深入了解可知，患者自身的免疫学因素和复发性流产病理之间存在联系。母体和胚胎之间接触的位置在医学上称为母胎界面，正常健康妊娠孕妇母胎界面会存在一定量的免疫细胞，一般情况下，免疫细胞会按照适当的比例进行分布，形成独特免疫耐受屏障[5]，有助妊娠，确保胎儿能够正常分娩。但在某些病理的影响，母胎界面的免疫数量以及功能会出现变化，例如体内的炎性细胞因子增加，会改变孕妇自身的免疫反应，提高孕妇感染率，自身免疫性疾病等，不利于正常妊娠，也无法正常给子宫胚胎供应营养，导致妊娠失败，复发性流产[6]。

HMGB1属于可广泛分布在哺乳动物细胞内的高度保守和蛋白，拥有较强的晚期促进炎症等表现，近年研究中发现，HMGB1多参与到机体组织细胞DNA复制，转录，重组以及修复的过程中，在机体免疫炎性反应中具有重要的作用，在病理性妊娠患者体内就会看到HMGB1异常，当处于子痫前期，胎盘器官表现出缺氧等情况时则可释放到母体循环当中，而早期植入本身就是可导致炎症因子分泌释放的一个重要的原因。根据研究报道可知，当机体反复合并出现炎症性刺激也被归为早期植入失败的最主要原因，同时炎症反应的发生发展可导致非常高浓度的HMGB1暴露在母胎界面[7]，继而出现复发性流产，出现妊娠的失败。同时随着相关报道的增加，也证实了HMGB1一般在损伤、感染、缺氧等应激状态下作为炎症因子和损伤相关分子模式分子发挥多种作用，但近期研究发现机体在无感染的状态下，HMGB1 也会发挥较强的促进作用。另外，也有研究报道发现，HMGB1在胎儿炎症反应中起到重要的调节作用。所以需要分析HMGB1的水平和Th17/Treg平衡关系，为后续治疗提供参考。近年来，临床资料显示[8]，Treg细胞机体当中一种具有较强免疫调节功能的细胞群，在人体内可发挥较强的免疫抑制作用，Treg还可对Th1/Th2平衡开始向着Th2偏倚。也有相关学者研究证实发现，Treg的细胞缺失也会导致母体对胎儿免疫排斥等，导致妊娠结局较差或者是复发性流产的发生。由此可说明Treg一旦在机体内数量及功能存在缺失的情况也会导致并加重URSA的发生及发展。Th17细胞则是一种近年来所发现的具有较强抗炎作用的CD4+T细胞，该指标在URSA中的报道相对较少[9]。现我院就HMGB1的水平和原因不明复发性流产(URSA)患者发病、Th17/Treg细胞免疫失衡之间的联系进行探讨及分析，旨在为该病的发病机制提供基础。

本次实验数据证实，研究组HMGB1、晚期糖基化终产物，Th17、Th17/Treg含量高于参照组，研究组Treg含量低于参照组；研究组IL-6、IL-17高于参照组，研究组IL-10、TGF-β含量低于参照组，组间存在差异(P<0.05)，其说明了不明原因复发性流产患者体内的HMGB1、Th17、Th17/Treg、IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β含量和正常孕妇对比，会有变化，体内的Th17会过度表达，对Treg表达产生阻抑，体内形成了过度免疫耐受，Th17和Treg比例失衡，导致失衡；URSA患者体内的HMGB1的水平也会出现升高的迹象，HMGB1的水平会在TH17细胞促进炎性细胞因子的释放，让TH17细胞和相关性细胞因子中的IL-6、IL-17上升，呈现正相关；HMGB1会在Treg细胞中产生作用，并且参与免疫阻抑因子的调控，让Treg和其它相关的细胞因子随着HMGB1上升而减少。HMGB会对TH17和Treg进行调整，打破了Th17/Treg平衡，且HMGB1会和体内的晚期糖基化终产物进行结合，参与到机体内的免疫炎性反应。

综上所述，URSA患者HMGB1的水平和Th17/Treg存在一定的平衡联系，一旦患者的HMGB1的水平和Th17/Treg失衡，就会造成URSA的发生。在今后的研究中可进一步的扩大样本量，增加观察指标，以此更好的探讨URSA患者的临床优势性。