CYP2C19基因多态性对艾司唑仑在人体内药动学的影响①

李 琪，张 涛

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003；2.佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007)

艾司唑仑为苯二氮卓类抗焦虑药，对慢性失眠、焦虑，抑郁症、恐惧、抗癫痫及抗惊厥也有效[1]。苯二氮卓类药物中阿普唑仑、三唑仑、咪达唑仑由CYP3A4代谢，CYP2C19、CYP3A4基因多态性与艾司唑仑的药动学特征有密切联系[2]。研究表明，艾司唑仑在肝脏中主要由CYP3A4代谢，生成4-羟基艾司唑仑，活性与艾司唑仑基本相似[3]。但CYP3A4在中国人中突变率很低。CYP3A占CYP450家族的30%[4]。CYP2C19*2和CYP219*3是CYP2C19基因突变的主要类型。中国人群的突变率分别为32.18%、3.16%[5]。基因多态性对药物代谢底物的药动学及药效学有一定的影响。本论文通过探讨CYP2C19基因多态性对艾司唑仑药代动力学的影响，更全面的阐述在人体内艾司唑仑血药浓度个体差异性的原因。

1 材料与方法

1.1 试药与仪器

艾司唑仑、地西泮(中国药品生物制品检定所)，甲醇和乙腈为色谱纯。DNA提取纯化试剂盒，CYP2C19基因分型试剂盒。P230 II高效液相色谱仪，S1000 PCR扩增仪，Tacon360凝胶成像分析仪，PowerPac TM 通用电泳仪。

1.2 血样采集

选出符合药动学实验标准的39例健康受试者，实验前一天夜间禁食12h以上，次日清晨空腹口服艾司唑仑2mg，温水送服。在服药前和服药后0.5、1、2、2.5、3.5、5.5、7.5、10、12、24、36h取肘静脉血4mL，其中2mL置无抗凝剂的真空管中，分离出血浆保存备用，24h内进行血药浓度测定。另2mL置 EDTA抗凝采血管中-40℃保存，采用PCR-RFLP法对受试者的血液进行基因分型检测。

1.3 标准溶液及血浆样品的制备

艾司唑仑和地西泮分别精密称定24.8mg和5.0mg， 溶于100mL和50mL甲醇中。取5mL置50mL和25mL甲醇中，得到0.0248mg·mL-1艾司唑仑标准溶液和0.02mg·mL-1的地西泮内标溶液。取血浆0.5mL，加艾司唑仑标准液10μL，地西泮内标液25 μL。经漩涡离心后，取4 mL于玻璃试管内，50℃下N2气流吹干，甲醇溶解，作为血浆样品溶液。按相同方法制备不含艾司唑仑和地西泮的空白对照溶液。

1.4 基因分型检测

取受试者肘静脉血4mL，用DNA提取试剂盒进行提取。采用PCR-RFLP方法，进行CYP2C19 基因型分析，包括野生型(wild-type*1)和2种突变型等位基因(CYP2C19*2、CYP2C19*3)。根据CYP2Cl9基因型将健康受试者分为纯合子强代谢型(*1/*1，homEM)、杂合子强代谢型(*1/*2 或*1/*3，hetEM)和弱代谢型(*2/*2 或*2/*3，PM )。

1.5 药动学和统计学方法

2 结果

2.1 色谱条件及专属性试验

色谱柱：Hypersil ODS2 C18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(28：28：44)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：230nm；柱温：35℃；进样量：20μL。

血浆中艾司唑仑保留时间为7.17min，地西泮的保留时间为13.12min，峰形分离良好，内源性杂质对样品峰的含量测定没有干扰，见图1。

图1 艾司唑仑和内标色谱图

2.2 线性关系与最低定量限

加入艾司唑仑标准液分别为2、6、10、14、18、22、26、52μL，计算标准浓度(X)对其峰面积与内标峰面积比值(Y)的线性回归，线性范围为0.0494μg·mL-1～1.289μg·mL-1，定量下限为0.0494μg·mL-1，见图2。

图2 线性关系图

2.3 精密度及稳定性试验

以地西泮为内标，用空白血浆配制艾司唑仑浓度0.397μg·mL-1、0.249μg·mL-1、0.099μg·mL-1各5份，经计算日内及日间精密度RSD<15%，提取回收率>70%，RSD<10%。于0h、24h、48h取样，稳定性RSD%为5.85、10.55和9.13，结果表明艾司唑仑稳定性良好。

2.4 不同基因型的药动学特征的比较分析

图3 CYP2C19基因型hetEM和PM分组的药-时曲线

2.5 药代动力学参数的统计分析

采用SPSS13.0统计学软件比较CYP2C19基因中杂合子强代谢型homEM和弱代谢型PM之间的药代动力学参数的差异。无显著性差异(P>0.05)。强代谢型和弱代谢型对Tmax、Cmax、T1/2Ke、AUC0-36、AUC0-∞的影响均无显著性的影响，见表1。

表1 艾司唑仑药动学参数在CYP2C19 homEM和PM的方差分析

3 讨论

高效液相法适合于艾司唑仑的血药浓度检测，方法学考察均符合生物样品分析的要求。CYP2C19的两个等位基因CYP2C19*2和CYP2C19*3是突变的主要类型。实验结果可知，CYP2C19的两组代谢类型homEM和PM的药动学参数比较中，各项药动学参数都(P>0.05)，homEM和PM之间无显著性差异，这与国外文献的报道一致[6]。结果表明受试者中CYP2C19的基因多态性对艾司唑仑的药代动力学并没有显著性的影响(P>0.05)。说明艾司唑仑在CYP2C19的杂合子强代谢型homEM和弱代谢型间PM的药动学无显著性差异。本文研究首次将CYP2C19基因多态性结合考察对中国人体内艾司唑仑的药代动力学的影响，艾司唑仑的个体间差异是否仅由CYP2C19产生的影响还需进一步研究。