乳腺癌组织中HER2、GCDFP15、Calponin表达及其与术后复发转移的关系

凌云志

人表皮生长因子受体2（HER2）是目前临床上已知的一种癌基因，其和乳腺癌的淋巴转移、预后等密切相关[1-3]。巨囊性病液体蛋白15（GCDFP15）属于乳腺囊液组成蛋白，其中正常的乳腺导管小叶基本不会分泌GCDFP15，而乳腺癌细胞会促进其大量分泌，由此可知，GCDFP15 可能介导了肿瘤细胞繁殖、分化、侵袭及转移等过程[4]。钙调理蛋白（Calponin）可有效降低血管内皮生长因子（VEGF）表达，从而抑制血管的快速形成，可能在肿瘤的发生、发展等过程中发挥关键性作用[5]。鉴于此，本研究探究乳腺癌患者标本组织内HER2、GCDFP15及Calponin 表达及其与复发转移的相关性，以期为乳腺癌术后复发转移的预测及干预提供新的靶点，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2018 年1 月-2020 年10 月朝阳市中心医院收治的91 例乳腺癌患者的临床资料。纳入标准：（1）所有入组人员均接受病理检查并最终确诊，且符合文献[6]相关诊断标准；（2）均为成年女性；（3）均行腹腔镜乳腺癌根治术治疗。排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤；（2）重要脏器出现严重病变；（3）意识障碍或合并精神疾病。年龄36～83 岁，平均（68.18±7.49）岁；体重指数（BMI）18～30 kg/m2，平 均（21.22±1.39）kg/m2；合并疾病：糖尿病27 例，高血压25 例，冠心病17 例，高脂血症22 例；分化程度：低分化35 例，中高分化56 例；临床TNM 分期：Ⅰ、Ⅱ期42 例，Ⅲ、Ⅳ期49 例。入组人员在知情同意书上签字，经医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法 采集所有受试者的乳腺癌组织及癌旁正常组织，以4%中性甲醛进行固定，石蜡包埋处理，并以4 μm 为理想厚度作连续切片。以二甲苯脱蜡，加入5%双氧水，于常温条件下孵育10 min，之后以磷酸盐缓冲液孵育5 min，再以蒸馏水重复冲洗3 次，5 min/次。随后加入含有5%山羊血清抗体内封闭，10 min 后分别滴加鼠抗人HER2 抗体、单克隆鼠抗人GCDFP15 抗体及鼠抗人Calponin 抗体。上述抗体均选用基因科技股份有限公司产品。放置在4 ℃条件下孵育过夜，以蒸馏水重复冲洗3 次。然后滴加相应二抗，置于37 ℃条件下孵育30 min，以蒸馏水重复冲洗3 次，5 min/次。加入二代辣根酶标记的工作液，于37 ℃条件下发育10 min。最后进行显色、脱水、透明、树胶封片处理，于显微镜下观察染色情况。

1.3 观察指标及判定标准 免疫组化结果判定：（1）HER2 阳性为＞10%癌细胞呈不完整或完整的细胞膜着色。（2）GCDFP15 阳性：细胞质存在棕黄色着色，且阳性细胞占比＞5%。（3）Calponin 阳性为肌上皮细胞或部分间质细胞的细胞质着色[7]。对所有受试者均进行随访观察，随访频率为1 次/月，随访形式以电话为主，以上门随访为辅。随访6 个月期间出现局部复发（胸壁、腋下及锁骨上的新发病灶）或远处转移（转移至骨、肺、肝、脑等）即为复发转移。其中复发的判定结果以病理检查为准；远处转移则是依靠影像学检查及转移病灶等实施综合判断。将所有受试者按照术后复发转移与否分成A 组（复发转移）及B 组（无复发转移）。（4）血清细胞角蛋白19 片段抗原21-1（CYFRA21-1）及可溶性CD40 配体（sCD40L）水平检测：分别采集所有受试者术后7 d 晨起进食前静脉血3 mL，以3 000 r/min 离心10 min，获取血清通过酶联免疫吸附法完成上述两项指标水平的检测。具体操作以试剂盒说明书完成，相关试剂盒选用深圳晶美生物科技有限公司产品。

1.4 统计学处理 数据处理方式由SPSS 22.0 软件完成，计量资料表示方式即（），分析开展独立样本t检验。计数资料表示方式即率（%），开展χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同乳腺组织中HER2、GCDFP15、Calponin表达对比 乳腺癌组织中HER2、GCDFP15 阳性表达率均高于癌旁正常组织，而Calponin 阳性表达率低于癌旁正常组织（P＜0.05），见表1。

表1 不同乳腺组织中HER2、GCDFP15、Calponin表达对比[例（%）]

2.2 两组一般资料对比 两组HER2、GCDFP15、Calponin 表达情况及CYFRA21-1、sCD40L 水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。两组年龄、BMI、合并基础疾病、临床TNM 分期、分化程度比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 两组一般资料对比

表2（续）

2.3 乳腺癌复发转移影响因素分析 经多因素logistic 回归分析可得，HER2 阳性、GCDFP15 阳性及血清CYFRA21-1、sCD40L 水平均是乳腺癌患者复发转移的危险因素，而Calponin 阳性为保护性因素（P＜0.05），见表3。

表3 乳腺癌复发转移影响因素分析

3 讨论

有研究发现，大多数乳腺癌患者均可从乳腺癌改良根治术中获益，但其术后局部复发率高达3%～25%，继而对患者的预后产生不利影响[8]。

本研究结果发现，HER2 及GCDFP15 在乳腺癌组织中呈异常高表达，而Calponin 呈异常低表达。考虑原因，HER2 属于抗凋亡基因，在乳腺癌中的过表达可有效抑制肿瘤凋亡，继而促进肿瘤的发生、发展过程[9-10]。GCDFP15 主要表达于大汗腺、泌乳腺和涎腺，而乳腺癌的发生、发展与大汗腺异常分化密切相关，因此其表达的异常升高可作为辅助诊断乳腺癌的指标之一[11-12]。Calponin 阴性表达时，其抑制VEGF 生成的功能随之缺失，继而促进了肿瘤新生血管的形成，为乳腺癌的发生、发展创造了有利条件。此外，经多因素logistic 回归分析可得：HER2 阳性、GCDFP15 阳性均是乳腺癌患者复发转移的危险因素，而Calponin 阳性为保护性因素（P＜0.05）。究其原因，HER2 过表达不仅会在一定程度上提升肿瘤细胞侵袭能力，而且可刺激淋巴血管新生，从而增加了淋巴结转移风险，同时会增加肿瘤细胞的抗药性，最终导致术后复发转移的风险增加。GCDFP15 属于大汗腺标志物之一，乳腺癌术后复发转移的发生会导致乳腺囊液分泌出现异常改变，继而引起GCDFP15 的过表达[13-15]。Calponin 是一种细胞骨架类蛋白，临床上将其根据电点的差异分 成H1-Calponin、H2-Calponin 及H3-Calponin 三种亚型，其中H2-Calponin 亚型表达于内皮细胞和平滑肌细胞中，其表达的增加是肿瘤预后积极因素之一[16-17]。另外，血清CYFRA21-1 和sCD40L 水平均是乳腺癌患者复发转移的影响因素（P＜0.05）。分析原因，可能是血清CYFRA21-1 和sCD40L 均属于乳腺癌的血清标志物，其表达水平的升高往往反映了患者病情的加重及淋巴结转移风险的增加[18-19]。

综上所述，HER2、GCDFP15、Calponin 表达和乳腺癌术后复发转移息息相关，HER2、GCDFP15阳性均是患者复发转移的危险因素，Calponin 阳性是保护因素。