子宫腺肌症患者血清中Sirt6和氧化应激指标水平及其相关性分析

和 斌，康 乐，瞿晓燕，杨尚，刘楚颖，闫 蔷

(同济大学a.附属杨浦医院临床研究与转化医学中心，上海 200090；b.附属第一妇婴保健院生殖医学中心，上海 200120)

子宫腺肌症在临床上是一种较为多见的妇科良性疾患，其病理表现为子宫基底层内膜细胞增生并侵入至子宫内膜肌层间质中，其临床表现为盆腔疼痛、子宫出血过多、贫血和不孕症等，然而子宫腺肌症的病因迄今仍然难以很好地解释[1]。目前较为公认的学说[2]认为，该疾病的病变是由于子宫内膜黏膜下层的缺失从而导致子宫内膜基底层的细胞侵袭和代偿性增生而形成，基因因素、子宫内膜基底层的损害如人工流产、分段刮宫术等均与子宫腺肌症的发生紧密相关。

氧化应激是指一种活性氧(ROS)与抗活性氧物之间形成的不平衡现象[3]。虽然正常细胞的生长需要一定量的ROS，但是过量的ROS产生可能损伤机体的天然抗氧化防御系统，形成一种不适于正常女性生理反应的环境[4]。有研究[5]指出，不明原因不孕症的发生与氧化应激有关。而且，近年有文献报道[6]指出：氧化应激与多种妇科良性疾病有关，包括内膜异位症、子宫腺肌病、输卵管囊肿等。

沉默调节蛋白6(Sirt6)是去乙酰化酶Sirtuin家族中最重要的成员之一，是一种NAD+依赖性组蛋白去乙酰化酶和ADP核糖转移酶[7]。Sirt6在细胞衰老、新陈代谢、氧化应激、炎症及自噬等过程中起着重要作用[8]。有研究[9-11]发现，Sirt6在多种细胞模型中显示良好的抗氧化应激作用。例如，Sirt6可通过NRF2/ARE通路缓解氧化应激从而保护肝细胞及视网膜细胞的氧化损伤，也可通过上调内源性抗氧化剂来减轻心肌细胞的氧化应激损伤[9-10]。本研究旨在观察子宫腺肌症患者血清中Sirt6以及氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平并分析其相关性，为子宫腺肌症发病机制的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集2021年4—10月同济大学附属杨浦医院收治的子宫腺肌症患者20例作为腺肌症组，另选择同期体检健康妇女20名作为正常组。腺肌症组和正常组年龄分别为21～45(32.67±5.45)岁和21～48(30.83±5.63)岁，2组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准：1)子宫腺肌症患者均经病理检查确诊；2)体检健康妇女及子宫腺肌症患者均签署知情同意书。排除标准：1)3个月内服用过激素类药物者；2)合并内分泌、免疫性疾病者；3)合并恶性肿瘤或其他器质性疾病者；4)具有感染和糖尿病史者；5)合并精神疾病、智力障碍或无法交流者；6)处于妊娠期或哺乳期者。本研究已获得同济大学附属杨浦医院伦理委员会审核并通过。

1.2 主要试剂和仪器

人沉默调节蛋白6(Sirt6)酶联免疫吸附检测试剂盒购自ELK Biotechnology公司；丙二醛(MDA)检测试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒均购自Beyotime生物科技有限公司；Spectramax M5酶标仪购自美谷分子公司。

1.3 方法

1.3.1 血清Sirt6检测

采集2组空腹外周血，室温下静置1 h后1000 g(1 g=2.528 r·min-1)离心15 min；取上清保存于-80 ℃备用。血清Sirt6检测按照人Sirt6酶联免疫吸附检测试剂盒说明书进行，在波长450 nm处测定样本的吸光度，根据吸光度查标准曲线并分析Sirt6水平。

1.3.2 氧化应激指标的检测

利用MDA检测试剂盒、SOD活性检测试剂盒分别检测2组血清中MDA含量及SOD活性。

1.3.3 统计学方法

2 结果

2.1 2组血清Sirt6水平比较

正常组血清Sirt6水平高于腺肌症组[(7.03±4.59)ng·mL-1比(2.65±1.52)ng·mL-1，P<0.001]。见图1。

2.2 2组血清氧化应激水平比较

正常组血清中MDA含量明显低于腺肌症组[(2.75±2.11)μmol·L-1比(5.45±2.48)μmol·L-1，P<0.001]，而SOD活性高于腺肌症组[(0.75±0.20)U比(0.52±0.24)U，P<0.01]。见图2。

*P<0.001。图1 2组血清Sirt6水平比较

*P<0.01，**P<0.001。图2 2组血清MDA含量、SOD活性比较

2.3 血清Sirt6与MDA、SOD相关性分析

相关性分析显示，血清中Sirt6水平与MDA含量呈负相关(r=-0.56，P<0.05)，而Sirt6水平与SOD活性呈正相关(r=0.32，P<0.05)。见图3。

MDA水平/(μmol·L-1)SOD水平/U

3 讨论

子宫腺肌症是一种子宫良性疾患，其往往伴有不孕症和胚胎的不良植入，这是由于子宫环境改变、子宫收缩异常、炎症增加和子宫内膜功能异常等造成的[11]。在不孕症妇女中约有25%患者存在着子宫腺肌症，由于腺肌症位置的原因，对于着床障碍患者，子宫腺肌症极易造成其不孕。由于腺肌症连接区肌层的异常收缩[12]，肥大肌纤维促进明显的子宫蠕动和内膜压的增加，从而影响精子的运输和植入[13]。也有学者[13-14]认为，过度的慢性炎症、血管改变、细胞因子分泌异常以及因ROS相关酶的过度表达导致自由基水平异常等均可导致腺肌症，从而影响早期胚胎植入和发育。

本研究发现，与正常组比较，子宫腺肌症组患者血清MDA含量明显升高、SOD活性下降，表明子宫腺肌症时患者机体处于高氧化应激状态。氧化应激是机体内活性氧与抗氧化系统的失衡导致ROS过度产生，进而造成对机体的损害[15]。MDA和SOD是评价氧化应激程度的重要指标，MDA是硫代巴比妥酸的活性物质，可间接反映细胞受活性氧攻击造成的氧化损伤，而SOD是机体内清除自由基的重要抗氧化酶。此外，本研究还发现正常组血清中Sirt6水平高于子宫腺肌症组，而且Pearson相关性分析发现Sirt6水平与SOD活性呈正相关，而与MDA含量呈负相关，这提示Sirt6可能参与子宫腺肌症氧化损伤的调控机制。既往研究[7]显示，Sirt6作为Sirtuins家族的一员在DNA修复、抗衰老、代谢等生理和病理进程中具有重要作用。而且最新研究[16]表明，Sirt1、Sirt3和Sirt5具有保护细胞免受活性氧ROS攻击的影响，Sirt2、Sirt6和Sirt7具有调节氧化应激关键基因的作用，Sirt4可诱导活性氧ROS产生而具有抗氧化作用。另有研究[17-18]发现，Sirt6在血管病变、肝损害、糖尿病、视网膜疾病中具有抗氧化作用，这与本研究结果相类似。而且，已有研究[19-21]显示，Sirt6过表达可通过AMPK-FOXO3α通路降低氧化应激和上调内源性抗氧化剂来保护心肌细胞免受缺血性再灌注的损伤[19]；Sirt6也可通过激活NRF2通路来保护人间充质干细胞免受氧化应激损伤，Sirt6的缺失导致人间充质干细胞的氧化还原代谢紊乱，从而导致氧化应激损伤的增加[20]；在短时间的高糖暴露中，Sirt6下调使核因子κB的表达增加，而Sirt6的过表达则降低核因子κB的表达；天然抗氧化剂麦角硫因酸的抗氧化作用与麦角硫因酸增加Sirt1和Sirt6的表达及其负性调控核因子κB有关[21]。然而，Sirt6在子宫腺肌症的抗氧化损伤中的作用机制是否与上述信号通路之间相关，需要后续实验进行验证。

综上，子宫腺肌症患者血清中Sirt6、超氧化物歧化酶活性水平降低，丙二醛含量升高，且Sirt6水平与丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性相关，提示Sirt6可能是子宫腺肌症氧化损伤的调控机制之一，可能成为子宫腺肌症治疗的靶点。但是，本实验入组样本数相对较少，后期应扩大样本量或者进行多中心研究来验证Sirt6在子宫腺肌症氧化应激损伤中的作用。