二氢杨梅素抑制JNK信号减少T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau蛋白水平

李梦伟，奉水东，颜 欣，王紫涵，李 琪，吕慧婕，颜灿群，凌宏艳

(1.衡阳医学院生理学教研室，2.公共卫生学院社会医学与卫生事业管理学教研室，3.衡阳医学院，4.南华大学附属第二医院健康管理中心，湖南 衡阳 421001)

海马神经元是中枢神经系统的重要细胞之一,与认知功能有密切的联系[1]。二型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠海马损伤与其海马Tau蛋白磷酸化和Aβ沉积有关[2]。

二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)是一种黄酮类物质,具有抗炎、抗氧化等作用[3]。研究显示：减少海马神经细胞凋亡的重要机制之一是抑制JNK信号[4]。本实验通过高糖高脂和低浓度STZ喂养SD大鼠复制T2DM大鼠模型,探讨DHM通过抑制JNK信号降低T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau水平。

1 材料与方法

1.1 材料SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(长沙市天勤公司[SCXK(湘) 2014-0011])；二氢杨梅素(DHM,B20372)购于源叶；链脲佐菌素(STZ,S0130)和p-Tau试剂盒(KHO0631)购自于Thermo；AMY(JNK激动剂,SC0132)、Aβ试剂盒(PA079)、Bax抗体(AF1270)、Bcl-2抗体(AB112)、JNK/SAPK抗体(AJ518)、p-JNK抗体(AF5860)、β-Actin Mouse Monoclonal Antibody(AF5001)、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠 IgG(A0216)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(A0208)购自于上海Beyotime。

1.2 分组76只雄性SD大鼠高糖高脂喂养建立T2DM大鼠模型。分为以下4组：ND组(n=24),T2DM组(n=16),ND+DHM组(n=8),T2DM+DHM组(n=24)。 十二周后,每组取8只海马组织,HE检测海马神经细胞形态,Western blot检测海马神经细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2水平,Elisa检测海马Aβ、p-Tau表达。其余分为ND组、ND+ AMY组、T2DM+DHM组、T2DM+DHM+AMY组、T2DM组(n=8)。取海马组织,用上述方法测定大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau变化。

1.3 HE检测大鼠海马组织在4%多聚甲醛中固定海马组织、包埋并切片,HE染色组织后显微镜观察病理变化。

1.4 Western blot测定大鼠海马Bax、Bcl-2、JNK和p-JNK蛋白表达取大鼠海马组织蛋白,进行定量、电泳、转膜、孵育一抗、二抗,显影分析各组蛋白表达情况。

2 结果

2.1 DHM减少T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau水平与T2DM组相比,DHM组海马神经元细胞凋亡明显减少。WB显示：DHM减少T2DM组海马Bax表达、提高Bcl-2表达。Elisa表明：DHM降低T2DM大鼠海马Aβ和p-Tau蛋白水平(P<0.01)。

2.2 DHM降低T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau蛋白水平的机制：抑制JNK信号Western blot结果显示：与DHM+T2DM组相比,AMY增加DHM处理的T2DM大鼠海马神经细胞凋亡。ELISA表明：与ND组相比,DHM可降低T2DM大鼠海马Aβ和p-Tau蛋白水平,AMY升高DHM处理的T2DM大鼠海马Aβ和p-Tau蛋白水平(P<0.01)。

3 讨论

研究表明抑制JNK信号通路可以改善糖尿病大鼠认知功能、减少大鼠海马神经元凋亡[5]。我们前期研究发现，DHM可以改善T2DM大鼠认知功能障碍[6]。本实验显示：DHM能减少T2DM大鼠海马神经元细胞凋亡、Aβ和p-Tau蛋白表达,激活JNK信号能够增加DHM处理的T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau蛋白表达。此研究证明，DHM通过抑制JNK信号减少T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau蛋白表达。