肉牛魏氏梭菌病的诊断与防控

王丽娟

辽宁职业学院，辽宁 铁岭 112099

牛魏氏梭菌病又称牛猝死症，由魏氏梭菌在一定条件下感染引起的多种家畜共患的急性传染病，临床上以发病急、病程短、死亡快、死亡率高，消化道和实质性器官严重出血为典型特征，严重危害养殖业的发展。

各种应激因素是诱发牛魏氏梭菌病的主要原因。当牛群受到应激，如气候、饲养环境突然改变或者突然更换饲料，导致牛体抵抗力下降，反刍减少甚至停止，瘤胃微生态平衡被破坏，造成胃肠道菌群失调，食物在胃内过度发酵产酸，引起正常的酸碱度失去平衡，没有消化的淀粉颗粒饲料通过真胃进入小肠，致使进入肠道中的魏氏梭菌快速繁殖并产生大量的毒素，经过机体吸收进入血液，出现全身毒血症，造成脏器衰竭，往往来不及治疗即突然死亡，给养殖业带来重大经济损失[1-2]。

1 发病情况

辽宁省铁岭市某肉牛养殖场，一共饲养西门塔尔育肥公牛5 000 头，于2019 年10 月4 日早晨突然发现死亡2 头，1 头正在发病，表现腹部膨大，肌肉震颤，口鼻流出红色泡沫液体，约2 h 也发生死亡。据驻场兽医叙述，夜里巡视时牛群正常，早上巡查时才发现上述病例，可推断死亡时间在下半夜或者凌晨。同时兽医介绍，牛场近几年内在7-8 月暴雨过后、天气闷热季节曾发生过几起类似牛只突然死亡的情况。调查发现，该牛场共有10 栋舍，每栋500 头，体重大约500 kg，饲养密度较大，粪便不能及时清理，圈舍环境卫生较差，昼夜温差大，一直按照标准采用稻草喂牛，自动料线饲喂全价饲料，平均每头牛每天采食9 kg 左右。临床检查，同群牛只体温、呼吸均正常。

2 临床症状

死亡2 头牛，均在17 月龄左右，膘情好，1 头横躺在饲槽边，1 头横躺在墙边，头颈呈角弓反张，腹部膨胀，口鼻流出红色泡沫状液体，舌头脱出口外，肛门外翻[3]。发病牛，表现呼吸急促，反刍停止，腹部膨大，肌肉震颤、抽搐，眼球突出，口鼻流出红色泡沫液体，四肢运动失调，不能站立，卧倒，体温38.9 ℃，心跳加快，100 次/min 以上，心率不齐，肺部有明显湿啰音，注射磺胺类药物，但未能缓解。

3 剖检病理变化

剖检病死牛，发现全身实质器官出血、淤血现象。主要表现腹腔和胸腔内有大量的暗红色液体；肺部严重气肿、充血，肺间质变宽，气管和支气管内均有大量泡沫状白色黏液；心脏扩张、质地柔软，心脏内外膜有出血，心肌表面有树枝样出血，心包积液；肝脏肿大、质地脆弱，淤血呈黑紫色；胆囊肿大、胆汁充盈；脾脏严重淤血肿大、质地较脆且易碎；肾脏轻微肿大，肾被膜易剥离，广泛性充血出血；膀胱无尿；小肠、盲肠充满气体，肠壁薄，肠壁外观呈暗红色，小肠黏膜严重充血、出血、黏膜脱落；皱胃黏膜有溃疡、出血；肠系膜淋巴结肿大、出血。

4 实验室诊断

4.1 涂片染色镜检

采取病死牛的心血、肺脏、肝脏和脾脏、肠黏膜及内容物等组织进行切片，分别进行瑞氏染色、美兰染色和革兰氏染色，油镜下检查。发现革兰氏阳性菌，多为单个存在，少数成对存在，两端钝圆、粗大直杆菌，有荚膜，部分菌体有偏端芽孢或中央芽孢，无鞭毛，不能运动，符合魏氏梭菌菌体形态特征[4]。

4.2 细菌分离培养和鉴定

将上述病料分别接种于普通琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯琼脂平板上和疱肉培养基中，放置37 ℃温箱厌氧法培养24～48 h。结果发现，麦康凯琼脂平板上无细菌生长；普通琼脂平板上菌落呈表面光滑、边缘整齐、不透明、灰白色的菌落，有些菌落中间有突起，外周有放射状条纹，边缘呈锯齿状；血液琼脂平板上明显见到内环透明、外环淡绿的双层溶血环灰白色较大菌落，边缘呈锯齿状；在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。挑取上述典型菌落进行涂片，经革兰氏染色、镜检，也可见到革兰氏阳性、两端钝圆的粗大直杆菌，单个或成对存在。

将血液琼脂平板上的典型菌落接种牛乳培养基（液体表面覆盖石蜡或凡士林）中，37 ℃温箱厌氧培养8～10 h 观察结果。在牛乳培养基中牛乳凝固，并产生气体，使凝固的牛乳呈多孔海绵状碎块，出现典型的“汹涌发酵”现象[4]。

4.3 生化试验

取分离纯化的典型菌落分别接种糖发酵管、硫化氢反应管及其他生化鉴定管中，置于37 ℃温箱厌氧法培养24～72 h。该分离菌株能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、果糖产酸且产气，不发酵甘露醇、山梨醇和水杨苷；MR 试验阴性，V-P 试验阳性，吲哚试验阴性，硫化氢试验阳性，明胶液化试验阳性，硝酸盐利用试验阳性。

4.4 动物试验

选择4 只2 月龄的健康家兔随机分成2 组备用。采取病牛肠内容物进行毒素检查。方法是取回肠内容物，加适量灭菌生理盐水稀释，经4 000 r/min离心沉淀15 min，取上清液用一次性滤器过滤后分装在无菌带盖的试管中分成2 组，第1 组上清液不加热，第2 组上清液60 ℃加热30 min 处理完待用。分别取2 mL 静脉注射健康的家兔体内，每组上清液分别注射2 只家兔进行观察。结果第2 组2 只家兔一直健活，而第1 组2 只家兔于注射后12～24 h内死亡，说明有毒素存在[3-5]。

将死亡的家兔置于37 ℃温箱中4～5 h，剖检时见兔腹围明显增大，肝脏肿胀呈泡沫状，肝脏质地脆弱呈泥状，肠道内有大量气体，肠黏膜出血严重。采集死亡家兔的病变组织进行触片、染色镜检，发现革兰氏阳性的大杆菌与牛病料触片上的细菌形态一致。

5 诊 断

该病的诊断应从发病特点、典型的临床症状及特征性的剖检病理变化做出初步诊断，确诊必须结合实验室诊断。如根据气候骤变、饲养环境改变或者突然更换饲料等应激因素刺激引起病牛突然死亡、腹部膨大、肌肉震颤、口鼻流出红色泡沫液体，消化道和实质性器官出血等典型特征，即可作出初步诊断，但确诊必须采取病变组织作涂片染色镜检，观察到革兰氏阳性粗大杆菌并有荚膜，呈偏端或中央芽孢，并作分离培养，有双层溶血环，特别是在牛乳培养基中引起牛乳“汹涌发酵”，可用于本菌的快速诊断。

取肠内容物做动物试验进行毒素检查是有效的微生物诊断方法，即可确诊为肉牛患有魏氏梭菌病。若要确定毒素的类型，需进一步做毒素中和保护试验。目前，已采用多重PCR 等分子生物学方法用于毒素基因的检测，快速方便。

6 防控措施

6.1 消灭传染源

将3 头病死牛的尸体及其病料送到无害化处理厂统一销毁处理，消灭传染源，避免疫病扩散。

6.2 切断传播途径

及时清理污染的粪便、草料并进行焚烧处理；对水槽、料槽用20%漂白粉水溶液进行消毒；对牛栏、器具每天早晚用0.3%过氧乙酸、聚维酮碘溶液加500 倍水进行交换消毒；对牛舍的地面、墙壁及周围环境用4%热烧碱溶液、20%漂白粉等交替进行全面消毒，1 次/d，连用1 周。之后牛舍地面、通道铺撒生石灰粉，进行吸湿除潮、抑菌消毒处理。

6.3 保护易感牛群

加强饲养管理，做好牛舍保温，在饮水中投放恩诺沙星可溶性粉，按每升水1 g 剂量，连续投放3 d，以防止同群牛感染病菌；在饲料中适当加入微生态制剂来促进反刍和采食，调节胃肠道菌群，抑制有害菌群的繁殖。同时，全群健康牛使用魏氏梭菌多价疫苗紧急免疫接种，提高牛的抗病能力[3]。

7 讨 论

7.1 加强饲养管理

根据肉牛的生长阶段，饲喂优质的全价配合饲料，更换饲料时禁止突然更换，应逐渐调整；避免拥挤，降低牛舍饲养密度。

7.2 做好卫生消毒

魏氏梭菌的繁殖体使用一般消毒药均可杀死，但芽孢的抵抗力较强。因此，病死牛尸体及其分泌物、排泄物等一律焚烧或者深埋，做无害化处理；及时清理舍内粪便、不洁垫料及霉变饲料，保持牛舍清洁、干燥；保证饲料和饮水清洁；场地、设施及用具等要定期使用漂白粉、石灰水、氢氧化钠等消毒药进行全面消毒，消毒药要定期更换，保证消毒效果，防止病原从消化道入侵是预防该病的关键措施[6]。

7.3 保证舍温恒定

在闷热季节，及时开窗通风换气、舍内防暑降温，保持凉爽，避免牛烦躁、牛群间拥挤、斗殴等；天气骤变季节，及时关窗防寒保暖，既要通风换气，又要保持环境温度稳定，防止昼夜温差过大造成应激。

7.4 免疫防治

在东北地区，暴雨及昼夜温差大的高发季节以及易发病的地区，应该对易感牛群提前接种与当地分离株相同血清型制备的疫苗或者魏氏梭菌多价疫苗，使动物机体产生特异性抗体，抵抗魏氏梭菌的侵袭。对于发病的牛只，及早使用抗牛魏氏梭菌高免血清或者治愈病牛血清进行紧急治疗，有一定的疗效。

7.5 药物防治

隔离病牛，及时采用镇静、解毒、强心补液、调理胃肠等对症治疗，改善症状以控制死亡；同舍牛只紧急药物预防。发病牛及时采取病料进行实验室检测确定致病菌，并进行药敏试验筛选出敏感药物。预防剂量按照治疗量的一半给药，一般不超过3 d，否则对牛生长不利[7]。