ELISA法与TRUST法检测梅毒螺旋体感染的作用

陈昱文，谢欢

1.广东省梅州市疾病预防控制中心 微生物检验科，广东 梅州 514071；2.嘉应学院医学院附属医院 检验科，广东 梅州 514000

0 引言

梅毒属于临床常见的一种性传染病，其传染性较强，存在较大危害性，是由梅毒螺旋体感染导致的，在我国各个地区的乙类传染病中其发病率都比较靠前，有些地区的发病率甚至已经超过乙肝、肺结核等疾病，严重影响人们的身体健康以及生命安全[1]。因此，需及时诊治梅毒。临床梅毒诊断的实验室方法常用血清学检测，主要通过TRUST法（甲苯胺红不加热血清试验）对梅毒螺旋体进行检验，以往被称作梅毒检验的金标准，但该方法检验易出现假阳性结果[2]。ELISA法（酶联免疫吸附试验法）是通过固相载体同可溶性抗原结合，按照抗原抗体结合专一性原则开展检验，在临床中应用效果比较好[3]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经本院伦理会批准，选择2018年1月-2020年12月间广东省梅州市疾病预防控制中心的3270份血液标本，患者年龄18～61岁，平均（40.35±4.62）岁；男1850例，女1420例；172例患者确诊梅毒，58例是一期患者，62例是二期患者，52例是三期患者。纳入标准：生殖器周围有丘疹患者斑块存在的患者；触诊时发现腹股沟处淋巴结明显肿大的患者；自愿参与本研究，且签署知情同意书的患者。排除标准：合并其他内分泌疾病、血液系统疾病的患者；合并其他肿瘤的患者。

1.2 方法

TRUST法：3～5mL的血液标本，分离得到血清，严格按试剂盒说明进行操作。ELISA法：3～5mL的血液标本，分离得到血清，严格按试剂盒说明进行操作。

1.3 观察指标

样品OD值S/CO≥1是梅毒抗体阳性；＜1是梅毒抗体阴性[4]。以梅毒螺旋体明胶凝集检测结果当作金标准，分析酶联免疫吸附法以及TRUST法的检测结果。准确度=[（真阴性+真阳性）份数/总份数]×100.0%；敏感度=真阳性/阳性×100.0%；特异度=真阴性/阴性×100.0%；阳性预期值=真阳性/诊断的阳性结果×100.0%；阴性预期值=真阴性/诊断的阴性结果×100.0%。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 总结ELISA法的诊断结果

在本课题的3270份血液标本中，172份标本确诊阳性，3098份标本确诊阴性。经ELISA法检验出171份阳性、3099份阴性，见表1。

表1 总结ELISA 法的诊断结果

2.2 总结TRUST法的诊断结果

在本课题的3270份血液标本中，经TRUST法检验出156份阳性、3114份阴性，见表2。

表2 总结TRUST 法的诊断结果

2.3 两种方法诊断效能对比

在梅毒螺旋体感染诊断中，ELISA法和TRUST法的特异度、阳性预测值差异不显著（P＞0.05）；ELISA法的准确度、敏感度、阴性预测值高于TRUST法（P＜0.05），见表3。

表3 两种方法诊断效能对比

3 讨论

梅毒是梅毒螺旋体感染导致的一种系统性、慢性性传播疾病，在全世界都比较流行。目前，我国梅毒在迅速增长，是报告病例数最多的一种性病。在我国所报告梅毒病例中，大都是潜伏梅毒，一期、二期梅毒也比较常见。梅毒属于人类独有的一种疾病，其传染源是显性梅毒患者以及隐性梅毒患者，梅毒患者的皮损、分泌物以及血液中都含梅毒螺旋体，机体感染梅毒螺旋体后头两年传染性最高，四年后经性传播的风险明显下降[5]。而且，梅毒螺旋体能够通过胎盘传染给胎儿，导致胎儿宫内感染，可致使早产、流产、死胎以及分娩胎传梅毒儿。通常情况下，孕妇梅毒的病期越早，传染给胎儿的风险就越高。

梅毒患者的表现：

（1）获得性隐性梅毒：人们后天感染梅毒螺旋体后没有显性梅毒形成而无症状，抑或显性梅毒活动期后患者症状暂时消退，脑脊液检查正常、梅毒血清试验阳性，是隐性梅毒。

（2）妊娠梅毒：孕期显性梅毒或者隐性梅毒，由于孕妇小动脉炎致使胎盘组织坏死，而发生流产、早产以及死胎等，且梅毒螺旋体可经脐静脉或者胎盘传给胎儿，分娩出胎传梅毒儿，只有少数的孕妇才可分娩出健康儿。

（3）先天性显性梅毒：①早期，新生儿出生时比较瘦小，约3周出现症状，患儿全身淋巴结肿大，大都发生梅毒性鼻炎。约6周有皮肤损害出现，斑丘疹、水疱-大疱型皮损、丘疹鳞屑性损害，大都肝肿大、脾肿大，骨膜炎、骨软骨炎，贫血、血小板减少。②晚期，2岁以后发生，一种是早期病变导致的眼、骨、神经、齿、皮肤等永久性的损害，没有活动性；另一种是仍存在活动性损害，出现神经性耳聋、角膜炎、神经系统表现异常、肝脾肿大、脑脊液变化、关节积水、鼻或颚树胶肿、指炎、皮肤黏膜损害、骨膜炎等。

（4）先天潜伏梅毒：分娩于梅毒孕妇，未治疗，没有临床表现，但是梅毒血清反应呈阳性。

（5）获得性显性梅毒：①一期梅毒，临床特征主要是硬下疳，大都单发、椭圆形或者圆形、无痛无痒、边界清晰的溃疡；②二期梅毒，主要特征是二期梅毒疹，出现全身症状，通常是硬下疳消退后的一段无症状期后再发生。梅毒螺旋体随血液循环，导致多部位损害以及多样病灶，对皮肤、骨骼、黏膜、心血管、内脏、神经系统等造成侵犯。二期梅毒患者的梅毒血清学试验阳性率很高，几乎是100%。皮疹出现前出现全身症状，头痛、发热、肝脾肿大、骨关节酸痛、淋巴结肿大，3～5d好转，之后有梅毒疹出现。二期梅毒主要表现是皮肤梅毒疹（疹型多样、反复发生、不痛不痒、广泛、对称、愈后大都不留瘢痕，且经驱梅治疗后会迅速消退）、复发性梅毒疹（主要是环状丘疹）、黏膜损害（在口唇、咽喉、扁桃体发生，黏膜炎或者黏膜斑，灰白膜或者有渗出物，黏膜红肿）、骨关节损害（骨炎、骨膜炎、关节炎、骨髓炎，伴有疼痛）、梅毒性脱发（大都是稀疏性，边界不清，少数弥漫样）、二期神经梅毒（大都没有明显症状）、二期眼梅毒（虹膜睫状体炎、梅毒性虹膜炎、视网膜炎、脉络膜炎）、全身浅表淋巴结肿大、脑脊液异常[6]；③三期梅毒，皮肤黏膜损害，头皮、背部、肩胛、四肢两侧等易发结节性梅毒疹，小腿部易发树胶样肿，形成深溃疡，上额部组织穿孔、坏死，鼻中隔者骨质破坏，马鞍鼻形成，阴道溃疡，膀胱阴道漏或者直肠阴道漏形成，舌部穿凿性溃疡。心血管梅毒，侵犯主动脉弓部位，导致主动脉瓣闭锁不全，发生梅毒性心脏病。近关节结节，皮下纤维结节，大小不等、对称、不活动、质硬、不破溃、无炎症、无痛、表皮正常、可自消。神经梅毒可无症状，也可出现脑血管梅毒、梅毒性脑膜炎、麻痹性痴呆、脑膜树胶样肿。

临床尚未明确梅毒致病机制，但可以确定的是梅毒的传染性较强，发生梅毒螺旋体感染后，会对患者生活产生影响，且带给患者心理困扰和生理困扰，倘若是晚期梅毒，就存在致死的可能[7]。所以，要尽早检出梅毒螺旋体感染，确保尽早给予患者针对性治疗。

临床可通过多种方法对梅毒进行诊断：①孕产妇梅毒感染史、不安全性接触史、输注血液史；②存在各期梅毒相应表现，但潜伏梅毒没有明显的表现；③暗视野显微镜检查，取湿丘疹、硬下疳以及扁平湿疣等可疑皮损，在暗视野下经显微镜进行检查，发现可运动的梅毒螺旋体就可确诊；血清学试验，所用抗原可分成非螺旋体抗原以及梅毒螺旋体特异性抗原，梅毒螺旋体特异性抗原有TPPA（梅毒螺旋体颗粒凝集试验）、TP-ELISA（梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验）等，具有较强的特异性强，可对梅毒螺旋体感染进行确诊。非螺旋体抗原有TRUST、RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）等，能够做定量试验，可对疗效判断、对病情的活动程度判断；梅毒螺旋体免疫球蛋白M抗体检测，在机体感染梅毒后，免疫球蛋白M抗体最先出现，随疾病的发展，随后出现免疫球蛋白G抗体，在有效治疗后机体的免疫球蛋白M抗体消失，而继续存在免疫球蛋白G抗体，梅毒螺旋体免疫球蛋白M抗体无法通过胎盘，当婴儿的梅毒螺旋体免疫球蛋白M抗体呈阳性就说明婴儿梅毒螺旋体感染，所以，梅毒螺旋体免疫球蛋白M抗体对于婴儿胎传梅毒存在重要的诊断意义；脑脊液检查，对于出现了神经症状的梅毒患者来说，或者经驱梅治疗无效的患者来说，应进行脑脊液检查，对于神经梅毒的诊治、预后判断等存在帮助作用，主要检查项目是总蛋白测定、细胞计数、快速血浆反应素环状卡片试验，以及梅毒螺旋体颗粒凝集试验等[8]。其中，最常用的是梅毒血清学试验。

TRUST属于一种非梅毒螺旋体抗原血清试验，在梅毒筛选以及疗效观察中比较适用。但有一些研究发现，TRUST法所使用的抗原没有特异性，所以，除了梅毒螺旋体感染患者之外，也有部分非梅毒患者也长期的或者暂时的存在反应素，比如麻风病、传染性单核细胞增多症、结核病、类风湿性关节炎、红斑狼疮、一些发热性疾病等[9]。同时，对于孕妇、吸毒者以及老年人来说，也可能出现生物学假阳性。基于此，临床越来越少通过TRUST对梅毒螺旋体感染进行诊断。

随现代医学技术不断发展，早期梅毒螺旋体感染诊断的正确率在不断提高，ELISA法是应用最广的一种酶免疫测定技术，是将已知的抗体或者抗原在固相载体的表面吸附，经酶标记抗原抗体在固相表面发生反应，通过洗涤法对液相中游离成分进行洗除。所以，可通过底物颜色反应对有无相应免疫反应进行判断[10]。但是需要注意：颜色反应深浅同标本抗体或者抗原量成正比，也就是说标本抗体或者抗原量越高则颜色反应越深，反之亦然。

ELISA法是将酶化学反应敏感性以及抗原抗体反应特异性结合，从而成为既敏感又特异的一种检测方法。同时，ELISA法不需特殊设备、操作简单、能够普及等优势，在梅毒螺旋体感染诊断中应用价值很高。不过，在ELISA法的实际应用中，其检验结果会受到操作人员工作素质、标本处理等影响，可能出现一定的假阴性以及假阳性结果，

综上所述，通过ELISA法对梅毒螺旋体感染进行诊断可得到较好的应用效果。