核酸检测联合ELISA检测技术在献血者血液筛查中的应用价值分析

李冰芳，姚映卿

（莆田市中心血站，福建 莆田 351100）

输血性传染病的主要传播载体即为血液及血液制品，检测血液中病毒标记物，可预防输血传播疾病［1］。临床通过检测病毒的抗原、抗体进行血液筛查，以降低血液传染性疾病的传播，但仍无法避免，输血传播疾病频频发生，可见单纯的检测抗原、抗体无法完全保证血液安全。相关研究［2］表明，血液中病毒进入人体后，到可检测到病毒抗原、抗体前需要一段时间，此时间被称为感染的“窗口期”。 “窗口期”血液及血液制品病毒感染经酶联免疫吸附法（ELISA）检测无法检出，检测结果为阴性，但实际上血液中已存在病毒，随着病毒不断复制而出现改变。若能缩短病毒检测的“窗口期”，可利于提高病毒检出，预防疾病传播。核酸检测（NAT）是筛查血液的重要方法，具有敏感度高、特异度高等优势，可缩短“窗口期”，降低疾病传播风险［3］。鉴于此，本研究探讨NAT联合ELISA检测技术在献血者血液筛查中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源选择2021年1月至2021年10月在本地区采集的19845份无偿献血标本，均经至少一种酶免试剂检测为阴性，各个献血者留取2管标本，每管5 mL，分别进行ELISA、NAT检测。所有标本均进行离心操作，4 h内完成所有步骤，置入2℃～8℃的冰箱保存待测，若当天不能完成检测，需将标本转移至-20℃的冰箱冻存。

1.2 仪器与试剂使用诺华诊断公司生产的Procleix Panther system全自动核酸检测分析系统、上海浩源生物科技有限公司生产的全自动核酸纯化仪（ChiTaS BSS1200）和ABI7500基因扩增仪，所有试剂均为产品配套试剂，严格按照说明书操作。

1.3 方法对所有标本均使用两种不同的ELISA试剂进行检测，对至少有一种试剂结果为阴性的标本进行NAT检测，分别使用浩源检测系统或诺华检测系统进行同时检测。①浩源系统NAT检测：检测模式选择8人份标本混合检测，每份标本以200 μL血浆作为取样量，由自动提取仪进行提取，并使用扩增仪系统进行分析，每组检测均需设置阴阳性对照，均含室内质控。检测结果判断标准：检测完成是指标本判定为NAT非反应性；若出现反应性，再进行拆分检测，检测有反应性的标本即可判定为不合格。②诺华系统NAT检测：检测模式选择单人份标本联检，向一级反应池提取500 μL血浆，使用全自动核酸检测分析仪进行检测，结果由服务器自动判读。所有检测需设置阴阳性校准物，均含室内质控。若标本判定为NAT非反应性则提示检测完成；而若呈反应性，则进行鉴别检测，检测有反应性的标本即可判定为不合格。

1.4 统计学分析采用SPSS 22.0统计软件分析数据。计数资料以n（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NAT检测情况19845份无偿献血标本经NAT检测，一级反应池共检测了4205个，其中出现85个反应性一级反应池，反应率为2.02%（85／4205）；拆分后进行单检或再鉴别检测，共有44份标本出现反应性，总反应率为0.22%（44／19845）。

2.2 不同系统NAT检测情况诺华操作系统共检测1970份标本，出现8个反应性，反应率为0.41%（8／1970）；然后再进行鉴别检测，共4份标本出现反应性，反应率为0.20%（4／1970）。浩源操作系统共检测17875份标本，出现77个反应性一级混样池，反应率为0.43%（77／17875）；拆分后进行单检，共40份标本出现反应性，反应率为0.22%（40／17875）。两种操 作系统 反应率 比较无 统计学差 异（χ2＝0.004，P＝0.947）。见表1。

表1 不同系统NAT检测情况

3 讨论

输血治疗是多种疾病传播的重要途径，虽然在输血治疗前会对血液进行基本传染病化验，但仍会发生感染，无法完全避免输血疾病的传播［4］。目前，大部分血站筛查血液仍采用ELISA检测技术对乙肝、丙肝、艾滋病等病毒进行筛查，但由于该方法“窗口期”较长，且易出现免疫沉默，导致敏感度较低，漏检情况频发［5］，在输血临床中已引起高度重视。

研究［6］表明，ELISA检测中的血清转化“窗口期”是导致漏检的主要原因，故若能缩短“窗口期”则可降低漏检率，提高敏感度。随着血液检测技术不断发展，NAT检测已覆盖发达城市大部分血站，在血液筛查中越来越常用，该项检测技术可直击病毒DNA或RNA结构，检测血液中有无病毒核酸，判断血液是否携带感染病毒，应用价值较高［7］。NAT检测在一些发达国家已被作为献血者常规筛查项目，我国已逐步展开并取得了一定成效，可明显缩短“窗口期”，弥补ELISA存在的不足［8］。本研究结果显示，19845份无偿献血标本经NAT检测，一级反应池共检测了4205个，其中出现85个反应性一级反应池，反应率为2.02%；拆分后进行单检或再鉴别检测，共有44份标本出现反应性，总反应率为0.22%。诺华操作系统共检测1970份标本，出现8个反应性，反应率为0.41%；然后再进行鉴别检测，共4份标本出现反应性，反应率为0.20%。浩源操作系统共检测17875份标本，出现77个反应性一级混样池，反应率为0.43%；拆分后进行单检，共40份标本出现反应性，反应率为0.22%；两种操作系统反应率相比未见明显差异。上述结果表明，献血者血液筛查中ELISA检测易出现漏诊，若联合NAT检测则可起到补充作用，提高阳性检出率。究其原因为，NAT检测在人员技术培训、检测步骤、质量控制等方面已形成一套科学规范的流程，具有较高的可行性与操作性，与ELISA检测联用可发挥不同程度的检测效能，提高血液阳性检出率，确保血液质量，提高输血安全。ELISA是检测输血传播性疾病的常用方法，通过检测血液中病毒或螺旋体的抗体，具有较高灵敏度，但特异度低下，非特异性反应升高，导致假阳性频发。ELISA与NAT检测相互补充，病毒从感染人体到体内复制，到发病的过程，病毒核酸及蛋白，人体抗体蛋白的产生量是个动态过程，经ELISA单试剂检测阳性标本多数经NAT检测为非反应性，可见标本可能发生了非特异性反应。

综上所述，献血者血液筛查中ELISA检测易出现漏诊，若联合NAT检测则可起到补充作用，提高阳性检出率。