乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果

卓萍娟

（东海县中医院检验科，江苏 连云港，222300）

乙型肝炎是HBV病毒引发的疾病，患者会出现肝脏炎性病变，疾病往往会累及身体的多个器官[1-2]。肝脏是人体重要器官，在人体新陈代谢过程中具有重要的作用。乙肝的传染性较强，感染乙肝后患者会出现食欲下降、头晕、乏力等，如果病情恶化，可发展为肝硬化，甚至是癌症，危及患者的生命安全，所以乙肝患者应尽早确诊和规范治疗[3]。乙肝早期的确诊对于治疗和预后很重要。荧光定量PCR检验是乙肝诊断的金标准，但由于其对环境和操作技术要求较高，在临床应用上会受到一定的限制。近年来，化学发光法与酶联免疫法是常用的血清学检验方式，两种检验方式在乙肝诊断中均有广泛的应用[4-5]。酶联免疫检验技术是将抗原与酶复配，并用显色法进行测试。化学发光法是以化学检测系统中被测物体的数量与所发出的光强之间存在的线性关系，然后再由发光计测量其光的强度，达到对被测材料的测量[6]。为评估乙肝病毒血清学检验中使用酶联免疫法与化学发光法的差异性，本研究对2020年1月～2021年1月东海县中医院收治的100例疑似乙型肝炎患者分别提供化学发光法检验以及酶联免疫法检验，以此开展调研。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020年1月～2021年1月东海县中医院收治的疑似乙型肝炎患者100例，均采用血清学检验，分别提供化学发光法检验以及酶联免疫法检验。100例疑似乙型肝炎患者中，女43例，男57例；年龄23～80岁，平均年龄（46.85±9.49）岁。所有患者均知情同意参与本研究，且本研究已被东海县中医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①患者均出现乏力、食欲下降以及肝区不适的症状；②患者临床资料完整；③患者意识清晰，可正常沟通。

排除标准：①妊娠期和哺乳期女性；②中途退出研究者；③合并恶性肿瘤者；④合并精神类疾病者；⑤合并其他急性重症疾病者；⑥长期使用免疫抑制剂治疗者；⑦合并感染性疾病者。

1.3 方法

100例疑似乙型肝炎患者均于清晨抽取空腹静脉血5 mL，离心处理10 min，转速为3 000 r/min，分离上层清液后，放置在-20 ℃的环境中待检。①化学发光法检验：将受试者的血液样品放在包含HBV核抗体的聚苯乙烯试管，在37 ℃的条件下放置2 h，然后用磷酸盐缓冲盐溶液清洗，3 min/次，共清洗3次，添加100 uL过氧化氢+100 uL鲁米洛，使用自动发光化学发光装置进行测试。使用电化学发光免疫分析仪（生产企业：罗氏，型号：Cobas e 601）及其配套试剂开展检验。相关操作严格依据对应试剂盒说明书进行。②酶联免疫法检验：试剂和微孔反应条放在室温下30 min，随后将样品放入微孔反应条中，密封30 min，将样品放入37 ℃的容器中，放置30 min，将溶液倒入微孔反应条中，使用自动样品预处理装置进行测试。使用全自动酶标仪（生产企业：北京若水合科技有限公司，型号：BS97-680）及其配套试剂开展检验。

1.4 观察指标

①以荧光定量PCR检验作为金标准，比较化学发光法、酶联免疫法的检验结果，即分别检测化学发光法、酶联免疫法检验的阳性率、阴性率。

②对比化学发光法、酶联免疫法检验的敏感度、特异度、准确性、阳性预测值以及阴性预测值。其中，敏感度=真阳性例数/（真阳性+假阴性）例数×100%。特异度=真阴性例数/（假阳性+真阴性）例数×100%。准确性=（真阳性+真阴性）例数/（假阳性+真阴性+真阳性+假阴性）例数×100%。阳性预测值=真阳性例数/（真阳性+假阳性）例数×100%。阴性预测值=真阴性例数/（假阴性+真阴性）例数×100%。

③化学发光法、酶联免疫法检验在乙肝患者中乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗体、乙肝表面抗体以及乙肝核心抗体的阳性检出率。阳性率的判定标准：乙肝e抗原≥0.05 NCU/mL，乙肝表面抗原≥10.0 mU/mL，乙肝e抗体≥2.0 NCU/mL，乙肝表面抗体≥0.2 ng/mL，乙肝核心抗体≥1.5 NCU/mL。

④化学发光法、酶联免疫法检验在乙肝患者中乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗体、乙肝表面抗体、乙肝核心抗体的表达水平。

1.5 统计学分析

采用SPSS 23.0软件对数据进行分析处理，计量资料用（±s）表示，行t检验；计数资料用[n（%）]表示，行χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 化学发光法、酶联免疫法检验的总检测结果比较

100例疑似乙型肝炎患者的荧光定量PCR检验结果：阳性率为72.00%、阴性率为28.00%。化学发光法检验的阳性率为71.00%、阴性率为29.00%。酶联免疫法检验的阳性率为62.00%、阴性率为38.00%。见表1。

表1 化学发光法检验、酶联免疫法检验的总检测结果比较

2.2 化学发光法检验、酶联免疫法检验的检测效能比较

化学发光法检验的敏感度、准确性和阳性预测值均高于酶联免疫法，差异有统计学意义（P＜0.05）。但是化学发光法、酶联免疫法检验在特异度、阴性预测值上比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 化学发光法检验、酶联免疫法检验的检测效能比较 [n（%）]

2.3 化学发光法、酶联免疫法检验在不同指标中的阳性率比较

化学发光法检验乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗体的阳性率高于酶联免疫法，差异有统计学意义（P＜0.05）。化学发光法、酶联免疫法检验在乙肝表面抗体、乙肝核心抗体阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 化学发光法检验、酶联免疫法检验在不同指标中的阳性率比较 [n（%）]

2.4 化学发光法、酶联免疫法检验不同指标的表达水平比较

化学发光法检验乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗体、乙肝表面抗体、乙肝核心抗体的表达水平均高于酶联免疫法，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 化学发光法检验、酶联免疫法检验不同指标水平比较 （±s）

表4 化学发光法检验、酶联免疫法检验不同指标水平比较 （±s）

检查方式 例数 乙肝e抗原（NCU/mL）乙肝表面抗原（mU/mL）乙肝e抗体（NCU/mL）乙肝表面抗体（ng/mL）乙肝核心抗体（NCU/mL）化学发光法检验 72 0.11±0.02 11.56±1.32 2.99±0.31 0.30±0.05 1.69±0.20酶联免疫法检验 72 0.07±0.01 10.28±1.22 2.23±0.29 0.29±0.06 1.67±0.21 t 33.941 108.612 332.441 84.853 16.971 P＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 讨论

乙型肝炎是一种传染性强，具有迁延性的疾病，部分患者会出现肝功能受损和黄疸，若不及时进行救治，容易引发肝硬化，甚至演变为肝癌，降低患者生存质量[7-9]。HBV是一种双链DNA病毒，它会在体内长时间潜伏，当机体的免疫力下降时，HBV会被活化并在体内增殖，最终导致乙型肝炎。乙型肝炎初期一般没有任何征兆，很难被发现，随着病情的发展，肝组织会越来越细，患者罹患肝硬化、肝癌的风险也会越来越大，而且预后也会越来越差。因此，早期诊断对改善乙肝患者的预后非常关键[10-13]。

荧光定量PCR检验技术可以根据病毒的含量来判断HBV在体内的增殖状况，但是荧光定量PCR检验的运行过程繁琐、成本高、对环境和操作技术的要求更高，在中小型医院很难得到广泛的应用。酶联免疫法是一种常规的血清学检查手段，它具有操作简便、检查费用低廉、检验耗时较短等优点，适合大规模样品的检测，所以酶联免疫法是乙型肝炎早期筛查的重要方式[14-15]。但它的缺点是容易受到外部环境的影响，无法对其进行定量分析；同时，不同的抗膨化抗体反应也会对测试的效果产生一定的影响，造成假阳性。化学发光法是一种高灵敏度、快速检测、定性、定量分析的新技术，在乙型肝炎检测中具有显著的优越性。化学发光法是利用荧光基材在相应酶的催化下发出荧光，并利用荧光的光强来进行定量分析，而在这一过程中，突变抗体不会对测试的结果造成任何干扰，并且化学发光法可以精确识别出突变株，降低人工干扰，因此具有很高的精确性。HBV-M检测可以为疾病类型的鉴别诊断提供依据。若乙肝表面抗原为阳性，说明HBV在身体中具有复制性，乙肝表面抗原作为乙肝的观察指标，可以反映身体是否出现乙肝病毒感染，同时还可以反映机体的肝脏损伤程度，乙肝表面抗原在乙型肝炎的诊断中具有重要价值。化学发光法在乙肝表面抗原阳性检出率具有较高的优势，检出率高于酶联免疫法[16-17]。本研究结果显示，化学发光法检验的阳性率为71.00%高于酶联免疫法检验的阳性率62.00%，说明在乙肝病毒血清学检验中化学发光法具有更高的阳性检出率。本研究发现，化学发光法的敏感度、准确性和阳性预测值均高于酶联免疫法，化学发光法检验乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗体的阳性率高于酶联免疫法，化学发光法检验乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗体、乙肝表面抗体、乙肝核心抗体的具体值均高于酶联免疫法，差异有统计学意义（P＜0.05）。充分说明在乙肝病毒血清学检验中，化学发光法具有较高的应用价值，整体检验效果优于酶联免疫法。

综上所述，化学发光法在乙肝病毒血清学检验中的效果优于酶联免疫法，具有较高的阳性检出率，并且敏感度、准确性和阳性预测值均高于酶联免疫法，值得在临床中应用。