对高效液相色谱法检测技术的相关思考

马 倩，胡自钊

（安康市质量技术检验检测中心，陕西安康 725000）

高效液相色谱仪是一种高压、高速、高效和高灵敏度的检测仪器，尤其适合高沸点、热稳定性差、相对分子质量大的有机物的定量和定性分析，在医药、环保、生命科学和食品安全检测中被广泛运用[1-3]。但在实际操作中，受目标检测物含量低和样品成分复杂的影响，会出现漏检、错检、检测时间长等现象。本文通过剖析高效液相色谱法检测经常出现的问题，提出检测分析的技术要点和控制措施，并对有问题的检测结果进行综合分析，以提高高效液相色谱检测技术水平，满足食品安全监管需要。

1 高效液相色谱法检测过程中存在的问题

液相色谱检测是以色谱峰的保留时间来进行定性分析，同一物质在同一色谱条件下应有相同的保留时间。但在实际食品添加剂检测中经常会遇到复杂基质样品，由于杂质成分与待测化合物性质相似或接近，就可能在色谱行为上表现一致，即使完全按照检测标准操作，也有各种因素干扰结果的准确性，对于这些峰，仅靠保留时间定性，容易出现漏检、错检、数据不准确和检测时间长等问题。①漏检是不能检出该检的组分，特别是低含量和复杂的组分，如黄曲霉毒素，毒性大、含量低，容易漏检。②错检是对检测结果的误判，得出错误结论，俗称“假阳性”。③数据不准确是检测数据远远偏离真值，甚至忽高忽低，不能真实反映出样品内组分情况。④检测时间长是在检测样品多、指标多的情况下，从样品进入预处理到出具检测报告的时间长，甚至超过法定时限。因此，快速、准确地应用色谱分析来定性、定量目标物是检测机构获取准确、可靠的分析数据的关键。

2 高效液相色谱法检测技术的质量控制

2.1 样品前处理

前处理包括取样、制样、提取和净化。正确的样品前处理是保障检测数据科学、准确的第一步。不正确、不规范的预处理可能导致谱图产生杂峰、诡峰，影响目标峰的分析。严格控制预处理过程，尽力减少杂峰，突出目标物，避免在目标物出峰位置有干扰峰，造成假阳性的错误检测结论[4-5]。

取样要有代表性，严格按照规程进行混匀、缩分。①根据样品状态来制样。固体要将其粉碎后再混匀；液体样品制备前要摇匀；结晶样品溶解后搅拌均匀，如有结晶析出的蜂蜜样品，需将样品的瓶盖旋紧后置于水浴（温度不超过60 ℃）中温热，待蜂蜜样品全部溶化后搅匀、冷却，再称取样品，从而保证样品性质的一致性。②根据检测项目的不同来制样，如坚果炒货食品，检测污染物时需去壳处理，检测添加剂时则需带壳处理。

2.2 选择合适的检测方法

样品的特性千差万别，选择准确的检测方法是保障结果准确的必要手段，这就需要结合产品特性，根据标准要求选择合规、合理的检测方法。此外，应及时关注最新出台的标准，若有变更，则需按照变更后的检测标准进行环境、人员、设备和方法的验证，确认具备实验能力后，再按照变更的检测方法进行检测。

2.3 对仪器、试剂进行有效控制

2.3.1 对仪器的控制

为了保证仪器设备的日常使用和维护，检验室应指定仪器的管理人员，并明确职责。仪器的操作者必须通过培训、考核后上岗，熟知仪器的工作性能、操作规程和安全指标。检测仪器必须进行计量检定，检定合格后，方能进行检测工作。通常要求在两次检定周期内至少开展1次期间核查，针对使用频率较高的仪器，仪器使用人员应增加核查频次，监测仪器的准确性和稳定性，把控正常损耗对仪器检测结果的影响。此外，做好仪器的日常维护，完成相关记录。

2.3.2 对试剂的控制

实验室要有试剂管理规程，并按要求分类储存，如避光、冷藏、有毒有害和易燃易爆等要有相应的储存地点，并明示标签。对于在使用或保管中的标准品需进行期间核查，通过质量控制保证标准品量值的准确可靠以及可溯源性[6]。

2.4 优化检测环境

检测环境条件对液相色谱检测的准确性有重要影响，如环境温度的不稳定会影响流动相的黏度，导致保留时间发生变化，影响检测结果的重现性[7-8]。因此，做好日常监测和记录，保证检测环境符合检测需求。同时，保持检测环境的整洁，避免样品间的交叉污染，有助于提高检测效率。

2.5 提高检测人员的操作水平

检测员在检测过程中应严格按照法律法规及标准规定，整个实验过程都要保持科学严谨的工作态度，做到过程有记录、结果可追溯。检测机构应制定人员培训计划，持续有效的培训有助于提升检测人员的检测水平。此外，实验室应多组织检测员参加外部的能力验证和内部的质量控制考核，通过盲样考核、比对实验、加标回收和留样复测等手段确保检测员具备相应的检测能力。

2.6 检测仪器的维护与保养

科学的维护和保养可延长高效液相色谱仪的使用寿命、提高其运行效率。①严格按照要求规范开关机，开机完毕后、开始检测前要进行全面检查，保证设备处于良好状态，不会对检测产生不良影响。关机时切忌乱丢乱放，以免在下次使用时出现误差，影响检测结果。②注意维护实验室环境，不能仅在工作时保证适宜的温度和湿度，即使不工作时也要关注实验室的温度和湿度变化，以免造成设备故障或检测数据不稳定。

3 可疑结果的综合分析

高效液相色谱检测结果往往会出现数值不准确、错检（假阳性）等情况，严格、规范地进行预处理是保证检测结果准确的基础。遇到可疑样品时，应考虑制样是否完备，标准是否正确执行，前处理过程是否准确，判定是否合理。排除这些因素后，进行可疑样品复测，可采取以下手段进一步确认。

3.1 调整色谱条件

有的样品比较复杂，会出现杂质峰，干扰结果判定，可通过调整流动相比例，消除杂质峰的影响，准确地进行定性分析。例如，在检测肉制品中的防腐剂时，按照《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》（GB 5009.28—2016）的要求，流动相为甲醇+乙酸铵，比例为5∶95，曾出现杂质峰影响苯甲酸的定性，将流动相甲醇+乙酸铵的比例调整为10∶90，杂质峰偏离苯甲酸出峰位置，有效避免了苯甲酸的错检。

3.2 加标实验

在样品前处理时添加标准品，对比保留时间、色谱峰、色谱峰面积的变化，对可疑检测数据进行有效分辨。例如，在豆干样品初测时检出苯甲酸，根据《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》 （GB 2760—2014），豆干中不允许添加苯甲酸，因此需进行样品复测。通过重新制备样，加标复测后，苯甲酸标液峰和干扰峰分离，判定初测为假阳性。

3.3 使用二极管阵列检测器检测

通过保留时间和光谱信息图进行综合定性。当保留时间附近有可疑色谱峰出现时，比较标准溶液光谱图与样品处理液光谱图的重合性，能够进一步确证可疑色谱峰是否是目标待测物。例如，按照《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》（GB 5009.28—2016）中的第一法——液相色谱法，采用二极管阵列检测器对样品中的苯甲酸进行测定，分别采集色谱图和光谱图，将样品处理液与标准溶液色谱图进行比较，以保留时间定性，若有检出，则结合样品与标准溶液光谱图，从峰起点、峰顶点和峰落点再次确认。若样品光谱图与标准溶液的光谱图完全不重合，可确证样品的检出结果为假阳性；若光谱图完全重合，可确证样品为阳性检出。因此，结合保留时间和光谱图进行综合分析判定，可有效保证样品检测结果的准确性和可靠性。

3.4 液质联用

由于受价格和耗材的限制，高效液相色谱-串联质谱设备没有得到广泛应用，但它的优势非常突出。它既能利用高效液相色谱对复杂化合物的分离能力，又综合了高分辨率质谱对化合物的准确定性和定量，能够同时测定多种化合物，且分析结果的灵敏性和准确性都能得到保障。童兰艳等[9]采用高效液相色谱-质谱法同时测定食品中的9种甜味剂（甜蜜素、安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜、阿力甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷、爱德万甜和纽甜），与国家标准检测方法相比，分离效果好、灵敏度高，明显提高了检测效率。

4 结语

食品检测面临着新要求、新挑战、新形势，高效液相色谱技术凭借其准确性高、灵敏度好、分辨率高的优势被广泛应用于农兽药残留、食品添加剂、非法添加物、霉菌毒素、氨基酸和糖类检测中，但因其操作要求高，未能广泛普及，如很多市、县检测机构的高效液相色谱仪被闲置，没能发挥出其应有的作用。

随着科学技术水平的提高，不管是国家检测机构还是第三方检测机构，都在不断完善仪器检测管理制度。在实际操作中正确运用高效液相色谱法的技术要点，使仪器的功能和特点最大限度地被发挥和利用，才能提高高效液相色谱技术的使用率和准确率，保证检测结果的准确性，更好地监管食品安全，真正做到让老百姓吃得放心。