2型糖尿病伴慢性牙周炎患者血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平及临床研究

刘昭娜，高惠红,武鸿毅，方 晓△

北京市隆福医院:1.口腔科;2.检验科，北京 100010

糖尿病属于自身免疫性代谢性疾病，其中2型糖尿病发病的始动环节为胰岛素抵抗，进一步研究显示，免疫调节异常可能在2型糖尿病及其相关并发症的发生、发展中发挥重要作用[1-2]。牙周疾病与糖尿病存在着密切的联系，二者间的双向作用是近些年学者们研究热点[3]。研究表明，糖尿病患者较非糖尿病患者更容易出现牙周炎[4]。长链非编码RNA MIR155宿主基因(LncRNA MIR155HG)是miR-155的宿主基因，长度为1 500 bp，与肿瘤的发生、发展有密切联系[5]。唐敏等[6]研究显示，LncRNA MIR155HG在系统性红斑狼疮患者血清中高表达，且与其疾病活动度有关，可能诱发炎症。为明确LncRNA MIR155HG、miR-155与慢性牙周炎(CP)及2型糖尿病伴慢性牙周炎(DMCP)的关系，本研究拟探讨血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平与CP相关临床指标的相关性，以及二者对DMCP的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2020年1月至2021年10月收治的42例DMCP患者为DMCP组，年龄36～72岁；选取46例单纯CP患者作为CP组，年龄33～74岁；选取48例同期健康志愿者作为正常对照(NC)组，年龄34～72岁。(1)纳入标准：①2型糖尿病患者均符合《2型糖尿病基层诊疗指南(实践版·2019)》的诊断标准[7]，CP患者符合《牙周病学》(第四版)中的诊断标准[8]；②入组前未进行过CP相关治疗；③近期体质量稳定，且无酗酒、吸烟等不良嗜好。(2)排除标准：①有重要脏器功能障碍及其他内分泌系统疾病或代谢疾病；②侵袭性牙周炎；③有过敏史；④处于哺乳期或妊娠期女性。本研究经本院医学伦理委员会审批通过，所有研究对象均自愿参与本研究，并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1资料收集 收集所有研究对象性别、年龄、体质量指数(BMI)、空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、探诊深度、附着丧失、牙龈指数、菌斑指数等资料。

1.2.2标本采集 血清标本采集：研究对象空腹12 h后，抽取次日晨起外周静脉血，以3 000 r/min离心10 min后收集上层血清，冻存于—80 ℃冰箱中待测。龈沟液标本采集：将滤纸条放入干净、无菌的离心管内并分别编号，用电子天平将带有编号的离心管称重并记录重量；取样前嘱患者清水漱口，无菌干棉球严格隔湿取样位点，探针挂出牙面菌斑，使用气枪吹干牙齿表面，将称重后的滤纸条轻轻插入牙龈下，停留30 s后取出，检查滤纸条(带血或被唾液污染者弃去)，浸泡于盐酸缓冲液中，30 min后3 000 r/min离心10 min，洗脱液为龈沟液标本，冻存于-80 ℃冰箱中待测。

1.2.3血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平检测 采用Trizol试剂盒(美国Invitrogen公司)提取血清及龈沟液总RNA，测定纯度及浓度后，采用反转录试剂盒(北京伊塔生物科技有限公司)将其反转录为cDNA，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR，CFX384型qRT-PCR仪购自美国Bio-Rad公司)检测血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平。根据目的基因LncRNA MIR155HG、miR-155设计并合成相应引物(大连宝生物工程有限公司合成)，三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、U6作为内参基因，引物序列见表1。qRT-PCR反应条件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，40个循环。所有待测标本均设置3个平行标本，采用2-ΔΔCt法计算血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155相对表达水平。

表1 引物序列

2 结 果

2.13组基线资料及临床指标比较 DMCP组、CP组和NC组性别、年龄、BMI比较，差异无统计学意义(P>0.05)。DMCP组空腹血糖、HbA1c、附着丧失高于CP组、NC组，探诊深度、牙龈指数、菌斑指数高于NC组，差异有统计学意义(P<0.05)。CP组探诊深度、附着丧失、牙龈指数、菌斑指数高于NC组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.23组血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平比较 DMCP组血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平明显高于CP组、NC组，CP组血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平明显高于NC组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表2 3组基线资料及临床指标比较[n(%)或

表3 3组血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平比较

2.3DMCP患者血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平与临床指标的相关性 Pearson相关分析结果显示，DMCP患者血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平与空腹血糖、HbA1c、探诊深度、附着丧失、牙龈指数、菌斑指数均呈正相关(P<0.05)。见表4、5。

2.4血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平影响DMCP的Logistic回归分析 以是否发生DMCP作为因变量，以血清LncRNA MIR155HG、miR-155及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155为自变量进行Logistic回归分析，结果显示，龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平升高是DMCP的独立危险因素(P<0.05)。见表6。

表4 DMCP患者血清LncRNA MIR155HG、miR-155 水平与临床指标的相关性

表5 DMCP患者龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155 水平与临床指标的相关性分析

表6 血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平影响DMCP的Logistic回归分析

3 讨 论

牙周炎是一种慢性炎症性破坏性疾病，主要发生于牙周支持组织，是成年人牙齿脱落的重要原因[9]。作为机体固有免疫的重要组成部分，炎症反应及相关细胞因子在DMCP的发生、发展中发挥了重要作用[10]。如糖尿病患者血糖控制不佳，会加重牙周局部炎症反应，产生大量炎症介质，致使免疫细胞功能受损，进一步加重牙周组织破坏，削弱牙周损伤组织的修复能力，进而形成恶性循环[11]。

LncRNA是一类存在于细胞质内或细胞核内的长度大于200 nt的功能性非编码RNA分子，在真核细胞内发生普遍转录[12]。近年来，许多学者对LncRNA的功能模式开展了大量研究，其与复杂疾病间的关系也受到广泛关注[13]。LncRNA MIR155HG是人染色体9p21上的一个LncRNA，位于INK4基因座，因其为miR-155的宿主基因而得名[14-15]。miR-155可参与巨噬细胞、单核细胞及中性粒细胞的活化，在B细胞和T细胞介导的免疫应答中扮演着重要角色[16]。WU等[17]研究显示，miR-155在牙周炎患者唾液中高表达，且与牙周炎严重程度呈正相关。RADOVIC等[18]研究表明，CP患者及DMCP患者miR-155表达水平上调，miR-155被认为是非糖尿病和2型糖尿病患者牙周炎的新生物标志物。

目前，对LncRNA MIR155HG、miR-155与DMCP患者临床指标及病理发展的关系也不明确。本研究结果显示，DMCP患者血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平高于单纯CP患者，而单纯CP患者血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平高于健康志愿者，其中miR-155表达趋势与赵华等[19]研究结果一致。推测2型糖尿病患者体内血糖异常及体内免疫应答异常，造成感染的牙周组织周围炎症因子聚集，同时产生许多炎症介质释放入循环系统，此时LncRNA MIR155HG表达水平升高，LncRNA MIR155HG作为宿主基因可能通过促进miR-155表达上调，从而在病原体侵犯、破坏机体牙周组织时做出快速反应，然而其作用机制及功能仍需进一步研究及验证。此外，本研究结果显示，血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155表达水平与空腹血糖、HbA1c、探诊深度、附着丧失、牙龈指数、菌斑指数均呈正相关，与WU等[17]研究结果部分一致。进一步提示LncRNA MIR155HG、miR-155在2型糖尿病患者CP的发生、发展过程中发挥重要促进作用。Logistic回归分析结果显示，龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平升高是DMCP的独立危险因素。RADOVIC等[18]的研究显示，miR-155水平升高与牙周炎发生关系密切。龈沟液而非血清LncRNA MIR155HG、miR-155升高是DMCP独立危险因素的可能原因为牙周组织发生炎症时，龈沟液从微小血管渗出，其分泌量立即增加。

综上所述，DMCP患者血清及龈沟液LncRNA MIR155HG、miR-155水平高于单纯CP患者，且二者水平与DMCP患者临床指标有关。提示LncRNA MIR155HG、miR-155水平与2型糖尿病患者牙周疾病的发展有关，临床中在治疗2型糖尿病患者的过程中，要注意控制牙周疾病的发展。