Th17/Treg、CD3+CD56+ NKT细胞水平对儿童肺炎支原体肺炎病情及预后的评估价值

曹焕萍，孙淑娜，叶江艳，朱耿云，彭银花，陆 定

上海市第八人民医院儿科，上海 200235

肺炎支原体肺炎是由于支原体感染造成的肺部急性感染，是较为常见的肺部疾病之一。流行病学调查显示，在学龄前患有肺炎的儿童中，肺炎支原体肺炎患儿所占比例较高[1]。学龄前儿童肺炎支原体肺炎发病的症状不尽相同，同时可伴发多种器官及多个系统的损伤[2]。轻度肺炎支原体肺炎患儿通过科学的诊疗，可取得较好的治疗效果，但是少数患儿可能会病情恶化，进而引发进行性呼吸窘迫症，严重影响患儿的生命安全[3]。因此，在疾病的早期，及时对肺炎支原体肺炎患儿的恶化趋势进行分析，对于提升患儿的生存率及治疗效果具有积极的意义[4]。Th17/Treg属于CD4 T细胞，在炎症反应的各个阶段，Th17/Treg表现为明显的失衡。有研究报道显示，Th17/Treg主要通过对信号转导及转录激活因子的活化作用，进而造成Th17/Treg进一步失衡[5]。CD3+CD56+NKT细胞水平在一定程度上反映了体液免疫及细胞免疫水平[6]。本研究主要通过分析Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞对儿童肺炎支原体肺炎病情的评估价值，为临床诊疗提供科学依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 以2019年2月至2021年2月在本院进行治疗的80例肺炎支原体肺炎患儿作为观察组。(1)纳入标准：①所有患儿符合肺炎支原体肺炎诊断标准[7]；②患儿血清特异性抗-肺炎支原体IgM阳性；③经影像学检查确诊为肺炎支原体肺炎；④所有患儿均无免疫系统疾病。(2)排除标准：①其他因素导致的小儿肺炎；②合并其他呼吸道疾病；③对本研究使用药物过敏；④伴有严重合并症或并发症；⑤伴有严重心、肝、肾等器质性病变；⑥有长期糖皮质激素使用史。按照肺炎支原体肺炎的诊断标准[7]确诊患儿并划分严重程度，患儿仅表现为上呼吸道感染，且发热在7 d内则为轻度；患儿表现为支气管炎及肺炎，发热在7 d及以上，体温在39 ℃以上，存在肺外系统合并症，使用大环内酯类药物治疗，效果欠佳则为重度。其中轻度患儿50例，重度患儿30例，重度患儿中采用激素治疗及未采用激素治疗各15例。出院时患儿的临床症状、体征、影像学特征基本恢复正常或者完全恢复正常，经过为期6个月的随访，无反复呼吸道感染则为预后良好；出院时患儿的临床症状及体征未完全恢复正常、影像学检查病灶未完全吸收，或吸收不完全，出院后仍有症状，仍需用药、复诊，经过为期6个月的随访有反复呼吸道感染则为预后不良[8]。另选取同期健康儿童40例作为对照组。两组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。所有研究对象监护人均同意研究对象参与本研究，并签署知情同意书，本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2方法 采集所有研究对象肘静脉血2 mL，采用流式细胞仪分别对Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平进行检测。检测试剂购于江苏洲联生物科技有限公司，严格按照说明书进行操作。

表1 两组一般资料比较

1.3观察指标 比较观察组及对照组的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平；比较轻度患儿及重度患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平；比较激素治疗和非激素治疗重度患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平；比较不同预后情况患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平；分析Th17/Treg、CD3+CD56+NKT联合检测对肺炎支原体肺炎患儿预后的预测价值。判断Th17/Treg、CD3+CD56+NKT预测肺炎支原体肺炎不良预后的真阳性、假阳性、真阴性及假阴性结果，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT的参考范围分别为0～0.74%及9.9%～28.7%，超过范围则判断为阳性。并计算Th17/Treg、CD3+CD56+NKT预测肺炎支原体肺炎不良预后的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。

2 结 果

2.1两组Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平比较 观察组的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.2不同严重程度患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平比较 轻度患儿Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平明显低于重度患儿，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.3采用不同治疗措施治疗的重度肺炎支原体肺炎患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平比较 非激素治疗患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平明显高于激素治疗患儿，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表2 两组Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平比较

表3 不同严重程度患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平比较

2.4不同预后情况患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平比较 随访后发现，预后良好患儿69例，预后不良患儿11例。预后良好患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平明显低于预后不良患儿，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表4 采用不同治疗措施治疗的重度肺炎支原体肺炎患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平比较

表5 不同预后情况患儿的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT 细胞水平比较

2.5Th17/Treg、CD3+CD56+NKT联合检测预测肺炎支原体肺炎不良预后的价值 串联方式的联合检测分析结果显示，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT联合检测对于肺炎支原体肺炎不良预后的预测准确率明显大于单独检测(P<0.05)。见表6。

表6 Th17/Treg、CD3+CD56+NKT联合检测预测肺炎支原体肺炎不良预后的效能

2.6ROC曲线分析结果 ROC曲线分析结果显示，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT联合检测预测肺炎支原体肺炎不良预后的曲线下面积(AUC)明显大于单独检测的AUC患儿(P<0.05)，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT的cut-off值分别为1.33%、36.91%。见表7。

表7 ROC曲线分析结果

3 讨 论

肺炎支原体肺炎是临床较为常见的呼吸道疾病之一，也是春秋季儿童较为常见的社区获得性肺炎[9]。在社区获得性肺炎患儿中，肺炎支原体肺炎患儿的比例呈现逐年上升的趋势。由于患儿的呼吸系统发育不全，免疫功能较低，疾病的进展较快，严重影响患儿的生命安全。因此，对肺炎支原体肺炎患儿进行早期诊断具有重要意义[10]。而在对不同预后患儿进行分析时，在轻度患儿中也可发现预后不良者，因此，对预后不良患儿进行早期预测，并早期开展干预，对改善患儿的预后具有积极的意义[11]。

Th17/Treg在机体的白细胞介素(IL)-17、IL-21及IL-22等细胞因子的分泌过程中发挥重要作用，在炎症反应过程中，其主要通过对中性粒细胞的招募作用，进而发挥适应性免疫作用，在气道黏膜抵御病原菌的病理、生理过程中发挥重要作用。Treg是重要的T细胞亚群[12]，主要通过对CD4及CD8因子的抑制发挥作用。在正常的生理作用下，患儿的Treg主要发挥IL-10及转化生长因子β等的调控作用[13]。Th17及Treg是近年来重要的T淋巴细胞，在细胞的分化过程中发挥重要作用，而在二者的分化过程中，二者相互拮抗，同时在免疫功能中发挥重要的作用[14]。临床研究已经发现，Th17/Treg的失衡与自身免疫性疾病发生及其不良预后有关[15]。本研究中，随着疾病的进展，患儿的Th17/Treg呈现明显上升趋势。提示在肺炎支原体肺炎疾病的进展中，机体的慢性炎症反应会进一步造成免疫功能明显降低。王亚洲等[16]通过对儿童肺炎支原体肺炎的疾病进展进行研究，发现患儿的Th17/Treg呈现明显的上升趋势，与本研究结果一致。CD56及CD3是重要的自然杀伤(NK)细胞表面标志物，在正常的生理状态下，其主要分布在肝脏、胸腺及骨髓中，而在外周血中水平较低。有研究报道，NKT细胞既有T细胞的活性，又具有NK细胞的效能，同时NKT细胞通过对患儿的颗粒酶B及穿孔素的分泌作用，进一步发挥NK细胞的抗感染作用[17]。在本研究中，随着疾病的进展，CD3+CD56+NKT细胞呈现明显的上升趋势。张丹丹等[18]研究发现，肺炎支原体肺炎患儿的NKT细胞呈现明显上升趋势，与本研究结果一致。以上研究结果提示对NKT细胞及Th17/Treg水平进行综合评价对于患儿的病情判断具有重要意义。

另外，通过对Th17/Treg、CD3+CD56+NKT联合检测预测肺炎支原体肺炎患儿的预后效能进行分析，发现联合检测的效能明显高于单独检测。通过对患儿Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平的联合检测，可对患儿的体液免疫功能及细胞免疫功能进行综合分析，进而对患儿的总体免疫水平进行评估，对于预测患儿的预后具有重要意义。同时，本研究通过对ROC曲线进行分析，得到Th17/Treg、CD3+CD56+NKT预测肺炎支原体肺炎患儿不良预后的cut-off值分别为1.33%、36.91%。

综上所述，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT细胞水平对肺炎支原体肺炎患儿的病情评估及激素治疗效果评价具有重要的意义，也可作为临床判断患儿预后的重要依据。