奥美拉唑胶囊剂有关物质再评价

周临 罗荣#

（1江西省医疗器械检测中心 南昌 330029；2江西省药物研究所 南昌 330029）

奥美拉唑（Omeprazole）化学名称是5-甲氧基-2-{［（4甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基）-甲基］-亚磺酰基}-1H-苯并咪唑，为苯并咪唑类质子泵抑制剂，是一种有效的抗消化性溃疡药，用于治疗十二指肠溃疡、胃溃疡、反流性食管炎等，具有疗效高、耐受性好、复发率低等优点[1]。图1为奥美拉唑常见合成工艺流程图[2]。

图1 奥美拉唑常见合成工艺流程图

为了保证药物的质量和临床用药安全有效，对药物中的杂质进行检查很有必要。《欧洲药典》EP[3]和《英国药典》BP[4]分别采用不加校正因子的主成分自身对照法和TLC法检测奥美拉唑中的杂质，而《美国药典》USP[5]采用加校正因子的主成分自身对照法检测奥美拉唑中的杂质，2020年版《中国药典》二部[6]采用不加校正因子的主成分自身对照法检测奥美拉唑中的杂质。为了更加准确的检测奥美拉唑制剂中杂质的含量，本研究建立了加校正因子的主成分自身对照法同时检测奥美拉唑肠溶胶囊中几种特殊杂质（杂质A～E）的含量。现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津10A系列高效液相色谱仪（CLASS-VP色谱工作站）；Me5型电子分析天平（赛多利斯公司）；Waters Purifier实验室超纯水机。

1.2 试剂 磷酸氢二钠和磷酸为分析纯，甲醇和乙睛为色谱纯，水为超纯水。

1.3 试药 杂质（A）：奥美拉唑硫醚-N-氧化物（Omeprazole Sulphane-N-Oxide）含量99.25%；杂质（B）：奥 美 拉 唑 砜-N-氧 化 物（Omeprazole Sulphone-N-Oxide）含量99.50%；杂质（C）：奥美拉唑-N-氧化物（Omeprazole-N-Oxide）含量99.60%；杂质（D）：奥美拉唑硫醚（Ufiprazole or Omeprazole Sulphane）含量99.50%；杂质（E）：奥美拉唑砜（Omeprazole Sulphone）含量99.93%。杂质对照品均由本单位自制，相关结构式见图2，原料奥美拉唑（山东寿光药业有限责任公司，含量99.90%），中间体苯并咪唑和氯化物。奥美拉唑肠溶胶囊（9个厂家共16个批号）。

图2 奥美拉唑各杂质名称及结构式

2 色谱方法

2.1 对照品溶液和供试品溶液、自身对照溶液的制备

2.1.1 对照品溶液制备 称取各杂质对照品（杂质A 10.08 mg，杂质B 10.10 mg，杂质C 10.02 mg，杂质D 10.05 mg，杂质E 10.13 mg，苯并咪唑10.21 mg，氯化物10.10 mg），置于25 ml容量瓶中，用流动相适量超声溶解并稀释至刻度，作为溶液a，精密量取溶液a 1.0 ml，置于100 ml容量瓶中，用流动相稀释成各含0.004 mg/ml的溶液，作为杂质对照品溶液，用于有关物质定量。称取奥美拉唑对照品10.12 mg，量取溶液a 250μl，置于25 ml容量瓶中，用流动相适量超声溶解，稀释制成含奥美拉唑0.40 mg/ml和各杂质0.004 mg/ml的溶液，作为混合对照品溶液，用于杂质色谱峰定位。

2.1.2 供试品溶液制备 称取奥美拉唑肠溶胶囊内容物0.20 g，置于10 ml容量瓶中，加流动相适量超声溶解，滤过，取续滤液，用流动相稀释制成含奥美拉唑约0.40 mg/ml的溶液，即得。

2.1.3 自身对照溶液制备 精密量取供试品溶液1.0 ml，置于100 ml容量瓶中，加入流动相稀释成含奥美拉唑0.004 mg/ml（1%）的溶液，作为自身对照溶液。

2.2 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Luna C8柱（150 mm×4.6 mm），Boston Crest C8柱（150 mm×4.6 mm）。流动相为乙腈：0.01 M磷酸氢二钠（磷酸调节pH至7.6）（25：75），流速为1.0 ml/min，检测波长为280 nm，柱温为30℃。国内外药典中奥美拉唑的有关物质及其色谱条件见表1。

表1 国内外药典中奥美拉唑的有关物质及其色谱条件

2.3 系统适用性试验 吸取混合对照品溶液注入液相色谱仪，查看色谱图，奥美拉唑峰的保留时间约为13 min，奥美拉唑峰与各杂质峰的分离度均符合规定（＞1.0）。见图3。

图3 混合对照品色谱图

3 高效液相色谱（HPLC）方法的确定

3.1 色谱柱的选择 试验中我们分别选择了C8色谱柱系统（Phenomenex Luna C8柱，150 mm×4.6 mm）和C18色谱柱系统（安捷伦C18柱，150 mm×4.6 mm），结果在C8色谱柱系统和C18色谱柱系统下奥美拉唑峰与各杂质峰之间分离度均良好。

3.2 色谱条件的选择 参照中国药典2020年版二部奥美拉唑项下有关物质检查法，以及借鉴相关文献资料[7～14]，最终确定以乙腈：0.01 M磷酸氢二钠（磷酸调节pH至7.6）（25：75）为流动相，在该色谱条件下，各杂质峰与主峰之间均能达到良好分离。

3.3 检测波长的选择 国外药典以及《中国药典》2020年版二部中奥美拉唑的有关物质项下，检查波长大部分为280 nm，取奥美拉唑及各杂质进行紫外扫描，结果也均在280 nm左右有最大吸收波长，因此本研究确定在280 nm处测定各杂质的含量。

原来如此……袁安的母亲在妓院里听到的，李离的父亲由酒席上听到的，那些不可思议的故事，那些流光溢彩的传奇，都来自一个在深山里信口开河的老瞎子，就像柳毅遇到洞庭龙王，魏征砍掉泾河龙王的脑袋，这样半真半假的传奇，茶余饭后是很好的消遣，可是你选择了相信它，并因此跋山涉水梦寐求之……袁安抬头盯着李离看，李离将手捂在双眼上，四个少年，一时间觉得之前吞到胃里的黄粱酒，比黄连胆汁来得都要苦。

3.4 色谱图保留时间的确定 通过试验我们发现在主峰的出峰时间3倍以后基本没有出现杂质峰，因此确定色谱图的保留时间为主峰出峰时间的3倍。

3.5 专属性破坏试验 通过几种破坏试验的结果能够看出，奥美拉唑在高温破坏和光照破坏的条件下相对比较稳定，产生的杂质较少；而在酸破坏（0.1 M盐酸溶液）、碱破坏（0.1 M氢氧化钠溶液）和氧化破坏（30%双氧水溶液）的条件下容易降解产生较多杂质。

3.5.1 酸破坏试验 取本品约0.2 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声使其溶解，加0.1 M盐酸10 ml，放置1 h，再水浴加热5 min，加0.1 M氢氧化钠10 ml中和，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取1～10 ml于棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，取续滤液作为酸破坏样品溶液，进样。见图4。

图4 奥美拉唑酸破坏色谱图

3.5.2 碱破坏试验 取本品约0.2 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声使其溶解，加0.1 M氢氧化钠10 ml，放置1 h，再水浴加热5 min，加0.1 M盐酸10 ml中和，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取1～10 ml于棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，取续滤液作为碱破坏样品溶液，进样。见图5。

图5 奥美拉唑碱破坏色谱图

3.5.3 氧化破坏试验 取本品约0.2 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声使其溶解，加30%双氧水5 ml，放置30 min，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取1～10 ml于棕色量瓶中，加甲醇至刻度，取续滤液作为氧化破坏样品溶液，进样。见图6。

图6 奥美拉唑氧化破坏色谱图

3.5.4 高温破坏试验 取本品适量，在120℃高温下放置2 h，称取适量，加甲醇制成0.4 mg/ml的溶液，取续滤液作为高温破坏样品溶液，进样。见图7。

图7 奥美拉唑高温破坏色谱图

3.5.5 光照破坏试验 取本品适量，在LX4500光照强度下放置约7×24 h，称取适量，加甲醇制成0.4 mg/ml的溶液，取续滤液作为光照破坏样品溶液，进样。见图8。

图8 奥美拉唑光照破坏色谱图

3.7 检测限和定量限 在280 nm下，奥美拉唑检测限为1 ng（0.1μg/ml），定量限为4 ng（0.4μg/ml）；杂质C检测限为1 ng（0.1μg/ml），定量限为4 ng（0.4μg/ml）。

3.8 供试品溶液的稳定性 将供试品溶液在室温环境分别放置0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h后，分别进样，结果发现供试品溶液在2 h内杂质含量变化不大，随着放置时间的延长，最大单个杂质和总杂质的含量均有升高，表明供试品溶液不够稳定，样品测试时应临用新配。

3.9 线性范围

3.9.1 奥美拉唑线性范围 精密称取奥美拉唑对照品（10.07 mg）置于100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，分别精密吸取0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml至25.0 ml于棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。分别精密吸取适量注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，奥美拉唑进样浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明奥美拉唑在0.403～8.056μg/ml范围内呈良好线性关系，回归方程为：Y=17376X-880，相关系数r=0.999 9。

3.9.2 杂质C线性范围 精密称取杂质C对照品（10.16 mg）置于100 ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml至25.0 ml于棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。分别精密吸取适量注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，杂质C进样浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明杂质C在0.406～8.128μg/ml范围内呈良好线性关系，回归方程为：Y=23703X-901，相关系数r=1.000 0。

3.1 0重复性 取同一批次的样品，分别称取6份平行样，按2.1.2方法制备作为供试品溶液，依法测定，计算得重复性结果为杂质A含量0.14%，RSD为0.28%；杂质C含量0.14%，RSD为0.33%；其他杂质含量0.19%，RSD为0.27%。结果表明本试验的重复性良好。

3.1 1加样回收率试验 称取同一批次已知有关物质含量的样品，分别称取9份平行样，置于10 ml量瓶中，分别加入高、中、低浓度的杂质C对照品，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，依法测定，计算得高、中、低三个浓度的回收率分别为96.22%、93.49%、92.87%，平均回收率为94.19%，RSD为2.19%。结果表明方法的准确度良好。

3.1 2耐用性 采用色谱柱Agilent XDB-C18，4.6 mm×150 mm；Waters C18，3.9 mm×150 mm；Phenomenex Luna-C8，4.6 mm×150 mm分别进行试验，测定同一批次样品的有关物质含量，测定结果基本一致，本试验表明本方法耐用性良好。

3.1 3各已知杂质的相对保留时间和校正因子 以奥美拉唑的保留时间为1，计算各杂质的相对保留时间和校正因子，校正因子（f）=As×Cr/Ar×Cs（As为杂质对照品的峰面积，Cr为待测成分对照品的浓度，Ar为待测成分对照品的峰面积，Cs为杂质对照品待测成分的浓度）。见表2。

表2 各已知杂质的相对保留时间和校正因子

4 结果

对总共9个厂家16批制剂采用以上方法进行试验，结果发现，以上制剂中均检出了奥美拉唑的杂质A，而奥美拉唑的中间产物氯化物和杂质B均未检出。而通过不加校正因子的主成分自身对照法计算所得出的杂质含量结果与加校正因子的主成分自身对照法计算所得出的杂质含量结果相比较可以看出，由于不同的杂质检测方法其最大检测波长不一样，杂质的峰面积不经过校正因子校正所计算出的结果不够准确，定量测定容易产生误差。见表3、表4。

表3 不加校正因子的主成分自身对照法结果（%）

表4 加校正因子的主成分自身对照法结果（%）

5 讨论

奥美拉唑的化学性质较不稳定，遇酸、热和氧化剂、光照等均容易发生变质降解，尤其是对pH值比较敏感，特别是在酸性条件时奥美拉唑的化学结构容易发生变化，出现聚合和变色现象，因此建立一个合适的方法来检测奥美拉唑及其制剂的有关物质非常重要。目前我国大部分化学药物的质量标准中，检查有关物质的方法主要有不加校正因子的主成分自身对照法、加校正因子的主成分自身对照法、面积归一化法和杂质对照品法。这四种有关物质的检测方法中，不加校正因子的主成分自身对照法由于不同的杂质检测的最大响应波长不一样，杂质峰面积不经校正因子校正所计算出的结果不够准确，定量测定容易产生误差；面积归一化法测定的误差较大，一般不用于药品中微量杂质的检查；而杂质对照品法虽然能够准确测定药品中的杂质含量，可需要长期提供对照品，而且杂质对照品价格较贵，有时候还不一定能够买到；加校正因子的主成分自身对照法不需要长期提供标准物质，而且可以把不同的标准杂质对照品的浓度值转化为固定的常数值，因此成为现阶段有关物质测定比较理想的手段[15]。

本试验建立的加校正因子的主成分自身对照法可以同时检测奥美拉唑肠溶制剂中5种特殊杂质的含量，消除了杂质与主成分响应因子不同所引起的测定误差，而且不必长期提供杂质对照品。结果表明，该方法可以准确测定奥美拉唑肠溶胶囊中有关物质的含量。