止汗贴质量标准的建立

程 峰，何春慧

（海安市中医院，南京中医药大学翰林学院附属海安医院，江苏 海安 226600）

止汗贴是本院研制的纯中药制剂( 苏药制字Z04000137)。该方由广郁金、麻黄根、五倍子组成，具有固湿止汗的作用，可用于儿童及成人植物神经功能紊乱及甲亢、内湿热、败血症、结核病、产后等所致的自汗、盗汗的治疗[1]。该贴剂在本院内科的应用已有十多年，疗效显著，受到本地区患者的一致好评，甚至有慕名前来购买使用的外地患者。目前止汗贴的现行质量标准（中国药典2005 年版一部附录Ⅱ）要求应符合贴剂项下的有关各项规定。为了保证止汗贴的质量和疗效，本文采用TLC 法对止汗贴中的郁金进行定性鉴定。查阅相关文献发现，针对姜黄素含量的测定方法多为HPLC 法[2-9]。故采用HPLC 法测定止汗贴中姜黄素的含量，制订了切实可行的质量控制标准[10]，现报道如下。

1 主要仪器与试药

GF254薄层板；止汗贴（海安市中医院制剂中心自制，批号200311、200514、200616）。

2 薄层鉴别

2.1 郁金的薄层鉴别

取本品10 g，加无水乙醇20 mL，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取郁金对照药材1 g，加无水乙醇10 mL，同法制成对照药材溶液。取不含所试药材的阴性对照样品，制备阴性对照溶液（方法同供试品溶液）。行照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各4 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以正己烷：乙酸乙酯：无水乙醇（16：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外线灯（365 nm）下检视发现，供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品不显斑点。见图1。

图1 郁金TLC 色谱图

2.2 五倍子的薄层鉴别

取没食子酸对照品2 mg，加甲醇2 mL 使之溶解即得对照品溶液。取供试品10 g、五倍子药粉1 g 及不含五倍子的处方药粉1 g，分别加甲醇15 mL，超声处理15 分钟，滤过药液，即得供试品溶液、阳性对照品溶液及阴性对照品溶液。行照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿- 甲酸乙酯- 甲醇（5 ：5 ：1）为展开剂，展开，取出，晾干。置254 nm 紫外灯下检视发现，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的灰黑色斑点；阴性对照品不显斑点。见图2。

图2 五倍子TLC 色谱图

3 姜黄素含量测定

3.1 色谱条件

大 连ODS-C18（4.6 nm×25 cm×15 μm）；检测波长254 nm；灵敏度：0.1 AUFS ；流动相：乙腈-水-冰醋酸（45 ：55 ：6）；流速1.0 mL/min。理论板数按姜黄素峰计算应不低于1500。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液制备 姜黄素在甲醇中的提取效果最好[11]，故精密称取姜黄素对照品适量，甲醇溶解配成约0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL、0.8 mg/mL，即得姜黄素对照品溶液。

3.2.2 供试品溶液制备 取本品适量，用10 倍量甲醇浸泡2 小时后，超声提取30 分钟，离心，取出上清液，药渣同前处理2 次，合并三次提取液，适当浓缩，用甲醇定容至10 mL, 即得供试液。

3.2.3 阴性对照溶液的制备 按制剂处方比例称取除郁金外的其他中药材，按照该制剂制备工艺相同的方法制得阴性样品。按照3.2.2 的制备方法制备阴性样品溶液。

3.3 测定

3.3.1 线性范围的考察 精密吸取对照品溶液各20 μL进样，按以上色谱条件测定，记录色谱图，测定其峰面积，见表1。以对照溶液浓度为横坐标（X），姜黄素峰面积分别为纵坐标，进行线性回归分析，绘制标准曲线，得回归方程为y=2 274 643.1x-3076.5，r=0.9997。结果表明，姜黄素在进样量0.10 ～0.80 mg/mL 范围内的线性关系良好。

表1 姜黄素工作曲线测定结果

3.3.2 精密度试验 从止汗贴（批号：200311）样品中取5 份，按含量测定方法测定姜黄素的含量，姜黄素含量测定的RSD 为0.90%，实验结果见表2。

表2 姜黄素的含量精密度试验结果

3.3.3 加样回收实验 精密称取已知含量的止汗贴（批号：200311）6 份，然后精密加入一定量姜黄素对照品，按含量测定方法测定，姜黄素的平均回收率为100.28%，RSD 为0.91%，结果见表3。

表3 加样回收试验结果

3.3.4 重复性与稳定性试验 重复性：取“3.2.1 止汗贴对照品溶液制备”项下对照品，按照“3.1 色谱条件”连续进样5 次，测定，计算，结果见表4。

表4 止汗贴重复性试验结果

稳定性：取“3.2.2 止汗贴供试品溶液的制备”项下供试品，按照“3.1 色谱条件”分别于1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 进样测定，计算，结果见表5。

表5 止汗贴稳定性试验结果

3.3.5 样品含量测定 按对照品的方法，对止汗贴批号：200311、200514、200616 进行姜黄素含量测定，并计算结果，数据见表6。

表6 供试品中姜黄素的含量测定结果

根据止汗贴的三个批次姜黄素的平均含量为0.2029%，将其含量下调10% 作为检测标准，故初定止汗贴中的姜黄素含量不低于0.18%，三个批次止汗贴中姜黄素含量均高于此数值。

4 讨论

止汗贴方由广郁金、麻黄根、五倍子组成。郁金辛、苦寒，《本草纲目拾遗》有“郁金，自汗不止，郁金末卧时涂乳上”之述[12]。通过本院研究，广郁金中的姜黄素，是止汗的主要成分。麻黄根微苦、微涩，有固表敛汗之功，用于阳虚自汗、阴虚盗汗之症。止汗贴生产过程中，先将中药饮片碎成细粉；然后以聚乙烯醇树脂制成15%的黏稠液体；药材细粉放入乳钵内，慢慢加入基质和氮酮，调制成适宜黏性的软材；制作时，将软材分成3.5 g 每份，加工成圆形贴膏。这样更有利于药物有效成分的透皮吸收，使用方便，便于患者携带。

近年来，我国大力推广中医中药，中医药疗法因确切的疗效也深入人心。我院的止汗贴深受广大患者喜爱，得到周边患者的良好口碑，甚至有外省的患者前来购买。我院作为三级中医院，有着一大批技术精湛、临床经验丰富的名老中医和名校技术骨干，很多患者得益于他们的帮助，自汗、盗汗问题得到了缓解和治愈。这为我院赢得了一大批忠实的粉丝，使得我市的群众对中医疗法的热爱和信任达到了前所未有的高度。我们也要对得起这份热爱和信任，将中医药事业发扬光大。

本次研究中，采用TLC 法对止汗贴中郁金进行定性鉴别，郁金TLC 应用硅胶G 板展开，未见姜黄素斑点。换成聚酰胺薄膜进行展开，斑点清晰。展开剂经多次实验调整为正己烷：乙酸乙酯：无水乙醇（16：3 ：1），Rf值为0.3，展开斑点清晰、稳定。

流动项的选择：分别考察了乙腈- 水- 冰醋酸（45：55：6）、乙腈-水-冰醋酸（50：50：6）和乙腈-水-冰醋酸（55：45：6）三个流动相，其中乙腈-水-冰醋酸（45 ：55 ：6）对姜黄素的分离效果明显。

经多批次试验，止汗贴在现行的质量标准的基础上增加郁金、五倍子的薄层鉴别法及姜黄素为有效成分的含量测定，方法简便快速，为止汗贴的临床效果提供了技术保障。我院制剂室将一如既往地为患者提供疗效稳定的制剂，为其健康保驾护航。