垂盆草总黄酮含量测定及分析

何 冰 ， 马生健 ，何旭东

（1. 岭南师范学院基础教育学院，广东 湛江 524048；2. 湛江幼儿师范专科学校，广东 湛江 524084；3. 岭南师范学院，广东 湛江 524048）

垂盆草（Sedum sarmentosum Bunge），又称爬景天、鼠牙半支莲、养鸡草、狗牙齿等[1]，系景天科多年生草本多肉植物，在我国大部分地区均有分布。该草可全株入药，性凉、味甘、淡，用来泡水喝或煎汤有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效，常用于治疗湿热黄疸、小便不利、痈肿疮疡、慢性肝炎等症；其茎叶脆嫩多汁、微酸，亦可作蔬菜食用，是一种可药、可食、可观赏的植物[2]。

研究发现，垂盆草中含有垂盆草苷、黄酮类、甾醇类和三萜类等化合物[3-4]，其中垂盆草苷对四氯化碳性肝细胞损伤有明显保护作用，可控制乙肝和丙肝病情发展，对降低血清谷丙转氨酶有显著疗效，也可减轻甚至消除肝炎患者的口苦、胃口不好、小便黄等症状。潘金火等人[5-6]对垂盆草的保肝降酶活性成分进行了一系列的研究，证明其具有保肝降酶作用的活性成分主要为苷类和黄酮类物质，可见黄酮是垂盆草保肝降酶、修复损伤肝细胞、抗肿瘤、抗炎抑菌的主要活性成分之一，对于心血管疾病、肿瘤以及癌症等疾病都具有预防和治疗价值，甚至可以作为弱雌性激素治疗更年期综合症[7]。

近年来，对垂盆草的研究大多集中在肝病治疗中的药理作用及临床应用研究进展[8-12]，也有垂盆草HPLC 指纹图谱[13-14]、救治蛇伤[15]、生长[16-19]等部分相关报道。通过采用紫外分光光度法对新鲜采摘的垂盆草总黄酮含量进行测量和分析，以提高其利用率，为进一步提升垂盆草药用价值及食用价值提供一定的科学依据和数据支撑。

1 材料和方法

1.1 材料

所用材料，均采摘于岭南师范学院植物园内自种药材垂盆草。挑选生长状态相似的垂盆草，进行分类、洗净、沥水，用吸水纸吸干表面水分，备用。

芦丁标准品（供绘制测定黄酮浸出率标准曲线用），编号为100080-200707，中国食品药品检定研究院提供；4%NaOH 溶液、10%Al（NO3）3溶液、5%NaNO2溶液、50%乙醇等所用试剂，均为分析纯（AR 级）。

1.2 试验方法

1.2.1 待测样品的制备

取3 个不同植株的垂盆草材料，精密称取垂盆草药材样品3.000 g，置于旋转蒸发器中，加入12BV的50%乙醇溶液，100 ℃下回流提取1 h 至无色，待冷却到室温后取出样品溶液。置于高速冷冻离心机以转速5 000 r/min 条件下离心10 min，倒出上清液，再将沉淀加入12 BV 的50%乙醇溶液转入旋转蒸发器，100 ℃进行二次提取1 h，冷却，以转速5 000 r/min 离心10 min，得上清液。将2 次提取的上清液混合，加入50%乙醇定容至1 000 mL，即可得到样品待测液。

1.2.2 显色反应

取待测样品溶液各1 mL 于试管中，分别加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.5 mL，摇晃均匀，放置6 min，再加入质量分数为10%的A（lNO）33溶液0.5 mL，混合均匀，放置6 min，然后加入质量分数为4%的NaOH 溶液10 mL，最后加蒸馏水定容至12.5 mL，放置10 min 后即可得到3 个样品标准液。

1.2.3 垂盆草黄酮含量的计算

根据待测样品所测的吸光度（A），采用芦丁标准曲线回归方程ρ=0.086 5A+0.001 2（相关系数R2=0.999 8） 计算样品溶液中黄酮的质量浓度（ρ）。

式中：V——样品溶液体积（1 000 mL）。

2 结果与分析

测得样品溶液的吸光度，计算样品中所提取总黄酮质量和黄酮含量。

垂盆草不同样品的黄酮含量见表1。

表1 垂盆草不同样品的黄酮含量

根据3 组样品测得数据的计算结果，其平均值为4.024，即垂盆草黄酮含量为4.024。结果表明，垂盆草黄酮含量较高，有较高的潜在开发利用价值。

3 结论

采用紫外分光光度法从垂盆草中提取出总黄酮并测定了其含量，结果表明利用紫外分光光度法对垂盆草中总黄酮含量进行测定，试验条件容易控制，操作简单，重现性好，可作为测定黄酮类化合物的常用方法。

采用硝酸铝作为黄酮类物质比色测定的显色剂，主要是因为黄酮母核中含有碱性氧原子，一般又多带酚羟基，能与铝离子产生黄色络合物。加入亚硝酸钠和氢氧化钠，可使之在碱性溶液中显红色，显色反应要及时测定，放置过久易褪色。

在垂盆草回流提取总黄酮的过程中，溶剂可能会影响黄酮的纯度，因为当溶剂浓度过高是会溶出更多溶于该溶剂的物质，最终导致与真实数据产生较大偏差，在考虑成本的前提下，参考了张瑞霞等人[20]获得总黄酮最佳提取率的最优工艺条件为乙醇体积浓度50%，溶媒量为12BV，提取的数量次数为2 次，每次1 h。试验参照此项工艺条件进行，所得结果稳定、重现性好。

试验测得垂盆草的总黄酮含量较高，高于其他报道中的数据[21]，除试验系统误差外，推测原因可能为黄酮提取方法、条件及工艺不同导致。此外，垂盆草种植地的地理条件与气候条件等因素也可能导致测定结果不同，如有试验表明夏枯草、金钗石斛、仙鹤草等药料在种植过程中人为添加生长调节剂会导致总黄酮升高[22-24]，Adriana Eliašová 等人[25]证明了黄酮含量受铵盐影响。垂盆草的黄酮含量受生态环境因子的具体影响情况有待进一步研究。

我国垂盆草资源丰富，且大都处于野生状态，未进行大规模的开采利用。垂盆草中黄酮类化合物含量较高，在医药、食用、观赏和环保等方面具有潜在的开发利用价值。此结果可为垂盆草代茶饮、垂盆草菜品、垂盆草馅料等功能保健系列产品的研究开发和推广应用提供科学依据和数据支撑。