饲粮添加核黄素对1～21日龄马冈鹅生长性能、血清生化指标、抗氧化能力及肠道发育的影响

张 艺 汪 珩 陈建颖 刘书锋 尹亚红 赵玉洁 李 胜 王文策 朱勇文* 杨 琳*

(1. 华南农业大学动物科学学院，广东省动物营养调控重点实验室，广州510642；2.金钱饲料(东莞)有限公司，东莞523147)

核黄素，又称为维生素B2，作为辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和黄素单核苷酸(FMN)的前体发挥其生化功能，禽类饲料中的核黄素主要以FAD和FMN的形式存在。饲粮中添加核黄素不仅有助于促进禽类生长发育[1]，同时对肠道发育和抗氧化性能也有积极作用[2-3]。在肉鸡方面，Leiber等[4]推荐肉种鸡及生长前期肉鸡饲粮核黄素含量分别为6和8 mg/kg；阮栋等[5]发现基础饲粮中添加3.0 mg/kg核黄素时，43～63日龄黄羽肉鸡的生长性能及抗氧化性能最佳。在肉鸭方面，唐静[6]以平均日增重为评定指标，依据折线模型，估算出1～21日龄北京鸭核黄素需要量为10.59 mg/kg，且公鸭核黄素需要量略高于母鸭；张博[7]以种蛋孵化率等为评价指标，采用直线-折线模型估测出种鸭核黄素需要量为3.92～7.84 mg/kg。NRC(1994)关于0～4周龄鹅核黄素的推荐量是3.8 mg/kg。目前国内关于核黄素需要量的研究主要集中于鸡、鸭上，而对于鹅核黄素需要量的研究相对缺乏，且不同品种肉鹅不同生长阶段核黄素的需要量可能存在一定差异。因此，本研究以1～21日龄马冈鹅为研究对象，通过在饲粮中添加不同水平的核黄素，探究其对马冈鹅生长性能、血清生化指标及肠道发育的影响，以期获得生长前期马冈鹅核黄素需要量，为肉鹅精准饲粮配制提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验设计

饲养试验在揭阳市华南农业大学科研合作基地——金钱饲料(东莞)有限公司进行。试验采用随机分组试验设计，选用体重相近、健康的1日龄马冈鹅公鹅720只，随机分成6组，每组6个重复，每个重复20只。6组试验鹅饲喂添加不同水平核黄素的饲粮，其中对照组肉鹅饲喂不添加核黄素的基础饲粮(核黄素含量为2.48 mg/kg)，5个试验组分别在基础饲粮中添加2.6、5.2、10.4、20.8、41.6 mg/kg的核黄素(饲粮核黄素含量分别为5.08、7.68、12.88、23.28、44.08 mg/kg)。试验鹅采用笼养方式，按照常规免疫程序进行免疫，自由采食和饮水。试验期为21 d(1～21日龄)。

1.2 试验饲粮

试验所用基础饲粮为玉米-大麦-豆粕型饲粮，参照NRC(1994)家禽营养需要推荐量及当前我国马冈鹅生产实际进行配制。基础饲粮组成及营养水平见表1。

1.3 测定指标及方法

1.3.1 生长性能指标

于21日龄当天08:00对试验鹅以重复为单位空腹称重，试验期间以重复为单位记录耗料量及增重，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.3.2 血清生化指标

于21日龄时，每个重复按平均体重选取1只试验鹅，采血前禁食12 h，颈静脉采血，静置30 min后，3 000 r/min离心10 min分离血清，-20 ℃保存。采用维生素B2酶联免疫检测试剂盒测定血清核黄素含量，试剂盒购于上海酶联生物科技有限公司。血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量与天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶(AST)活性采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定，参照说明书进行操作。

1.3.3 血清抗氧化指标

采用试剂盒测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，试剂盒均购于南京建成生物工程研究所，参照说明书进行操作。

1.3.4 肠道发育及形态结构

将十二指肠、空肠、回肠和盲肠中内容物和脂肪剔除干净后称重，重量与活重之比即为该肠段的相对重量(g/kg)；将各肠段平铺自然伸直，测量各肠段长度，长度与活重之比即为该肠段的相对长度(cm/kg)。

取十二指肠、空肠、回肠肠段中部相同位置约1.5 cm，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗干净，置于4%甲醛固定液中。苏木精-伊红(HE)染色切片及镜像结果由武汉赛维尔生物科技有限公司提供。测量十二指肠、空肠、回肠绒毛高度和隐窝深度，并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)。

1.4 数据统计及分析

采用SAS 9.2软件的GLM程序对试验数据进行单因素方差分析，然后采用Duncan氏法进行多重比较，试验结果以平均值和均值标准误(SEM)表示，P<0.05为差异显著。

2 结 果

2.1 饲粮添加核黄素对1～21日龄马冈鹅生长性能的影响

由表2可知，饲粮核黄素添加水平对1～21日龄马冈鹅的平均末重、平均日增重、平均日采食量和料重比均无显著影响(P>0.05)。

表2 饲粮添加核黄素对1～21日龄马冈鹅生长性能的影响

2.2 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅血清生化指标的影响

2.2.1 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅部分血清生化指标的影响

由表3可知，饲粮核黄素添加水平对21日龄马冈鹅血清核黄素、ALB含量以及ALT、AST活性与AST/ALT均无显著影响(P>0.05)。随着饲粮核黄素添加水平的升高，马冈鹅血清TP含量呈先降低后升高的趋势，对照组血清TP含量最高，各试验组血清TP含量均显著低于对照组(P<0.05)。

2.2.2 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅血清脂质代谢指标的影响

由表4可知，饲粮核黄素添加水平对21日龄马冈鹅血清HDL-C、LDL-C和TC含量均无显著影响(P>0.05)。随着饲粮核黄素添加水平的升高，血清TG含量呈先升高后降低的趋势，核黄素添加水平为10.4及20.8 mg/kg时血清TG含量显著高于对照组(P<0.05)；对照组血清TG与LDL-C含量最低。

表3 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅部分血清生化指标的影响

表4 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅血清脂质代谢指标的影响

2.3 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅血清抗氧化指标的影响

由表5可知，饲粮核黄素添加水平对21日龄马冈鹅血清T-AOC、MDA含量、T-SOD与GSH-Px活性均无显著影响(P>0.05)。随着饲粮核黄素添加水平的升高，血清GSH-Px活性呈先上升后下降的趋势，以对照组血清GSH-Px活性最低，MDA含量最高。

表5 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅血清抗氧化指标的影响

2.4 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅肠道发育及形态结构的影响

2.4.1 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅肠道发育的影响

由表6、表7可知，饲粮核黄素添加水平对21日龄马冈鹅各肠段相对长度及空肠、盲肠和直肠相对重量均无显著影响(P>0.05)。核黄素添加水平为2.6、5.2、20.8及41.6 mg/kg时十二指肠相对重量显著低于对照组(P<0.05)。核黄素添加水平为20.8、41.6 mg/kg时回肠和总肠道相对重量显著低于对照组(P<0.05)。

表6 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅肠道相对长度的影响

表7 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅肠道相对重量的影响

2.4.2 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅肠道形态结构的影响

由表8可知，饲粮核黄素添加水平对21日龄马冈鹅十二指肠隐窝深度、空肠绒毛高度及回肠形态结构均无显著影响(P>0.05)。核黄素添加水平为20.8和41.6 mg/kg时十二指肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度均显著高于对照组(P<0.05)。空肠隐窝深度在10.4 mg/kg组最高，显著高于其他各组(P<0.05)。空肠绒毛高度/隐窝深度在20.8 mg/kg组最高，显著高于其他各组(P<0.05)。

表8 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅肠道形态结构的影响

3 讨 论

3.1 饲粮添加核黄素对1～21日龄马冈鹅生长性能的影响

饲粮核黄素缺乏会影响家禽的生长性能。在肉鸡方面，当饲粮中添加适量的核黄素时，有助于提高肉鸡的生长性能，随着核黄素添加水平的升高，肉鸡生长性能呈现先增加后降低的趋势[1,8]，但低水平的核黄素(2.5 mg/kg)并不影响肉鸡生长，也不会表现出核黄素缺乏症状[4]。在肉鸭方面，唐静[6]的研究表明，饲粮中核黄素缺乏会显著降低1～21日龄北京鸭的生长性能；而Zhang等[9]的研究则发现，核黄素缺乏对14周龄种鸭的体重和生产性能无显著影响。由此可见，核黄素对家禽生长性能的影响与动物日龄、基础饲粮核黄素含量及其添加水平有关。目前关于生长前期肉鹅核黄素需要量的研究较少，本试验结果显示，饲粮核黄素添加水平对1～21日龄马冈鹅终末均重、平均日增重、平均日采食量及料重比均无显著影响。而研究表明，肉鹅盲肠绝对长度及重量均大于肉鸡和肉鸭[10]，肉鹅盲肠相对于肉鸡和肉鸭更发达。并且，除饲粮来源外，肠道菌群是核黄素的另一重要来源，研究发现动物肠道中拟杆菌门、厚壁菌门以及变形菌纲中存在大量可以合成核黄素的微生物[11]，因此推测基础饲粮中含有的核黄素以及肠道菌群所提供的核黄素可能已经满足了马冈鹅雏鹅阶段生长所需。上述结果提示，相对肉鸡和肉鸭来说，生长前期肉鹅对于核黄素营养缺乏相对不敏感。本试验条件下，饲喂不同添加水平核黄素饲粮的马冈鹅生长性能无显著差异，说明额外添加核黄素可能对鹅生长发育没有产生影响。

3.2 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅血清生化指标的影响

研究发现，饲粮核黄素水平显著影响蛋鸭血浆核黄素含量[12]，而本试验结果显示，饲粮添加不同水平核黄素对21日龄马冈鹅血清核黄素含量无显著影响，这可能是由于肉鹅的卵黄囊较大，能够依靠内源性卵黄囊营养维持前期营养需要[13]。血清生化指标中的ALT和AST活性可在一定程度上反映机体肝脏生理功能和营养代谢状况。本试验发现，饲粮添加不同水平核黄素后，21日龄马冈鹅血清ALT、AST活性没有发生显著变化，说明血浆ALT和AST活性可能不是反映鹅核黄素需要量的敏感标志物。研究表明，饲粮核黄素水平对生长育肥猪血浆AST活性无显著影响[14]，Bian等[15]的试验也表明，小鼠血清ALT和AST活性在核黄素缺乏时没有显著升高，与本研究结果一致。TP由ALB和球蛋白(GLB)组成，在机体中发挥重要的生理功能[16]。本试验结果发现，随着饲粮核黄素添加水平的升高，马冈鹅血清TP含量呈先降低后升高的趋势，对照组血清TP含量最高，说明核黄素缺乏可能影响了蛋白质的代谢。血清HDL-C、LDL-C、TC和TG含量能反映血清脂质代谢情况，核黄素添加水平可能会影响机体脂质代谢[17]。Bian等[15]研究发现，核黄素缺乏(饲粮核黄素含量为3 mg/kg)显著降低了大鼠血浆中LDL-C和TG含量。本试验结果显示，随着饲粮核黄素添加水平的升高，血清TG含量呈先上升后下降的趋势，但对血清TC、LDL-C、HDL-C含量均无显著变化。上述结果说明马冈鹅血清中不同脂质代谢指标对于饲粮核黄素添加水平呈现不同的剂量效应。

3.3 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅血清抗氧化指标的影响

核黄素具有抗氧化和抑制脂质过氧化的作用[18]，其机制可能归因于谷胱甘肽氧化还原循环机制[3]。核黄素可以提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，通过激活SOD发挥抗氧化作用[19]。Wang等[20]对大鼠和唐静[21]对21日龄北京鸭的研究均表明，核黄素能增强血清SOD活性，降低血清脂质过氧化水平，减少脂质过氧化物MDA的形成。Zhang等[22]研究发现，未添加核黄素组蛋鸭血浆MDA含量最高，GSH含量、T-SOD活性和T-AOC最低。而王爽等[12]的研究表明，随着笼养蛋鸭饲粮核黄素水平的升高，血清GSH-Px活性呈先升高后下降的趋势，但各组差异不显著。本试验结果显示，饲粮核黄素添加水平对21日龄马冈鹅血清抗氧化指标无显著影响，说明饲粮核黄素添加水平对马冈鹅机体的抗氧化性能没有产生显著影响，基础饲粮中所含核黄素可能已经满足了肉鹅发挥抗氧化能力的需要。

3.4 饲粮添加核黄素对21日龄马冈鹅肠道发育及形态结构的影响

肠道的主要功能是摄取、消化和吸收营养物质，以支持动物的生长和生理功能，同时保护有机体免受肠腔内有害化合物的侵害[23]。小肠是营养物质消化吸收的主要场所，各肠段长度及重量反映了肠段的生长发育程度[24]。在本试验条件下，与对照组相比，饲粮中添加不同水平核黄素对21日龄马冈鹅空肠、盲肠和直肠相对重量无显著影响，但降低了十二指肠、回肠和总肠道相对重量，具体原因有待进一步研究。肠道形态结构可以反映小肠消化吸收功能的强弱，绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度反映肠道组织形态，与肠道营养物质的吸收密切相关，而绒毛高度可以反映肠道与营养物质接触的面积，较高的绒毛高度通常被认为能够更好地吸收可用的营养物质[25]。本试验中，随着饲粮核黄素添加水平的升高，除个别组外，十二指肠与空肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度整体呈先升高后下降的趋势，20.8 mg/kg组显著高于对照组，肠道绒毛高度增加、绒毛高度与隐窝深度提高表明近端小肠的消化和吸收能力普遍增加[26]。因此，饲粮添加适量核黄素能够改善马冈鹅的肠道形态结构，促进肠道发育。

4 结 论

综上所述，饲粮添加核黄素对1～21日龄马冈鹅的生长性能及抗氧化能力无显著影响，但可改善21日龄马冈鹅的肠道形态结构。因此，本试验中，在笼养条件下，1～21日龄马冈鹅玉米-大麦-豆粕型饲粮中无需额外添加核黄素，即饲粮核黄素含量不低于2.48 mg/kg即可。