流感样病例中流感病毒阳性检出率的影响因素分析

韩捷思

（天津市蓟州区疾病预防控制中心业务办公室，天津 301900）

流感（influenza）是全球范围内重点监测的呼吸道传染病之一，由流感病毒侵袭所致，该病传染性强，易形成暴发式扩散，为国内外公共卫生安全带来了较大隐患[1]。在此背景下，流感监测已成为我国重点开展的传染病监测项目，其检测准确性将直接影响到后续防疫方案的制定。因此，保证流感样病例中流感病毒的阳性检出效果，是改善其疫情防控效果的重要前提[2，3]。但有报道显示[4-6]，流感病毒的阳性检出率易受到多方面因素的影响，对此，本研究收集2018 年1 月-2020 年12 月采集的1815 份流感样病例咽拭子样本，对流感样病例中流感病毒阳性检出率的相关影响因素进行分析，旨在为该病的实验室诊断准确性提升提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 于全国流感监测网络系统中收集天津市蓟州区疾病预防控制中心2018 年1 月-2020年12 月采集的1815 份流感样病例咽拭子样本，其中男948 例，女867 例；年龄1～89 岁，平均年龄（17.52±4.13）岁，所有样本均采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法完成核酸检测，其检测过程均在同一实验室完成。

1.2 纳入和排除标准 纳入标准：①受检者均符合《全国流感监测方案（2010 年版）》[7]中流感样病例定义（体温≥38 ℃，且伴咳嗽、咽痛症状）；②病例检测资料完整。排除标准：①无典型症状者；②未按标准采集者；③信息资料不全或有误者。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 于受检者发病3 d 内采集其流感样病例标本，采用专用病毒咽拭子棉签，于咽后壁及两侧扁桃体部位进行拭抹，避免触及舌部，随后迅速将棉签置入外螺旋盖采样管中，采样管内提前注入保存液（5%牛血清维持液）3～5 ml，后续送至实验室进行检测，保存温度＜4 ℃；超过48 h 不能送检则置于-70 ℃环境下保存，所有样本需在1 周内完成送检。

1.3.2 指标检测 实验室接收样本后，于3 d 内完成检测，采用Qiagen 核酸提取试剂盒（Rneasy mini kit，货号：74104）进行病毒RNA 提取，通过实时荧光定量PCR 法对其病毒进行基因分型检测，仪器为ABI7500 实时荧光定量PCR 仪（美国ABI 公司），酶试剂为One Step PrimeScriptTMRT-PCR Kit（Takara，Japan，货号：RR064A）。分型结果包括甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亚型及乙型流感病毒中的Victoria、Yamagata 型，该探针与引物均由天津市疾预控中心提供。反应程序为45 ℃条件下逆转录10 min，95 ℃条件下预热10 min，95 ℃条件下变性15 s，60 ℃条件下扩增45 s，于45 ℃检测荧光值，共循环42 个，对其实时荧光进行测定，以此绘制S 型扩增曲线，当CT 值小于40，结果判定阳性。以上任一亚型病毒阳性，既判定为流感病毒阳性。

1.4 观察指标 分析流感样病例咽拭子样本的阳性检出结果、流感病毒阳性检出率的单因素及多因素危险因素（性别、年龄、采样时间、发病、采样与送检的时间间隔）。

1.5 统计学方法 采用SPSS 21.0 软件对数据进行统计分析，计量资料以（）表示，组间比较行t检验，计数资料以[n（%）]表示，组间比较行χ2检验，流感病毒阳性检出率的相关因素采用多因素Logistic 逐步回归分析，P＜0.05 表明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 流感样病例咽拭子样本的检测结果 1815 份流感样病例咽拭子样本的检测结果中，流感病毒阴性1578 份，流感病毒阳性237 份，总阳性率为13.06%，其中季节性H3型病毒90 份（5.70%）、新甲型H1流感病毒88 份（5.58%）、Yamagata 乙型流感病毒35 份（2.22%）、Victoria 病毒23 份（1.46%）、未分型1 份（0.06%）。

2.2 流感病毒阳性检出率的单因素分析

2.2.1 性别 不同性别流感样病例的阳性检出率比较，差异无统计学意义（χ2=0.151，P=0.697），见表1。

表1 不同性别流感样病例的检测结果比较[n（%）]

2.2.2 年龄 不同年龄段流感样病例的阳性检出率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；阳性检出率由高到低依次为15～35 岁、35 岁及以上、14 岁及以下，见表2。

表2 不同年龄流感样病例的检测结果比较[n（%）]

2.2.3 采样时间 不同采样时间样本的阳性检出率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其阳性检出率由高到低依次为第一季度、第四季度、第二季度、第三季度，见表3。

表3 不同采样时间样本的检测结果比较[n（%）]

2.2.4 发病、采样与送检的时间间隔 发病、采样与送检的时间间隔越短，病毒阳性检出率越高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表4 发病、采样和送检时间间隔与流感病毒阳性检出率的关系[n（%）]

2.3 流感病毒阳性检出率的多因素分析 以流感病毒阳性检出结果为应变量（阳性=1，阴性=0），结合上述单因素分析结果进行多因素Logistic 逐步回归分析，结果显示，年龄、采样时间、采样至送检时间为流感阳性检出的危险因素（P＜0.05），见表5。

表5 流感病毒阳性检出率相关因素的多元Logistic 逐步回归分析

3 讨论

流感通常发病突然，且传染性强、传播速度快、流行面积大，易导致局部疫情的产生，现已被我国列为丙类法定传染病，及时检测、隔离与治疗是控制该病传播趋势的重要方案[8，9]。目前，流感病毒的实验室检测多以实时荧光定量PCR 法为主，可完整记录PCR 过程中的每个循环数据，其检测灵敏度及特异度均较高，且操作简单、检测速度快，现已成为流感样病例标本的首选筛检方法[10-12]。为了进一步提高流感样病例中流感病毒的阳性检出率，本研究基于实时荧光定量PCR 法检测结果对其阳性率影响因素进行了分析，结果显示1815 份流感样病例咽拭子样本的阳性检出率为13.06%，其中以新甲型H1流感病毒及季节性H3型病毒最为常见，分析原因为新甲型H1病毒及季节性H3型病毒均为近两年优势毒株，因而阳性检出率相对较高这与天津地区流感疾病的流行特点一致。此外，经单因素及多因素分析，年龄、采样时间、采样至送检时间均是影响流感阳性检出的独立危险因素，具体分析如下：

3.1 年龄 本研究中不同年龄段流感样病例的阳性检出率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其阳性检出率由高到低依次为15～35 岁年龄段、35 岁及以上年龄段、14 岁及以下年龄段，经多因素Logistic 回归分析显示，年龄是流感阳性检出的危险因素（P＜0.05）。分析认为，年龄对流感病毒的表达存在一定影响，在儿童群体中，引起流感样症状的致病因素相对较多。同时，由于年龄较小，其样本采集也相对较为困难，咽拭子标本不合格是导致阳性检出率降低的重要原因[13，14]。此外，从本研究数据来看，35 岁及以上年龄段的阳性检出情况多集中在新甲型H1病毒，这是由于该病毒与我国甲型H1亚型流感病毒疫苗株亲缘关系较远。故，我国人群既往免疫疫苗对新甲型H1N1流感可能无法提供有效保护，成人亦伴有一定的感染风险，与既往研究一致[15，16]。

3.2 采样时间 本研究结果显示，不同采样时间样本的阳性检出率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其阳性检出率由高到低依次为第一季度、第四季度、第二季度、第三季度，经多因素Logistic 回归分析，采样时间为流感阳性检出的危险因素（P＜0.05），显示这与流感的流行病学特征存在直接关联，我国处于温带地区，流感大多发生于冬春季节，因而该阶段的阳性检出率最高。刘静等[17]报道显示，2017 年天津地区哨点医院流感高发季节为1～3 月份、11～12 月份，这与本研究结果相对应。分析原因为冬春季节温度低、雨水少，空气干燥，低温、低湿可增加病毒的传播效率，导致阳性检出率的增高[18]。同时，流感病毒对温度较为敏感，其环境温度越高，病毒存活时间越短[19]。此外，夏秋季节光照强度相对较高，其阳光中的紫外线对病毒具有较强的杀灭作用，可降低该病毒的阳性检出率[20]。门玉梅等[21]研究显示，呼吸道病毒检出率在不同季节分布比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中冬季呼吸道病毒检出率最高，而后依次为春季、夏季与秋季，其病毒总检出率与月平均气温及月降水量呈显著负相关（P＜0.05）。且据刘天等[22]研究显示，流行季节是影响流感病毒核酸检测阳性率的主要因素。本研究与该研究结果相符，表明气候与环境因素对病毒的流行具有重要的影响作用，其阳性检出率可随着季节性高峰的到来而升高。

3.3 采样至送检时间 本研究中不同送检时间样本的阳性检出率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其间隔时间越短，阳性检出率越高，经多因素Logistic回归分析，采样至送检时间是流感阳性检出的独立危险因素（P＜0.05）。在PCR 检测中，其病毒分离的阳性率取决于病毒存活强度，但随着样本放置时间的延长，其细胞存活概率也逐渐下降，对其阳性检出率造成了较大影响[23]。实时荧光定量PCR 技术通常需进行多次扩增循环，以收集足够数据，建立实时扩增曲线，进而明确其CT 值，做到DNA 准确定量。但实际工作中，由于检测样本数量较少或人员不足等原因，通常需集中一定数量的样本后再行检测，由此可引起采样至送检时间间隔的延长，导致部分病毒失活，影响其检测准确性[24，25]。此外，拭子类标本大多具有采样量少、易干等特点，若送检间隔较长，易导致细菌死亡，且样本放置时间的延长可引起一定的污染风险，对其检验准确性造成了较大影响[26，27]。表明病例标本越早采集，其检测阳性率越高，及既往研究结果一致[28]。此外，据《全国流感监测方案(2010 年版)》要求，最佳送检时间均保证在48 h 内，其送检越及时，阳性检出率越高。

综上所述，流感样病例的年龄、采样时间、采样至送检时间可影响其流感阳性检出率，需充分考量其对检测结果的影响作用，以提高检测阳性率，实现早发现、早诊断。