血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂E1蛋白水平与幽门螺杆菌感染的关系研究

姚 勇， 奉 镭， 雷洪军， 张 描， 高明生

(四川省遂宁市中心医院消化内科， 四川 遂宁 629000)

胃癌在全球具有较高的发病率及死亡率，每年全球大约有70万胃癌患者死亡[1]，同时胃癌也严重威胁我国人民的健康及生命，因此有必要对胃癌的危险因素、发病机制、防治策略等作深入的探讨。研究发现，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染在胃癌的发生、发展中具有十分重要的作用。一项纳入3365名受试者的前瞻性研究证实：根除Hp的治疗可以降低胃癌患者的死亡率及发生率[2]。虽然Hp感染与胃癌的密切关系已得到大部分研究证实，但Hp导致胃癌的具体分子机制仍不清楚[3，4]。对Hp相关性胃癌发生机制的探讨，有利于制定预防以及治疗胃癌的策略。胃癌的发生、发展与癌基因及相关蛋白的异常水平密切相关。丝氨酸蛋白酶抑制剂E1(serpin peptidase inhibitor clade E member 1,SERPINE1)，又称纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)，由SERPINE1基因编码的蛋白，参与细胞迁移、增殖、分化等过程，是胃癌发生、发展过程中的关键癌蛋白。研究发现，SERPINE1可以通过调节上皮细胞间充质转分化机制，促进胃癌细胞的发生、增殖及转移[5]。如果胃癌患者在癌组织中高水平表达SERPINE1，则该患者极大可能会出现预后欠佳，生存率低下[6]。因此，SERPINE1是胃癌发生、发展的重要促进因子，可能参与了Hp相关性胃癌的发生进程。Hp感染作为胃癌发生、发展的重要风险因素，理论上应该和SERPINE1关系密切。然而，目前却没有SERPINE1与Hp关系的相关研究。本文对血浆SERPINE1蛋白水平与Hp感染的关系进行了初步的探讨，为进一步的相关机制研究提供一定的基础。

1 资料与方法

1.1一般资料:依据相应的纳入及排除标准，本研究纳入417名在遂宁市中心医院体检的成年受试者作为研究对象。本研究纳入标准为：①已完成13C呼气试验，已明确目前Hp感染状态的受试者；②临床病史及血浆生化指标均完整记录的受试者，排除标准：①既往有根除Hp的治疗史；②近一月内使用过抗生素；③近两周服用过质子泵抑制剂、铋剂等影响Hp感染的药物；④合并有恶性肿瘤、严重器官功能障碍、妊娠及其他部位的严重感染；依据受试者13C呼气试验结果，分为Hp阴性组(192例)及Hp阳性组(225例)。

1.2酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa):使用人纤溶酶原激活物抑制因子1Elisa试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司)检测血浆SERPINE1蛋白水平,具体步骤如下：①在反应板的空白孔中，加入样本及不同浓度的标准品，并进行37℃孵箱孵育；②洗板后加入生物素化抗体工作液，并进行37℃孵箱孵育；③洗板后加入酶结合物工作液，并进行37℃孵箱孵育；④洗板后加入显色底物，并进行37℃孵箱孵育；⑤加入终止液，并依据分光光度仪及标准曲线的方程，得出样本中SERPINE1蛋白水平。

2 结 果

2.1两组受试者一般情况及血浆生化指标、SERPINE1蛋白水平的比较:Hp阳性组中受试者的体重指数(BMI)、血浆SERPINE1蛋白水平、低密度脂蛋白水平(LDL)、载脂蛋白B(APOB)水平明显高于Hp阴性组受试者的相应指标(P<0.001)，两组受试者之间的年龄、性别、空腹血糖(FPG)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)，不具有统计学差异(P>0.05),见表1。

表1 比较两组受试者之间的临床数据

2.2血浆SERPINE1蛋白水平与Hp感染状态的相关性分析:依据血浆SERPINE1蛋白水平的四分位数间距，即≤5.34ng/mL,5.35～6.64ng/mL,6.65～8.37ng/mL,≥8.38ng/mL，将所有受试者分为四组(第一分位组、第二分位组、第三分位组、第四分位组)，结果发现第一分位组、第二分位组、第三分位组、第四分位组受试者Hp感染率依次为13.3%、28.57%、77.67%、97.12%，将第一分位组受试者Hp感染率作为参考，第二分位组Hp感染率是其2.14倍，第三分位组Hp感染率是其5.83倍，第四分位组Hp感染率是其7.29倍，结果提示随着血浆SERPINE1蛋白水平的不断升高，受试者Hp感染率也相应增加，两者具有明显的相关性(P<0.001),见表2。

表2 血浆SERPINE1蛋白水平与Hp感染率相关性分析

2.3血浆SERPINE1蛋白水平诊断Hp感染状态:利用血浆SERPINE1蛋白水平构建诊断Hp感染状态的ROC曲线，结果发现该ROC曲线下面积为0.906，最佳截点值取6.49ng/mL时，诊断Hp感染的灵敏度为84.4%，特异度为83.3%，提示血浆SERPINE1蛋白水平对Hp感染具有较好的预测价值。见图1。

图1 构建血浆SERPINE1蛋白水平诊断Hp感染的ROC曲线

3 讨 论

研究发现多种分子机制参与了Hp相关性胃癌的发生、发展，且SERPINE1在胃癌的进展中扮演着十分重要的角色，但目前并没有Hp与SERPINE1关系的研究。本文初步探讨了Hp感染与血浆SERPINE1蛋白水平的关系，结果发现Hp阳性受试者具有较高的血浆SERPINE1蛋白水平，Hp感染率与血浆SERPINE1蛋白水平呈正相关，且血浆SERPINE1蛋白水平具有诊断Hp感染的潜力。Hp感染导致SERPINE1水平升高的具体机制仍需要进一步研究。依据已有的研究，Hp相关性炎症反应可能会诱导SERPINE1的高表达。SERPINE1的过度表达常常由人体内多种促炎因子，如肿瘤坏死因子、白介素等所诱导[7]，因此大多数风湿性关节炎、炎症反应综合征、代谢综合征的患者体内由于炎症反应较为活跃而出现SERPINE1表达水平的升高。既往研究证实，长期Hp感染可以导致胃及十二指肠的慢性炎症，诱导机体释放多种促炎因子，如肿瘤坏死因子、白介素-1、白介素-6等[8]，可能也会促进SERPINE1的表达，提高血浆SERPINE1蛋白水平。虽然如此，进一步的临床以及基础研究仍需开展，以验证上述假设的真实性。本研究结果发现血浆SERPINE1蛋白水平对Hp感染具有一定的诊断价值，但因为样本量的问题，目前该结果并不适合临床应用。如果进一步完成多中心、大样本的研究，SERPINE1有可能成为Hp感染的血浆标志物。

除了发现Hp感染与血浆SERPINE1蛋白水平的相关性，本研究还发现Hp阳性受试者的体重指数、低密度脂蛋白水平、载脂蛋白B水平明显高于Hp阴性组受试者，提示Hp感染的个体可能合并脂质代谢异常。BMI是衡量人体肥胖的一个重要指标，其值过高常常导致严重的脂质代谢紊乱。一项大型队列研究显示，Hp阳性人群具有较高的BMI值，且BMI值与Hp感染率呈正相关，其能独立预测调查人群Hp感染的情况[9]。本研究关于BMI的结果与既往研究结果一致，但具体机制不清楚，其可能与Hp感染导致的脂质代谢紊乱有关。Hp感染与多种代谢性疾病，如：2型糖尿病、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化、非酒精脂肪肝等密切相关，具体的分子机制包括炎症反应、胃肠道微生态、激素的分泌等[10,11]。因此，Hp感染常常导致一些脂质代谢指标的异常。本研究中的Hp阳性受试者也出现了不同程度的脂质代谢指标异常，表现为高血浆低密度脂蛋白及载脂蛋白B水平。

本研究仍存在一定的问题。我们纳入的研究对象为医院里的体检人群，这部分人群对自身健康情况的关注度相对其他大多数人群较高，其更愿意到医院里来接受检查，因此这部分人群有可能无法代表大多数人群的真实情况。其次，每个地区Hp感染率并不一致，因此该研究结果在其他地区的应用受到了一定限制。

综上所述，本文初步证实血浆SERPINE1蛋白水平与Hp感染具有一定的相关性，Hp感染可能会导致血浆SERPINE1蛋白水平升高，该结论为研究Hp相关性胃癌的分子机制提供新的切入点。不仅如此，高血浆SERPINE1蛋白水平或许可作为根除Hp的适应症之一，当然还需要更加深入的基础及临床研究予以证实。