STIL和PRR11在宫颈癌组织的表达水平及其与淋巴结转移的相关性

甘 露， 刘 伟， 潘 琴， 居文惠

(1.长江大学附属荆州医院/荆州市中心医院妇科， 湖北 荆州 434020 2.华润武钢总医院放射科， 湖北 武汉 430080)

在我国宫颈癌发病逐渐趋向于年轻化使得女性生命健康受到严重威胁。宫颈癌因其病变组织位点较为特殊，极易出现浸润等原因，因此导致中晚期宫颈癌患者术后局部转移和复发风险升高，严重影响患者预后情况，其中只有50%～60%患者生存率在5年以上[1]。目前，临床上主要采取宫颈癌根治术对早期宫颈癌患者进行治疗，但在中晚期宫颈癌患者中，其治疗方式并不唯一，主要分为髂内动脉灌注化疗、术前腔内照射及术后辅助化疗等。随着相关研究不断深入，机体相关蛋白与癌症发生、发展及预后存在关联。SCL/TALl断裂点(SCL/TALl interrupting locus，STIL)基因最早在人类急性T淋巴细胞白血病患者染色体上发现，随后研究发现其可以通过介到细胞有丝分裂，来参与肿瘤发生及发展过程[2]。脯氨酸蛋白11(proline-rich protein 11，PRR11)最早发现于骨肉瘤细胞系中，PRR11是一种细胞周期相关蛋白[3]。在肺癌患者中发现PRR11水平明显升高，肺癌患者术后预后情况与PRR11水平呈现负相关，在肿瘤细胞周期中PRR11呈现节律性表达，同时也密切关系着肿瘤发生及发展过程[4]。目前国内外对于STIL和PRR11研究主要集中在结肠癌、肝细胞癌和肺癌方面[5]。但是关于宫颈癌这一领域研究较为少见，基于此本研究通过对宫颈癌组织中STIL和PRR11表达水平进行检测分析，探索其与淋巴结转移的关系，旨在为今后临床宫颈癌治疗新靶点选择及其淋巴结转移风险评估提供一定思路和意见。

1 资料与方法

1.1一般资料：选择我院2020年1月至2022年1月收治的143例宫颈癌患者作为研究对象，术中对患者宫颈癌组织和距离肿瘤边缘3～4cm的正常癌旁组织进行切除。宫颈癌患者，年龄37～67岁，平均(49.01±4.29)岁；肿瘤直径3～5cm，平均(4.23±0.52)cm；病理诊断类型：宫颈腺癌28例，宫颈癌鳞状细胞癌115例，FIGO分期：Ⅰ期69例、Ⅱ期45例、Ⅲ期25例、Ⅳ期4例；分化程度：低分化26例、中分化97例、高分化20例；淋巴转移：转移64例，无转移79例。纳入标准：①经病理活检诊断为宫颈癌，患者符合《宫颈癌诊疗规范(2018年版)》[6]中相关标准，鳞状上皮细胞异常，细胞排列呈现癌巢或腺管状，可以明显看到组织间桥和角化珠；②肝肾功能无明显异常；③心电图基本正常；④无既往放化疗药物治疗史。排除标准：①合并胃癌、肝癌等其他恶性肿瘤疾病患者；②患者存在严重精神障碍；③合并严重肝、肾等器官功能障碍；④患有严重泌尿系统及血液系统感染性疾病。

1.2观察指标：①采用蛋白质印迹法(Western Blot)对癌组织和癌旁组织中STIL和PRR11蛋白水平进行检测。首先将暂存于-80℃冰箱中的宫颈癌和癌旁组织取出，进行组织匀浆，离心后取上清液，采用总蛋白提取试剂盒中说明书进行总蛋白提取，测定蛋白含量及纯度，将上样缓冲液与待测液按一定比例进行混匀，然后在凝胶中上样，完成聚丙烯凝胶电泳(PAGE)实验。电泳完成后将蛋白转到PVDF膜上，用5%牛血清白蛋白(BSA)在室温下封闭PVDF膜1h，并与目的蛋白特异性抗体在4℃下孵育过夜。然后，加入对应二抗在室温下孵育1h，孵育完成后进行显色反应，最后通过凝胶成像仪进行显影，对蛋白相对表达量进行计算。STIL抗体、PRR11抗体均购于上海长岛生物技术有限公司。②采用实时荧光定量PCR技术(Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测STIL和PRR11基因相对表达量。先用RNA提取试剂盒提取组织中总RNA，随后通过逆转录试剂盒将RNA逆转录成cDNA，然后通过q-PCR试剂盒以cDNA为模板对目的基因进行实时荧光定量检测，q-PCR扩增条件：95℃预变性5min，95℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环。采用2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量，各目的基因引物序列，见表1。PCR相关试剂盒均购于北京擎科生物科技有限公司，操作均按照说明书严格进行。

表1 PCR相关基因引物序列

2 结 果

2.1STIL和PRR11在宫颈癌组织患者中表达情况：宫颈癌组织中STIL、PRR11蛋白水平及基因相对表达量均明显高于癌旁组织(P<0.05)。见图1，表2。

表2 组织STIL PRR11水平变化

图1 宫颈癌组织中STIL和PRR11水平情况

2.2STIL和PRR1水平与FIGO 分期关系：FIGO分期越高，STIL、PRR11蛋白水平越高，各组间差异显著(P<0.05)，见表3。

表3 不同FIGO分期者宫颈癌组织中STIL PRR11蛋白水平比较

2.3STIL和PRR11表达水平与淋巴结转移关系：将术后病理学检查结果作为淋巴结转移金标准，患者出现淋巴结转移64例，未转移79例。淋巴结转移患者中STIL和PRR11蛋白水平明显高于未转移(P<0.05)。见表4。

表4 有无淋巴结转移者宫颈癌组织中STIL和PRR11蛋白水平比较

2.4STIL和PRR11对宫颈癌淋巴结转移的诊断价值：STIL蛋白、PRR11蛋白诊断宫颈癌淋巴结转移的AUC分为0.733、0.729、(P<0.05)。见图2、表5。

图2 STIL和PRR11诊断宫颈癌患者淋巴结转移ROC曲线

表5 STIL和PRR11诊断淋巴结转移的ROC特征

2.5STIL和PRR11蛋白表达之间相关性分析：STIL蛋白水平与PRR11蛋白水平呈现正相关(r=0.290、P=0.003)。见图3。

图3 STIL和PRR11蛋白水平相关性散点图

3 讨 论

在女性恶性肿瘤中宫颈癌最为常见，全世界范围内，因其人群、地域不同致使宫颈癌发病率和死亡率也呈现出差异。据数据统计，我国近20年宫颈癌发病率呈逐步上升态势，女性健康因宫颈癌多发性受到严重威胁，因此，社会和政府对宫颈癌给予重点关注并实施了前所未有的防范措施[7]。目前，宫颈癌研究重心已经开始从之前的治疗向预防方面转变。宫颈癌病理过程较为复杂，其中包括多种癌基因和抑癌基因的异常激活与失活，并伴随多阶段、多因素及多步骤过程[8]。因此对宫颈癌发展相关分子机制进行深入研究有助于治疗新靶点发现，对提高宫颈癌患者治疗效果、预后改善具有积极影响。

细胞在增殖期中会大量表达STIL，尤其是在肿瘤细胞中，但是在机体正常组织中表达量极少。国外一些研究表明STIL表达水平上调有助于肿瘤生长和转移，可以明显降低患者预后水平[9]。说明在肿瘤中STIL可能属于一种致病基因。本研究结果发现STIL表达水平在宫颈癌组织中明显上升，且在淋巴结转移患者中表达量要明显高于未转移，随着FIGO分期越高，其表达量呈现上升趋势。此研究结果与李垚[10]研究结果相似。分析其原因可能是与中心体异常扩增有关。研究证实，肿瘤发展与中心体密切相关，中心体异常主要两大表现分别是中心体数量异常以及结构上异常。宫颈癌组织中中心体复合蛋白会大量富集。中心体大量产生会造成宫颈癌逐渐恶化，加快其转移和浸润速度。STIL是一种参与中心体合成的蛋白，其可以在细胞有丝分裂间期促进前中心粒合成，造成中心粒复制数量增加。STIL还可以通过对DKl/CyclinBI复合体进行激活，从而促进癌细胞有丝分裂效率，同时调控下游一系列基因表达来促进肿瘤发展。因此STIL表达水平会随着FIGO分期升高及淋巴结转移而增加。

PRR11位于染色体17q23区，其可以通过对糖皮质激素受体信号通路进行调控而参与到肿瘤形成过程中。在肿瘤细胞中PRR11高表达会加快细胞周期进展，提高肿瘤细胞增殖能力，其同时可以促进新血管形成帮助肿瘤转移[11]。在肺癌组织中PRR11水平上调会加快肿瘤转移和分化[12]。本研究结果显示，PRR11在宫颈癌组织中表达水平以及其与FIGO分期、淋巴结转移的关系与STIL类似。此研究结果与赵郑[13]等研究结果存在部分相似。究其原因可能是当PRR11表达上调后可能通过促进β-连环蛋白(β-catenin)和波形蛋白(vimentin)表达，激活宫颈癌细胞中上皮间质转换(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)过程，导致宫颈癌进一步恶化和转移，所以PRR11水平会随着宫颈癌FIGO分期增加和淋巴结转移而增加。我们对PRR11和STIL蛋白在诊断淋巴结价值进行分析。发现PRR11、STIL蛋白在诊断宫颈癌淋巴结转移过程中均具有一定诊断价值，进一步采用Pearson分析显示在宫颈癌患者中STIL蛋白水平与PRR11蛋白表达呈现正相关，提示这两种蛋白可能存在相互调控关系，在宫颈癌发生及发展过程中可能起着协同促进作用，将来在临床治疗宫颈癌中可能是一种新型潜在靶点。但是目前关于这两种蛋白具体调控机制尚不明确，还需通过后续实验加以证明。

综上所示，在宫颈癌组织中，STIL和PRR11水平都会上升。我们推测在宫颈癌患者中STIL可能通过调控细胞有丝分裂进程和中心粒形成来参与了宫颈癌淋巴结转移和发展过程。而PRR11可能是通过激活EMT过程参与宫颈癌发展和转移，两者蛋白之间表达可能存在联系，共同促进了宫颈癌发生及发展。