非酒精性脂肪性肝病患者血清微小RNA-143、Toll样受体2水平变化及其临床意义*

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)主要临床病理特征为弥漫性肝细胞大泡性脂肪变，包括单纯性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，可发展为肝纤维化、肝硬化，甚至肝癌。NAFLD起病隐匿，不易觉察，其中肝纤维化、肝硬化是影响NAFLD患者不良预后的重要因素，因此，及早诊断对患者的治疗和预后有重要意义

。微小RNA(miRNA)是一类非编码 RNA ，在转录后水平调控基因表达，在细胞增殖、分化、凋亡、纤维化等过程发挥着重要作用，其表达异常与多种疾病有关。有研究表明miRNA是慢性肝损伤诊断和预后的标志物，与NAFLD的发展有关

。Toll样受体(TLRs)属于模式识别受体家族，在免疫反应中有重要作用，研究表明，TLRs 与肝纤维化的发生、发展密切相关

。TLR2属于TLRs家族，在多种慢性疾病所导致炎症反应中发挥重要作用。miR-143、TLR2在NAFLD患者血清中的表达及与肝纤维化的关系尚不清楚，笔者检测NAFLD患者血清miR-143、TLR2表达情况，并探讨两者与患者肝纤维化的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年1月至2020年7月在本院治疗的NAFLD患者121例，其中男73例，女48例，年龄21～74岁，平均(45.30±8.50)岁。根据NFS 评分将121例患者分为非进展性肝纤维化组(NFS≤0.676分，简称非进展组)68例和进展性肝纤维化组(NFS>0.676分，简称进展组)53例。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：①所有患者的诊断符合中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2010年制定的《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南》中标准

；②无饮酒史或饮酒折合乙醇量小于140 g/周(女性小于70 g/周)；③影像学诊断为弥漫性脂肪肝；④患者知情并同意。排除标准:①重症感染、血液疾病或患者处于自体免疫性疾病活动期；②病毒性肝炎、自身免疫性肝病、药物性肝病等可导致脂肪肝的疾病；③临床资料不全者。

选择同期健康体检人员100例作为对照组，其中男65例，女35例，年龄22～75岁，平均(46.10±8.70)岁。

工作人员倾听、记录群众意见后，先在锻炼对象中开展认领，超出能力权限的通过临时党支部交办到所驻社区城市基层党建联建委员会，在驻区单位党员、住区党员中开展认领；对需要市委、市政府层面解决的，通过城市基层党建街道共建委员会上交到城市基层党建工作领导小组，上报到市委市政府，变成全市共同行动，让党及时听到了群众的“声音”，为市委市政府决策提供了参考。

2.5 肝纤维化患者NFS评分与miR-143、TLR2等各指标的相关性分析 见表6。相关性分析显示肝纤维化患者NFS评分与TLR2、ALT、AST、TC、TG、LDL-C、HbAlc呈正相关，与miR-143、HDL-C呈负相关(

<0.05)。

1.4.1 样品采集及保存 血清样品：采集NAFLD患者空腹静脉血5 ml，室温静置15 min后，1 500 r/min离心20 min后收集血清，-80℃保存用于生化检测。

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1.4 方法

报道称，虽然网上贸易持续增长，但这并不一定意味着在现实世界中实体零售生意的消亡。根据普华永道的统计，近60%的德国人每周至少会在实体零售店中掏一次钱包。实体店购物的人数甚至多于3年前，当时只有46%的人进入实体商店购物。报道称，然而这种变化现在也出现逆转：一些网上供货商也冒险进入现实世界。亚马逊现在也开始办实体零售店。在美国已经出现首批亚马逊实体零售商店。

1.3 主要仪器与试剂 RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司，miR-143、U6引物由南京金斯瑞生物科技股份有限公司合成，人Toll样受体2(TLR2)采用ELISA检测试剂盒，购自美国eBioscience公司。

2.1 NAFLD患者和对照组人员miR-143、TLR2检测结果 见表2。

建筑企业工程管理模式的创新受到该企业生产力的直接影响，生产力水平的高低造就了企业不同的工程管理模式。首先，提高生产力水平的核心因素是劳动者，劳动者在企业生产中发挥至关重要的实质性作用，对日后的工程质量与企业的效益获得影响颇大。应该加强对劳动者的选用与管理工作，切合实际地将高效率的劳资管理工作落实到实处。其次，建筑企业生存与发展的主要推动力是劳动对象，劳动对象的获得必须通过较为激烈的市场竞争，通过企业自身优势获得。因此，通过劳动者与劳动对象而提高企业生产力水平，进而逐渐加强了企业工程管理模式的创新速度与规模[3]。

从概念表征过程来看，是否正确理解“基因”概念，不仅需要准确提取概念中的关键词，如是有、遗传效应、DNA片段，而且还需要理解关键词的正确含义，进而能够运用已有的认知结构，抽象概念的内涵。本研究以表征理论为基础，以人教版高中生物《必修2·遗传与进化》教材的相关内容为素材，编制了“基因概念表征调查问卷”，在征求学科专家意见的基础上，进行了问卷试验，其效度和信度经检验，均达到要求。问卷设计细目表见表2。其中“有氧呼吸”概念表征问卷细目表及编制具体参见张素燕等人撰写的《不同智力类型学生“有氧呼吸”概念表征的研究》。

2.3 NAFLD患者和对照组人员血脂检测结果 见表4。

2 结果

1.4.2 miR-143的检测 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-143。使用试剂盒提取RNA和反转录合成cDNA后，使用qRT-PCR试剂盒测miR-143水平，引物序列根据miRbase数据库公布的序列，由南京金斯瑞生物科技股份有限公司设计并合成，见表1，反应总体系20 μl，PCR反应条件：95℃，120 s；95℃，75 s；65℃，60 s；72℃，30 s，38个循环。用U6作为内参照，采用2

法对外周血miR-143表达水平进行定量分析。

2.2 NAFLD患者和对照组人员肝肾功能检测结果 见表3。

1.4.4 检测肝肾功能血脂计算体重指数 肝功能包括[丙氨酸氨基转移酶(ALT)，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、白蛋白(Alb)、乳酸脱氢酶(LDH)、血红蛋白(Hb)、总胆红素(TBil)、肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)；血脂包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)。计算体重指数BMI=体重(公斤)/身高(米)

。

1.4.3 检测血清TLR2水平 采用酶联免疫吸附法检测血清TLR2水平，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行操作。

2.4 非进展组和进展组患者血清miR-143、TLR2检测结果 见表5。

本研究经过本院伦理委员会批准，患者均知情同意并签署知情同意书。

3 讨论

研究资料表明，NAFLD发病率逐年增加，是肥胖等疾病的并发症之一，NAFLD 患者发病初期可无任何临床症状，若不及时治疗，易发生肝细胞变性、肝纤维化等，最终导致肝硬化。研究证实，肝纤维化是一个可逆的过程，若能早期诊断与治疗，可减轻、阻断肝纤维化进展

。

miRNA参与多种肝脏疾病的病理过程，在抑制肝纤维化进展中发挥重要作用

。Tu等

研究表明，在肝抗原S100与脂多糖诱导的自身免疫性肝炎与肝细胞损伤小鼠模型中，miRNA-143-3p通过调节TAK1磷酸化，减弱肝纤维化进程。Zheng等

研究表明，miR-143通过下调NF-κB p65蛋白表达，引发了NF-κB信号转导通路诱导肝癌细胞凋亡。本研究结果显示，与对照组比较，NAFLD患者血清miR-143表达水平降低，与非进展组比较，进展组患者血清miR-143表达水平也降低，提示miR-143表达量减少可能与NAFLD患者肝纤维化发生有关。

TLRs为天然免疫分子，主要分布在巨噬细胞、成纤维细胞、中性粒细胞等免疫细胞表面，在机体免疫应答过程中发挥重要作用，在肝脏TLRs主要在肝星状细胞、肝细胞和 Kupffer 细胞表面表达，TLR2为TLRs家族成员，其高表达在重症肝损伤、慢性化病毒感染等方面起重要作用

。邵丽春等

研究表明，慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞中TLR2表达水平显著升高，与慢性乙型肝炎的发病、发展及预后密切相关。研究表明，在D-氨基半乳糖联合脂多糖(LPS)诱导的急性肝衰竭大鼠肝组织中TLR2水平升高，解毒化瘀颗粒可以显著改善肝组织坏死和炎性细胞浸润，使肝组织中TLR2水平明显降低

。本研究结果显示，NAFLD患者血清TLR2水平显著升高，且进展组患者血清TLR2表达水平较非进展组患者明显升高，提示TLR2可能促进NAFLD患者肝纤维化进程。

关于公司，郑斌董事长又一次强调“精益求精”四个字，恰如精密达一直专注于印后。智能化是公司发展的方向，郑斌董事长对此也有自己的理解：于精密达而言，智能化是一个“在路上”的过程，企业要一直进步和创新。精密达成立的24年里，正是在不断调整中顺应趋势，经历必然的发展过程。印刷设备要实现智能化，前提是机械化和自动化。如今，机械化已经实现，自动化正在实现，具有选择性能的智能化正在努力实现，而在智能化的基础上还要再实现“互联网+”，远程控制等。

肝纤维化发生受多种因素影响，研究表明，脂质代谢紊乱是NAFLD发病重要因素之一，糖脂代谢状态的紊乱可促进肝纤维化的进程，脂质过氧化可进一步加重肝脏炎症反应，从而导致肝细胞坏死、肝脏纤维化

。本研究结果显示，NAFLD患者血清TC、TG、LDL-C、HbA1c水平显著升高，HDL-C水平显著降低，说明患者体内存在糖脂代谢异常。另外NAFLD组患者血清ALT、AST水平升高说明患者存在一定肝损伤。肝纤维化是慢性肝炎、肝癌等肝脏疾病发生发展的中间环节，由各种致病因素引起肝脏慢性损伤和炎症，大量细胞因子激活，导致大量外基质(ECM)释放，致使ECM 过度沉积引起肝纤维化

。肝纤维化与慢性炎性反应密切相关，TLRs作为炎性反应的触发器，在肝纤维化的发生、发展过程中发挥重要作用。本研究结果提示miR-143表达降低与TLR2表达升高与NAFLD患者肝纤维化发生有关，但二者具体作用机制尚不清楚。Liu等

研究表明，肝癌组织中miR-143表达下降，TLR2表达增加从而促进肝癌细胞的增殖与侵袭，表明二者可能存在负向调控关系。

综上所述，在NAFLD肝纤维化患者血清中miR-143低表达和TLR2高表达与肝纤维化有关，可能作为预测NAFLD患者肝纤维化潜在的标志物。但二者的具体作用机制仍需做进一步研究。

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