免疫印迹法HIV-1抗体检测结果不确定者的转归分析

孙 琦，曲新艺，徐 莉

（威海市疾病预防控制中心，山东 威海 264200）

人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是获得性免疫缺陷综合征（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）的病原体。免疫印迹法是HIV抗体检测的确认方法之一，但HIV早期感染、特殊体质、试剂设计等影响因素会导致HIV抗体的检测结果出现“不确定”。随着样本检测量的增多，大量的HIV抗体“不确定”结果不仅给实验室检测工作及AIDS的防治工作带来诸多问题，同时也给受检者造成严重的负面影响及心理负担[1]。本研究拟通过分析HIV-1抗体不确定者的初筛结果、免疫印迹法带形及其转归情况，为HIV抗体的准确检测和AIDS的早期诊断、有效防治提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

从2011—2020年威海市各区县疾病预防控制中心、医疗机构、采供血机构送检的“HIV感染待确定”血清或血浆样本中，由威海市疾病预防控制中心复检出997例阳性样本，其中有75例HIV-1抗体的免疫印迹法检测结果为不确定，对这75例患者进行随访。

1.2 方法

采用人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒[酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），美国伯乐公司，不区分HIV抗原抗体]，人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体检测试剂盒（胶体硒法，美国Alere Medical公司）进行初筛。采用人类免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法，新加坡MP生物医学亚太私人有限公司）进行补充试验。检测仪器为Coda全自动酶标仪（美国伯乐公司）和Profiblot 48 全自动蛋白印迹仪（瑞士TECAN公司）。HIV-1抗体不确定的判断标准参照《全国艾滋病检测技术规范》（2009年修订版）[2]中的规定（出现HIV抗体特异条带，但不足以判定阳性）报告HIV抗体不确定。

1.3 统计学方法

利用Excel 2007软件、Stata 13.0软件、RStudio 14软件进行统计分析。计数资料以例或率表示，组间比较采用连续校正χ2检验。在ELISA结果分析中，以S/CO值作为统计变量，以最终诊断结果作为“金标准”，设定预测模型，采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析ELISA S/CO值判定HIV-1抗体不确定样本为阳性的效能。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HIV-1抗体检测结果为不确定的患者分布及转归情况

75例HIV抗体检测结果为不确定的患者中，男64例（85.3%）、女11例（14.7%），年龄（36.13±13.77）岁。75例患者中有53例完成随访，随访时间为10～721 d；失访22例。在53例成功随访的患者中，男性转阳率为95.4%（42/44），女性转阳率为44.4%（4/9），不同性别转阳率差异有统计学意义（χ2=12.802，P＜0.05）。75例患者的转归情况见表1。

表1 75例HIV抗体检测结果为不确定的患者的转归情况 例

2.2 HIV-1抗体检测结果为不确定患者初筛检测结果与随访后确证结果的比较

53例随访患者中，2种初筛试剂均阳性45例，与随访后确证结果的阳性符合率为100%；2种初筛试剂单阳性8例，而随访后确证结果仅1例阳性，阳性符合率为12.5%（1/8）。见表2。

表2 2种初筛试剂检测结果与确证结果对比 例

2.3 ELISA S/CO值判定HIV-1抗体不确定样本为阳性的效能

以最终诊断作为金标准，根据ELISA S/CO值（0.03～12.58）绘制ROC曲线。ELISA S/CO值判定HIV-1抗体不确定样本为阳性的曲线下面积（area under curve，AUC）[95%可信区间（confidence interval，CI）]为0.969（0.920～1.000），最佳临界值为4.995，敏感性为84.8%，特异性为100%，Youden指数为0.848，阳性预测值为100%，阴性预测值为50%，总体正确率为86.8%。见图1。

图1 ELISA S/CO值判定HIV-1抗体不确定样本为阳性的ROC曲线

2.4 ELISA S/CO值与免疫印迹法带型及转归结果的关系

随着ELISA S/CO值的增大，免疫印迹法带型更复杂，不确定样本的转阳率逐渐升高。有1例样本的ELISA S/CO值为11.57，胶体硒法为阴性，免疫印迹法未出现条带；15 d后再次检测，ELISA、胶体硒法和免疫印迹法均为阳性。免疫印迹法不确定带型主要有env带的gp160、gp120和gag带的p24、p17，pol带出现较少。见表3。

表3 ELISA S/CO值与免疫印迹法带型分布的关系

2.5 HIV-1抗体不确定样本转归的随访时间及免疫印迹法条带的变化

7例随访后转为阴性的HIV-1抗体不确定样本的随访时间为24～115 d，免疫印迹法条带数无未增加，有的甚至减少了。46例随访后转为阳性的HIV-1不确定样本的随访时间为10～721 d，免疫印迹法env带gp41和gag带p66、p51的出现率均随随访时间的延长而升高，其他条带变化无规律。见表4。

表4 46例随访后转为阳性的HIV-1不确定样本的随访时间及免疫印迹法条带的变化

3 讨论

HIV感染后数周，人体内会出现抗HIV特异性抗体反应，称为血清转阳。HIV体液免疫应答的高峰约出现在感染第12周，包括抗被膜抗体和抗核心蛋白p24抗体[3]。免疫印迹法是目前应用最广泛的HIV确证试验，但常会出现不确定结果。我国近年来的研究结果显示，HIV初筛阳性而免疫印迹法检测结果为不确定的样本占2%～15%[4-5]。本研究结果显示，997例HIV初筛阳性样本中，免疫印迹法检测结果为不确定的样本占7.5%（75/997）。国内外有很多学者对导致HIV抗体检测出现不确定的影响因素进行了研究[6-8]，原因主要有以下几个方面：（1）由于怀孕、过敏体质、自身免疫性疾病、肿瘤等特殊生理或病理状况的存在，导致检测时出现非病毒蛋白抗体的交叉反应；（2）由于试剂盒设计过程中宿主细胞蛋白纯化、检测过程中的样本处理等原因导致的非特异性反应；（3）处于HIV感染的早期，抗体滴度低，易出现不确定结果，但随着病程的进展，最终会转为 HIV 抗体阳性；（4）处于AIDS的终末期，机体免疫力降低，抗体水平下降，导致不确定条带反复出现。《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版）[9]优化了抗原抗体、核酸检测的流程及不确定结果的随访要求，为不确定结果提供了快速有效的试验方案和随访策略。

本研究结果显示，ELISA的敏感性和特异性均高于胶体硒法，2种初筛试剂的检测结果与确证结果的阳性符合率为100%；ROC曲线分析结果显示，ELISA S/CO值判定HIV-1抗体不确定样本为阳性的AUC为0.969，最佳临界值为4.995，敏感性为84.8%，特异性为100%。当 ELISA S/CO值＞4.995时，ELISA与确证结果的阳性符合率为100%，提示利用S/CO值的最佳临界值判断HIV-1抗体不确定样本有较高的临床价值[10]。本研究中有1例样本的ELISA S/CO值为11.57，胶体硒法为阴性，免疫印迹法未出现条带，15 d后再次检测，ELISA、胶体硒法和免疫印迹法均为阳性。该例患者可能处于HIV感染的极早期，虽然ELISA阳性，但免疫印迹法未检测到相应的特异性抗体。由此可见，对于疑似窗口期感染的患者，除了要及时沟通，做好随访和复检工作外，有条件的地区建议加做HIV RNA检测，以辅助诊断HIV感染。由于威海市疾病预防控制中心尚未配备HIV核酸检测系统，因此本研究只针对HIV-1抗体不确定样本的筛查结果和免疫印迹法结果进行分析。另外，本研究还总结了HIV-1抗体不确定样本转归的随访时间和免疫印迹法条带的变化情况，为判断HIV感染者的感染时间及状态提供参考。

综上所述，HIV-1抗体检测的不确定结果可通过胶体硒法、ELISA S/CO值和免疫印迹法条带的分析来协助判断。如能结合HIV核酸检测、流行病学调查和临床症状等进行综合分析，将进一步提高HIV感染诊断的准确率。