一种油乳剂兽用疫苗冷链运输方法的标准化建立

王福清，亢和平，邢 瑞，杜继红，赵丽霞，郭建军，杨冬梅，乌日罕，郭 宇，齐 彪，张林冲

（1.中科医药行业生产力促进中心，北京 100038；2.金宇保灵生物药品有限公司，内蒙古 呼和浩特 010111；3.北京市兽药饲料监测中心，北京 101127；4.内蒙古自治区动物疫病预防控制中心，内蒙古 呼和浩特 010000；5.内蒙古自治区农畜产品质量安全中心，内蒙古 呼和浩特 010000）

0 引言

随着我国规模化养殖的逐年发展，动物疫病的防控水平也随之不断提高，兽用疫苗作为动物疫病防控的主要措施，其质量对于动物疫病的防控效果起着至关重要的作用。兽用疫苗通常情况下是指用于免疫接种以达到预防动物病毒病、细菌病或寄生虫病的生物制品。按照疫苗株构建技术或抗原设计技术的应用情况，可以分为传统疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗以及抗独特型疫苗等。

兽用疫苗的生产工艺依据疫苗的材料、用途、剂型、接种方式、感染性不同，一般包括：培养、灭活、浓缩、纯化、冻干、乳化、灌装等关键技术。近些年，兽用疫苗的生产工艺有了长足的发展，尤其在大规模反应器、先进的纯化技术用于兽用疫苗生产后，生产规模、产品质量都得到了显著提升。

但是，疫苗质量的管控是一项系统工程，生产疫苗所用原辅材料的质量、生产工艺的水平、佐剂的效果以及疫苗的保存条件均对疫苗的“安全、高效、均一、稳定”的特性影响显著。近些年，各企业对于原辅料均建立了严格的质量标准，生产工艺也从硬件、软件不断开发提升，佐剂也从传统的铝佐剂、弗氏佐剂等传统佐剂陆续增加了纳米材料佐剂、γ-干扰素（IFNγ）、白细胞介素（Interleukins，ILs），脂质体、免疫刺激复合物（ISCOMs）等新型免疫佐剂。但是，对于疫苗“高效、稳定”影响巨大的疫苗储存、运输技术未见深入研究报道。

冷链运输是指运输的全过程中运输货物始终保持一定的温度，包括装卸搬运、变更运输方式以及更换包装设备等环节。近些年，冷链运输技术逐步成熟，包括移动制冷技术、保温箱制造技术、冷链运输监控及管理技术等方面发展有明显提升。本文通过对兽用疫苗冷链运输技术的发展现状和水平进行总结和分析，为兽用疫苗的冷链技术进行深入研究，从而确保合格疫苗从生产端到用户端的冷链保障，降低疫苗有效成分的裂解率，从而提高疫苗的“高效、稳定”特性，为疫苗的防疫效果打下坚实基础。

1 材料

口蹄疫O 型疫苗、其它辅助材料，金宇保灵生物药品有限公司。离心机，美国Beckman。其它耗材、试剂，金宇保灵生物药品有限公司。

2 方法

2.1 保存方法。将口蹄疫O 型疫苗取样检测破乳146S、剂型，然后将疫苗分为3 组，每组12 个样品，分别存放于-20℃、2～8℃以及25℃，每月取样检测146S、观察剂型。

2.2 检验方法。采用蔗糖梯度离心法检测146S；通过滴水试验检测疫苗剂型。

3 疫苗保存温度标准建立方法

依据疫苗的特性，兽用疫苗的保存温度一般包括-20℃、2～8℃两种保存方法。其中活疫苗主要为冻干疫苗，该类疫苗一般需要在-20℃条件下储存和运输，防止病毒或细菌死亡导致效力降低；灭活疫苗一般需要添加佐剂，该类疫苗主要在2～8℃下储存或运输，不但要防止温度过高，也要防止温度低于0℃导致疫苗冻结，温度异常会导致疫苗变性或疫苗的剂型发生改变。

3.1 疫苗保存温度对有效性影响。疫苗保存温度对于疫苗的效力有明显的影响，疫苗保存温度标准的建立是疫苗运输条件设定的关键。试验以口蹄疫O 型疫苗为例开展了一种疫苗的保存温度标准建立，通过表1 可以看出，该口蹄疫疫苗在2～8℃下的裂解率最低，-20℃下裂解率在第10 个月达到94.8%，25℃在第8 个月达到100%。因此，从裂解率来看，口蹄疫O 型疫苗为了保证其效力，保存温度应为2～8℃。详细数据见表1；不同温度下口蹄疫O 型疫苗稳定性对比如图1 所示。

表1 不同保存温度下口蹄疫O 型疫苗146S 裂解对比（μg/ml）

图1 不同保存温度下口蹄疫O 型疫苗146S 裂解率对比

3.2 疫苗保存温度对稳定性的影响。疫苗保存温度不仅影响疫苗的效力，同时对于疫苗的剂型也会存在很多不确定性因素。试验仍以口蹄疫O 型疫苗为例开展了一种疫苗的保存温度对疫苗稳定性影响的摸索。口蹄疫O 型疫苗是一种水包油包水型双相疫苗，通过不同温度保存可以看出，在2～8℃下该疫苗的剂型12 个月保持稳定，-20℃下1 个月发生分层，25℃下1 个月发生分层。因此，从稳定性来看，口蹄疫O 型疫苗为了保证其稳定性，保存温度应为2～8℃。详细数据见表2。

表2 不同保存温度下口蹄疫O 型疫苗稳定性对比

通过以上试验，从疫苗的有效性、稳定性两个方面评价了口蹄疫O 型疫苗的保存温度应为2～8℃。

4 疫苗保存、运输环节关键点建立

建立疫苗保存温度的标准后，应就疫苗保存、运输的整个环节进行梳理，确定疫苗整个运输过程可能影响温度的环节，并建立相应制度以确保疫苗始终在标准温度下进行操作和转运。

4.1 疫苗出库关键点建立。疫苗出库包括装卸、改变运输方式、改变包装设备等操作，该阶段疫苗的温度与疫苗的出库时长有直接关系，出库时长由转运距离、单次出库量决定。因此，在疫苗的出库过程中应设定相应标准，尽量实现“门对门”，“快速”的操作原则，保证疫苗离开冷库后及时转运至冷链运输车中。

4.2 疫苗运输关键点建立。疫苗运输过程中存在很多不确定性，冷链设备制冷异常、制冷不开、长时间停车等异常情况均会对疫苗的保存温度造成影响。因此，该环节应建立温度监控系统，如在线温度远程监控、冷链温度记录仪等设备。目前，温度监控或记录已陆续成为疫苗厂家必要冷链保障的方法，很多厂家采用车载温度记录仪、随车电子温度连续记录仪、远程监控APP 等相结合的方式监控疫苗运输过程温度。

5 疫苗终端储存、使用关键点建立

5.1 疫苗终端储存关键点建立。兽用疫苗在终端用户处的储存往往会被兽用疫苗厂家和用户所忽略，其实该环节也是疫苗温度保障的关键环节。兽用疫苗因使用环境的因素，往往会存在疫苗储存量过大以及储存条件不佳的情况。一般用户会选择将疫苗储存在冰箱中，因储存量大疫苗会贴壁，会造成贴壁疫苗温度过低而发生冻结的可能；或者因冰箱没有温度校验或故障，导致温度不准造成疫苗高温。因此，一方面如果采用冰箱储存应保证单个冰箱的储存数量，避免疫苗贴壁储存，最好经验证后再确定储存量；其次要在冰箱中放置温度计，定时观测冰箱温度，以保证冰箱温度正常。

5.2 疫苗使用关键点建立。疫苗在使用前应做回温处理，疫苗如果不回温，直接接种动物，由于有30 多℃的温度差，极易引起猪只“冷应激”，猪只痛感增强，甚至会导致免疫失败。但是回温过程应在监控范围内进行，不能长时间回温，可以采用水浴回温、自然回温等方法，回温后应及时使用，避免回温过度对疫苗质量造成影响。

6 储存、运输、使用不当示例

在疫苗储存、运输和使用过程中，因温度异常的情况时有发生，如因制冷设备异常、环境温度等因素使疫苗低于0℃导致疫苗冻结或高于8℃；油乳剂疫苗长时间储存温度超出2～8℃的范围会导致有效成分裂解、疫苗分层，从而导致注射效力低、安全差等问题。如图2 所示是由于低温、高温导致油乳剂疫苗发生分层的示例图片。

图2 油乳剂疫苗低温（-15℃）冻结、高温（37℃）后发生分层

7 讨论与小结

综上所述，本文建立了一种“储存温度评估—运输环节关键点控制—终端用户储存、使用关键点管理”的流程规范，该方法就兽用疫苗从生产到终端使用过程的冷链保障提供了一种方法，以实现合格疫苗经运输后不发生“安全、效力、均一、稳定”等质量方面的变化。