广西北部湾地区鼻咽癌患者临床特点和P53、EGFR表达情况分析

宁燕华 ，施国元 ，陈世好 ，梁丹 ，赖朝培

(广西钦州市第一人民医院 a.病理科，b.耳鼻喉科，广西钦州 535000)

鼻咽癌是临床上较为常见的一种EB病毒相关性恶性肿瘤，我国广西是鼻咽癌的高发区之一，亦是少数民族聚集地，存在人群遗传背景的特点。鼻咽癌的发病部位是鼻咽黏膜上皮，上可侵入颅底，下可引发颈部淋巴结转移，尽管医疗技术与日俱进，大部分患者均可获得较佳的临床治疗效果，但仍有部分患者预后不良。鼻咽癌的准确诊断对临床治疗方案的制定具有极其重要的意义，亦是改善患者预后的关键。然而，由于鼻咽癌具有较强的隐匿性，大部分患者一经确诊便已是中晚期，预后往往较差。故此，如何有效诊治鼻咽癌显得尤为重要，亦是目前临床研究的热点。随着近年来相关研究的逐渐深入，越来越多的学者发现，P53及表皮生长因子受体(EGFR)等基因于多种恶性肿瘤的发生、发展过程中均起着至关重要的作用。由此，本文通过研究P53及EGFR表达与广西北部湾地区鼻咽癌患者临床特点的相关性，旨在为临床鼻咽癌的诊治提供参考依据。

1 资料与方法

纳入广西北部湾地区医院从2014年2月—2016年12月收治的鼻咽癌患者60例进行研究。其中男性患者28例，女性患者32例；年龄31～78岁，平均(57.22±10.24)岁；体重指数(BMI)值18～27 kg/m，平均BMI值(23.84±1.35)kg/m；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期25例；有淋巴结转移20例，无淋巴结转移40例。

纳入标准：(1)所有患者居住于广西北部湾地区时间在1年以上；(2)年龄均在18周岁以上；(3)入院前尚未接受手术、化疗、放疗以及生物治疗等相关抗肿瘤治疗；(4)无临床病历资料缺失；(5)所有受试者均经病理检查确诊为低分化鳞状细胞癌。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤者；(2)伴有严重感染性疾病、免疫性疾病以及血液系统疾病者；(3)心、肝、肾等重要脏器发生损伤者；(4)意识障碍或伴有精神疾病者；(5)研究期间因故退出或失访者。纳入对象均在知情同意书上签字，并获批于医院伦理委员会。

采集所有受试者接受治疗前的鼻咽癌组织以及癌旁正常组织，采用4%的福尔马林实施固定处理，并以乙醇完成脱水。随后将标本进行石蜡包埋，通过石蜡切片机制成厚度为4 μm的连续切片。采用二甲苯脱蜡以及酒精脱水处理切片标本，同时浸泡于PBS液中5 min。予以高压抗原修复3次后将其放置在室温下自然冷却，然后予以3%过氧化氢孵育，达到灭活内源性生物素以及过氧化物酶活性的目的。予以PBS液重复冲洗3次，2 min/次，冲洗结束后添加正常山羊血清封闭，放置在室温内继续孵育10 min。分别加入鼠抗人P53单克隆抗体以及兔抗人EGFR单克隆抗体，并置于4 ℃条件下冷藏过夜。待恢复常温后继续滴加二抗于室温条件下孵育，在此予以PBS液重复冲洗3次，5 min/次。实施DAB显色，予以自来水重复冲洗3次，2 min/次，苏木精复染，无水乙醇梯度脱水，二甲苯透明，予以中性树胶封片晾干观察。

P53及EGFR均以细胞内发现棕黄色颗粒作为阳性，前者主要定位于细胞核，后者定位于细胞浆与细胞膜。判定标准主要是根据染色结果评分与阳性细胞占比评分进行最后评分，其中染色评分如下：无色即为0分；黄色即为1分；棕黄色即为2分；棕褐色即为3分。阳性细胞占比评分如下：无阳性细胞即为0分；阳性细胞占比低于10%即为1分；阳性细胞占比在11%～50%之间即为2分；阳性细胞占比在51%～80%之间即为3分；阳性细胞超过80%即为4分。以染色评分与阳性细胞占比评分的乘积作为最后结果，若乘积<6分即为阴性，≥6分即为阳性。

(1)比较鼻咽癌组织及癌旁正常组织中P53及EGFR蛋白表达情况；(2)分析鼻咽癌组织中P53及EGFR阳性表达与鼻咽癌患者的临床特点关系；(3)对所有患者进行为期3年的随访观察，比较不同生存状况患者P53及EGFR蛋白表达情况；(4)分析鼻咽癌患者P53及EGFR蛋白表达的相关性。

以SPSS 22.0软件进行统计学分析，计数资料以[(%)] 表示，进行连续性校正χ检验以及McNemar χ检验。采用Spearman相关性分析鼻咽癌患者P53及EGFR蛋白表达的相关性。检验水准：α=0.05。

2 结 果

鼻咽癌组织中P53蛋白阳性率低于癌旁正常组织，而EGFR蛋白阳性率高于癌旁正常组织(均<0.001)。见表1。

表1 不同组织中P53及EGFR蛋白表达情况对比[n(%)]

年龄≥60岁、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌患者的P53蛋白阳性率均低于年龄<60岁、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期患者；而年龄≥60岁、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移鼻咽癌患者的EGFR蛋白阳性率均高于年龄<60岁、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者(均<0.05)。见表2、表3。

表2 P53蛋白表达情况与鼻咽癌患者的临床特点关系分析[n(%)]

表3 EGFR蛋白表达情况与鼻咽癌患者的临床特点关系分析[n(%)]

鼻咽癌死亡组患者的P53蛋白阳性率低于存活组，而EGFR蛋白阳性率高于存活组(均<0.05)。见表4。

表4 鼻咽癌患者3年生存状况和P53、EGFR蛋白表达情况的关系分析[n(%)]

经Spearman相关性分析发现，鼻咽癌患者P53及EGFR蛋白表达呈负相关关系(=-0.622，<0.001)。

3 讨 论

随着近年来人们生活方式的不断改变以及生活环境的日益恶化，鼻咽癌的发病率正呈逐年升高趋势，由于鼻咽癌细胞增殖迅速且具有较高的转移风险，已成为严重威胁我国居民生命健康安全的重大疾病之一。放疗是目前临床广泛用以治疗鼻咽癌的有效手段之一，但鼻咽癌患者预后个体差异明显，即使临床以及病例特点基本相同的鼻咽癌患者，其生存状况亦会存在明显差异。近年来，病理学家致力于研究鼻咽癌发生、发展分子机制，发现EGFR以及P53作为常见的肿瘤相关基因，可能和鼻咽癌的发生、发展密切相关。

本文研究发现，鼻咽癌组织中P53蛋白阳性率低于癌旁正常组织，而EGFR蛋白阳性率高于癌旁正常组织。这和欧阳清等人的研究报道相符：其在报道中指出，P53蛋白在鼻咽癌组织中阳性表达率较低，而EGFR蛋白阳性表达率较高。因此结合本研究的结果也充分提示了在临床工作中通过对上述两项蛋白表达情况进行检测，可能有助于鼻咽癌的临床诊断。分析原因，P53属于抑癌基因之一，其抑癌作用机制主要是通过阻止G1/G0期，促使细胞分裂无法进入DNA合成期，进一步对细胞的增生起到抑制作用，继而激活转录抑制细胞增生的基因。一旦P53基因表达下降，会导致其调控细胞周期以及监视细胞生长的作用丧失，继而引发染色体畸变或/和基因突变，最终引发肿瘤。EGFR主要是由EGFR基因所编码的一种跨膜蛋白受体，可通过和表皮生长因子结合，继而磷酸化胞内酪氨酸激酶，促进一系列信号传导通路的激活，继而促进细胞增殖、分化以及转移，发挥促癌作用。此外，本研究还提示了P53、EGFR蛋白表达和鼻咽癌患者的年龄、病情严重程度以及淋巴结转移密切相关，但和患者性别、BMI无关。究其原因，正常细胞在遭受外界致癌作用时会引起P53功能的丧失，从而促使其对细胞周期正常调控作用丧失，引起细胞的无限增生，继而促进鼻咽癌的发展和转移。EGFR则可通过和多种细胞因子相结合，继而提高血管内皮生长因子诱导肿瘤血管的生成，从而达到促进肿瘤生长的作用。此外，P53、EGFR可共同作用在鼻咽黏膜上皮，继而影响鼻咽癌的进展、转移过程。另外，本研究还发现随着P53蛋白表达的下降以及EGFR蛋白的升高，鼻咽癌患者预后越差。其中主要原因可能是P53蛋白表达的下降以及EGFR蛋白的升高共同促进了鼻咽癌的进展、侵袭以及转移。这也充分说明了P53和EGFR的变化可以更好地帮助临床判断患者的病情状况及癌灶累及情况，并及时调整相应的治疗方案，从而有助于后续治疗的进行。经Spearman相关性分析发现，鼻咽癌患者P53及EGFR蛋白表达呈负相关关系，这提示了上述两项蛋白可能在鼻咽癌的发生、发展以及转移过程中发挥着相互作用，继而共同介导上述过程。需要指出的是性别也可能与P53和EGFR蛋白的阳性表达有关。但本文未发现类似的结论，原因考虑与本次研究的样本量相对较少有关，今后可扩大样本量或者邀请其他各级医疗机构进行更加科学的协同性研究分析。同时，为了更加科学地治疗鼻咽癌，临床可组建多学科联合治疗(MDT)团队开展综合诊治，视情况综合放疗科、耳鼻喉科、肿瘤科、影像科和病理科以及医务科等科室集思广益，尽可能以最佳的治疗为患者的预后提供坚实的保障。另外，P53联合EGFR蛋白诊断鼻咽癌的效能较高，考虑原因可能和两项蛋白联合检测具有一定的协同互补作用有关。

综上所述，P53在广西北部湾地区鼻咽癌患者中存在明显低表达，而EGFR存在明显高表达，临床工作中针对疑似鼻咽癌患者，可通过联合检测上述两项蛋白表达，继而为鼻咽癌的诊断提供参考依据，有助于治疗方案的制定，从而达到改善患者预后的目的。