儿童抗NMDAR脑炎免疫功能的变化

黄志新，孙小兰，陈辉，陈勇，钟建民

（江西省儿童医院神经内科，南昌 330006）

抗NMDAR脑炎是临床主要表现为精神行为异常、近事记忆力下降、癫痫发作、言语障碍、运动障碍、意识水平下降、自主神经功能障碍的最常见的自体免疫性脑炎。抗NMDAR脑炎不仅常见于患有卵巢畸胎瘤的青年女性，儿童患者亦不少见[1]。该病的发病与细胞膜表面NMDAR自身抗体形成有关，主要为机体产生了针对其受体组成部分的NR1亚基的特异性IgG抗体，而NR1亚基与学习、记忆和精神行为密切相关[2]。显而易见，免疫功能失调是该病发生的主要原因，机体免疫功能的维持与体液免疫、细胞免疫及其分泌的细胞因子密切相关，国内外有研究已证实B淋巴细胞、T淋巴细胞及其分泌的相关细胞因子与抗NMDAR脑炎的发病相关[3-5]。鉴于此，本文旨在通过检测抗NMDAR脑炎患儿外周血淋巴细胞亚群及相关细胞因子，初步探讨儿童抗NMDAR脑炎的发病机制，从而为临床诊断、治疗该病提供理论依据。

1 资料和方法

1.1 研究对象 收集2018年7月至2021年3月于江西省儿童医院诊断的抗NMDAR脑炎患儿20例作为病例组，且既往未患自身免疫性疾病及口服激素等免疫抑制剂病史。抗NMDAR脑炎诊断标准[6]：（1）临床主要表现为精神行为异常或认知损害、言语障碍、癫痫发作、运动障碍/不自主运动、意识水平下降、自主神经功能障碍或中枢性通气障碍；（2）抗NMDAR抗体阳性；（3）合理排除其他病因。选取同期儿保科正常体检儿童20例为健康对照组，入选儿童无自身免疫性疾病；无感染、手术、外伤、精神创伤、不适药物等病史。所有研究对象均在其父母知情同意的情况下参与本研究，并得到医学伦理委员会的批准。

1.2 方法 患儿及健康对照组抽血外周静脉血进行相关指标检测：应用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群数值（CD16+56，CD4+，CD8+，CD19+，CD4+/CD8+），仪器采用流式细胞仪（FACSCanto，美国BD公司），试剂盒由美国BD公司提供。应用化学发光法检测相关细胞因子（IL-6、IL-10、TNF-α）水平，仪器采用IMMULITE1000化学发光免疫分析仪（德国西门子公司），试剂盒均由德国西门子公司提供。

1.3 统计学分析 应用SPSSl9.0统计软件进行数据处理，计量资料以(±s)表示，两组独立样本均值比较用t检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 抗NMDAR脑炎患儿与健康对照组外周血淋巴细胞亚群水平及比较 两组CD16+56、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平无统计学差异；抗NMDAR脑炎患儿CD19+水平高于健康对照组，统计学有显著差异（P=0.00）。见表1。

表1 病例组与健康对照组淋巴细胞亚群的水平及比较(±s)

表1 病例组与健康对照组淋巴细胞亚群的水平及比较(±s)

组别 CD16+56(%)CD4+(%) CD4+/CD8+病例组健康对照组t值P值14.9±5.1 16.7±5.1 1.090 0.283 32.8±4.1 32.7±5.0-0.065 0.948 CD8+(%)21.6±3.5 23.8±3.2 1.996 0.053 CD19+(%)24.0±2.9 12.6±2.9-12.464 0.00 1.59±0.33 1.45±0.32-1.277 0.209

2.2 抗NMDAR脑炎患儿与健康对照组细胞因子的数值与比较 抗NMDAR脑炎患儿IL-6、IL-10、TNF-α数值显著高于对照组，统计学有显著差异。见表2。

表2 病例组与健康对照组细胞因子的水平及比较(±s)

表2 病例组与健康对照组细胞因子的水平及比较(±s)

组别 IL-6(pg/mL) IL-10(pg/mL) TNF-α(pg/mL)病例组健康对照组t值P值6.0±7.0 1.7±1.2-2.638 0.016 5.3±2.1 3.6±2.3-2.499 0.017 14.4±6.7 4.4±2.3-6.338 0.000

3 讨论

免疫失衡是抗NMDAR脑炎发病的主要原因，机体免疫功能的维持主要依赖于淋巴细胞，淋巴细胞主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞。T淋巴细胞主要包括辅助性（CD4+）和抑制性（CD8+）T淋巴细胞，CD4+淋巴细胞及其分泌的细胞因子在机体的细胞免疫和体液免疫应答中发挥着重要作用，其功能亢进可至多种免疫性疾病的发生，CD8+淋巴细胞也称为细胞毒性T细胞，能抑制CD4+细胞活性，对体液免疫和细胞免疫起负相调节作用，对维持机体免疫耐受起重要作用。CD4+/CD8+细胞比值可反映机体免疫功能状态，比值增高提示免疫亢进，见于自身免疫性疾病；比值降低则提示免疫功能下降。B（CD19+）淋巴细胞在CD4+淋巴细胞辅助下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫应答。NK（CD16+56）细胞作为机体非特异性免疫应答的主要组成部分，不仅参与抗肿瘤、抗病毒和免疫调节，而且在某些情况下参与自身免疫性疾病的发生。我们的统计结果表明病例组与对照组CD16+56，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+淋巴细胞的水平无显著差异，我们推测可能与我们所选取病例处于疾病的早期，临床症状比较轻微，免疫功能紊乱尚不严重有关，在疾病的不同时期监测该些淋巴细胞水平有助于证实我们的推测。病例组CD19+淋巴细胞水平明显高于对照组，存在统计学差异，表明B淋巴细胞在抗NMDAR脑炎的发病中具有重要作用，其通过分泌特异性的抗体介导疾病的发生，鉴于此，二线免疫治疗药物利妥昔单抗主要是清除外周B淋巴细胞从而达到治疗该病的作用。

IL-6主要产生于树突状细胞、T细胞和内皮细胞，对B淋巴细胞的增殖分化具有重要作用，能促进B细胞增殖分化为浆细胞和产生抗体。IL-6在机体的免疫系统中发挥着重要的作用，作为一种重要的促炎症细胞因子，在宿主抵抗病原发挥重要角色，然而IL-6的过度表达可导致多种免疫炎症性疾病的发生[7]。Wang等[8]动物研究发现，IL-6等细胞因子介导的神经炎症恶化了抗NMDAR脑炎小鼠的记忆缺失，参与了疾病的发生，并推测针对细胞因子的抗炎治疗作为一种潜在的治疗手段。Kavitha等[9]的研究也表明IL-6,TNF-α,IL-10,CXCL13,CXCL10等细胞因子作为大脑鞘内炎症的标志，参与了疾病的发生，并且部分细胞因子水平与疾病的预后相关。与诸上学者的研究结果类似，我们的结果显示，病例组IL-6水平显著高于健康对照组，进一步证实IL-6参与了疾病的发生，促进了抗NMDAR脑炎特异性抗体的产生。鉴于IL-6在抗NMDAR脑炎发病中的重要作用，IL-6拮抗剂如托珠单抗已被应用于临床一二线免疫治疗效果不佳的患者，并且取得了一定的治疗效果[10]。

IL-10也称为人类细胞因子合成抑制因子，产生于单核-巨噬细胞、B细胞和T细胞，能有效的抑制巨噬细胞、T细胞和抗原提呈细胞的功能，抑制促-炎症细胞因子的产生，在维持机体免疫耐受方面具有重要的作用。Kavitha等[9]及Takanori等[11]的研究发现，抗NMDAR脑炎患者的IL-10水平均有不同程度的增高，这与我们的研究结果相一致，即病例组明显高于健康对照组，证实IL-10参与了该病的发生。但这种结果与其免疫抑制功能相违背，我们推测可能与IL-10在重症肌无力的发病机制相类似，是通过促进B细胞增殖分化和抗体的产生而发挥作用[12]，因此虽然IL-10是抑制炎症反应的细胞因子，但在某些疾病中仍发挥着促炎症反应的作用。

TNF-α主要产生于单核-巨噬细胞、T细胞和NK细胞，具有促进局部炎症反应，杀伤或抑制肿瘤和激活内皮细胞的作用，其作为辅助性T细胞的主要效应因子，能诱导粘附分子、趋化因子和其它细胞因子的表达，介导多种免疫性疾病的发生。迄今为止，已有大量的研究表明TNF-α在抗NMDAR脑炎的发病中具有重要作用，表现为患者的脑脊液中TNF-α不同程度的增高[8-9,11]。我们的研究结果也表明，抗NMDAR脑炎患儿的TNF-α水平明显高于健康对照组，从而为探索针对TNF-α的特异性免疫治疗提供理论依据，进一步为临床治疗该病提供新的方法。

综上所述，我们的研究结果表明抗NMDAR脑炎患儿存在免疫功能紊乱，表现为CD19+淋巴细胞、IL-6、IL-10，TNF-α水平明显增高，为临床探索新的免疫治疗方法提供理论依据。