宝安地区亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与妊娠早期 甲状腺功能紊乱的相关性研究

孟伟伟，卢小娟，廖水新

（深圳市宝安区石岩人民医院检验科，广东深圳 518108）

甲状腺激素是调节人体代谢功能的一种内分泌激素，能够直接参与机体代谢和相关生理活动，还可促进胎儿发育[1]。然而，妊娠早期孕妇因受体内性激素波动及自身免疫相关影响，体内甲状腺功能有可能出现紊乱，严重时可导致高血压、糖尿病、流产等[2]。叶酸也是妊娠期孕妇所需的重要营养素，孕妇叶酸摄入不足会导致胎儿出现先天性心脏病、唇腭裂等缺陷，及先兆流产、早产等不良妊娠结局[3]。亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸代谢的关键酶，而MTHFR基因第677位点 C-T的突变可以降低 MTHFR 活性，导致叶酸代谢障碍。且有研究证实MTHFR基因多态性可影响妊娠期孕妇体内糖代谢，增加妊娠期糖尿病的风险[4]，而临床有关MTHFR基因多态性与妊娠女性早期甲状腺功能紊乱的发生报道较少。基于此，本研究探讨宝安地区妊娠早期甲状腺功能紊乱与MTHFR基因多态性的相关性，旨在为进一步探讨女性妊娠早期甲状腺功能紊乱危险因素提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2021年1月至2022年1月深圳市宝安区石岩人民医院收治的妊娠早期甲状腺功能紊乱的80 例孕妇为紊乱组，另选取同期院内检查甲状腺功能正常的60例孕妇为正常组作为研究对象进行回顾性分析。紊乱组孕妇年龄22～35岁，平均年龄（27.39±2.59）岁；孕周3～11周，平均孕周（7.59±1.96）周；初产妇50例，经产妇30例。正常组孕妇年龄23～35岁，平均年龄（27.59±2.24）岁；孕周3～11周，平均孕周（7.39±1.87）周；初产妇28例，经产妇32例。两组孕妇的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。本研究经深圳市宝安区石岩人民医院医学伦理委员会批准。诊断标准：紊乱组孕妇参照《妊娠和产后甲状腺疾病诊治指南（第2版）》[5]中妊娠早期甲状腺功能紊乱的诊断标准。纳入标准：①年龄22～35周岁，孕周＜12周；②均为单胎妊娠。排除标准：①妊娠前确诊为甲状腺功能紊乱者；②合并严重肝、肾、肺等疾病者；③合并妊娠期糖尿病者；④有不良孕产史者。

1.2 检测方法①检测孕妇甲状腺功能指标。抽取孕妇空腹静脉血5 mL，采用化学发光法检测血清游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）和促甲状腺激素（TSH）水平，试剂由罗氏集团提供。②MTHFR基因多态性检测[6]：对MTHFR基因多态性的 C677T位点进行检测。收集孕妇空腹静脉血2 mL，EDTA 抗凝，保存7 d内提取DNA。DNA浓度经测定在5～50 ng/μL为宜。PCR扩增：取50 μL DNA提取液置于1.5 mL离心管中，加入50 μL 外周血，吹打混匀后95 ℃加热5 min。加入200 μL无水乙醇，振荡至出现絮状的沉淀物后倒入吸附柱 CB3（奥地利格雷那公司）中，以 12000 r/min 离心30 s，吸附柱 CB3 再次放回原来的收集管中，以 12000 r/min 离心 2 min后，放置约 3 min，使吸附材料中的漂洗液得到彻底晾干。将吸附柱 CB3 放入 1.5 mL 离心管中，室温下放置 5 min，然后以12000 r/min 离心 2 min，将溶液全部收集到离心管中，留取上清液备用。每个反应体系总体积25 μL，包含浓度为10～100 ng/μL 的DNA模板2 μL，PCR反应液22 μL，反应酶1 μL。反应条件为50 ℃ 2 min，95 ℃3 min，随后进行10个循环的扩增（95 ℃ 10 s，56 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s），再进行35个循环的扩增（95 ℃ 10 s，56 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s）。反应结束后在荧光定量PCR仪（上海博奥派克生物科技有限公司，型号：ABI7500型）上读取样品孔中的终点荧光，利用分析软件确定各个样本的基因分型结果。基因频率= 基因型数/ 检测总数×100%；基因型突变率=突变基因型人数/ 检测总数检测×100%。

1.3 观察指标①比较两组患者基本指标。包括妊娠史、妊娠前体质量指数（BMI）、贫血史。②比较两组孕妇MTHFR C677T基因型分布和等位基因频率。③比较两组孕妇甲状腺功能指标。包括FT3、FT4、TSH。④比较紊乱组不同基因型孕妇的甲状腺功能指标。⑤分析妊娠早期甲状腺功能紊乱发生的相关因素。

1.4 统计学分析采用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理，计量资料以（±s）表示，组间比较行独立样本t检验，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验；计数资料以[例(%)]表示，组间比较行χ2检验；多因素分析采用非条件Logistic逐步回归分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇基本指标比较两组孕妇妊娠史比较，差异无统计学意义（P＞0.05），紊乱组孕妇有贫血史、妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2患者占比明显高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组孕妇基本指标比较 [例(%)]

2.2 两组孕妇MTHFR C677T基因型分布和等位基因频率比较紊乱组孕妇MTHFR基因C677T位点C等位基因频率占比明显低于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；紊乱组孕妇MTHFR基因C677T位点TT、TC基因型频率占比明显高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组孕妇MTHFR C677T基因型分布和等位基因频率比较 [例(%)]

2.3 两组孕妇甲状腺功能指标比较紊乱组孕妇TSH水平明显高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组孕妇FT3、FT4水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 两组孕妇甲状腺功能指标比较（±s）

表3 两组孕妇甲状腺功能指标比较（±s）

注：FT3：游离三碘甲腺原氨酸；FT4：游离甲状腺素；TSH：促甲状腺激素。

组别 例数 FT3(pmol/L) FT4(pmol/L) TSH(mIU/L)紊乱组 80 13.21±2.34 8.49±2.46 3.05±1.22正常组 60 12.62±2.39 8.56±2.12 1.77±0.52 t值 1.463 1.463 7.619 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.4 紊乱组不同基因型孕妇的甲状腺功能指标比较紊乱组TT基因型、CT基因型孕妇TSH水平高于CC基因型孕妇，差异有统计学意义（P＜0.05）；不同基因型孕妇FT3、FT4水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。

表4 紊乱组不同基因型孕妇的甲状腺指标比较（±s）

表4 紊乱组不同基因型孕妇的甲状腺指标比较（±s）

注：FT3：游离三碘甲腺原氨酸；FT4：游离甲状腺素；TSH：促甲状腺激素。

基因型 例数 FT3(pmol/L) FT4(pmol/L) TSH(mIU/L)TT 29 4.62±0.78 8.36±1.23 3.67±0.42 CT 34 4.87±0.63 7.76±1.35 3.21±0.40 CC 17 5.02±0.81 8.46±1.43 2.37±0.45 F值 1.818 2.289 51.834 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.5 妊娠早期甲状腺功能紊乱发生的多因素Logistic分析以妊娠早期甲状腺功能紊乱发生作为因变量，将以上差异有统计学意义（孕前BMI、贫血史、MTHFR基因C677T位点基因型）作为自变量，并对其进行赋值，妊娠前BMI（18.5～24.0 kg/m2＝0，＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2＝1）、贫血史（无＝0，有＝1）、MTHFR基因C677T位点基因型（CC＝0，TT、TC＝1）。经多因素Logistic回归分析证实，妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2、有贫血史、MTHFR基因C677T位点是影响妊娠早期甲状腺功能紊乱发生的危险因素（P＜0.05），见表5。

表5 妊娠早期甲状腺功能紊乱发生的多因素Logistic分析

3 讨论

甲状腺功能紊乱为妊娠早期常见的并发症，可增加流产、早产、先兆子痫和甲状腺功能亢进危象的发生率，同时也会增加胎儿甲状腺功能减退、智力低下的发生风险。对妊娠早期甲状腺功能紊乱进行早期预测和干预，可能会降低其发生率[7]。路娜等[8]研究显示，MTHFR基因多态性与甲状腺疾病形成有关。而MTHFR是叶酸代谢的主要酶类，当其基因发生突变，会直接影响叶酸代谢过程中甲硫氨酸循环的过程。张菘等[9]研究发现，MTHFR基因677处C-T的突变是导致MTHFR的酶活性下降的主要原因。

本研究结果发现，紊乱组孕妇MTHFR基因C677T位点C等位基因频率占比及TT、TC基因型频率占比明显高于正常组；同时，本研究发现，紊乱组孕妇TSH水平明显高于正常组，CT及TT基因型孕妇TSH水平较CC基因型孕妇更高，而不同基因型孕妇FT3、FT4水平比较，差异无统计学意义。这提示妊娠早期甲状腺功能紊乱的孕妇MTHFR基因多态性分布与正常孕妇相比存在一定差异，TT基因型孕妇TSH水平整体偏高。此项结果虽然与过往研究存在一定差异，但也在一定程度上说明证实了该基因突变可能与导致甲状腺激素的异常存在一定关系。虽然过往有关研究中无专项针对MTHFR基因与甲状腺功能紊乱发病的研究，但结合吴云等[10]研究结果来看，叶酸、半胱氨酸异常都能造成甲状腺代谢异常，而MTHFR是叶酸代谢的主要酶类，因此，MTHFR基因突变造成的叶酸活性变化也可影响甲状腺功能[11]。

本研究证实，妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2、有贫血史、MTHFR基因C677T位点突变是影响妊娠早期甲状腺功能紊乱发生的危险因素。孕期相关激素分泌水平的变化及孕期对甲状腺激素需求增加等均是导致母体内分泌功能紊乱的主要因素，而母体BMI指标异常与有贫血史会直对自身激素分泌造成影响。但MTHFR基因突变直接对母体叶酸代谢活性产生影响，叶酸代谢与同型半胱氨酸代谢密切相关，叶酸代谢异常能引起同高半胱氨酸血症，而机体内长期处在高半胱氨酸水平，会使机体产生氧自由基、炎症因子，从而损伤孕妇免疫功能；而妊娠早期甲状腺功能紊乱的发病机制之一是自身免疫损伤，因此MTHFR基因突变在引起半胱氨酸血症的同时也可能引发甲状腺功能紊乱。

综上所述，MTHFR基因C677T位点多态性与妊娠早期甲状腺功能紊乱发生相关。因此，女性在备妊娠前可进行MTHFR基因C677T多态性检测以对妊娠早期甲状腺功能进行初步判断，妊娠后加强甲状腺功能监测并作对应处理。