ADPN、MCP-1、miRNA-103在老年反复发作性尿路感染患者中的表达及临床意义*

侯桂平，郑雪君，李润奇，崔 利，杜 玄，李 华，孙建宇

张家口市第二医院：1.检验科；2.骨外科；3.泌尿外科，河北张家口 075000

尿路感染属于一种较为常见的泌尿系统疾病，多见于老年人，尿路感染的发生与尿道内大量微生物繁殖相关，而反复发作性尿路感染的发生通常与首诊不及时、首诊疗程不足等因素相关，在治疗时较为棘手[1-2]。反复发作性尿路感染的发生与多种细胞因子表达异常相关，有研究发现，感染性疾病发生后，患者机体内会出现不同程度的炎性反应，脂联素(ADPN)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在临床上多用于感染性疾病的诊断，可明确反映患者机体炎性反应程度，有助于疾病的诊断[3]。有研究证实，尿路感染患者ADPN、MCP-1表达异常[4]，但二者是否参与此病的进展尚不明确。miRNA-103可通过参与调控炎症相关信号通路，诱发炎症，与感染性疾病相关[5]。因此，本研究分析ADPN、MCP-1、miRNA-103在反复发作性尿路感染的表达情况，并分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1月至2020年12月本院收治的112例首发老年尿路感染患者作为首发组，134例反复发作性尿路感染患者作为反复发作组，同期选取80例于本院体检的健康者作为对照组。首发组、反复发作组均符合《尿路感染诊断与治疗中国专家共识(2015版)》[6]《内科学》[7]中对尿路感染及感染程度的诊断标准，伴随发热、尿不尽、腰痛、小腹痛等症状，尿白细胞阳性、尿细菌培养阳性。反复发作组在6个月内发作≥2次或者1年内发作≥3次。排除标准：因尿路畸形、结石、恶性肿瘤等器质性疾病所致的尿路感染者；合并心、肝、肾等重要器官功能不全者；精神障碍、沟通障碍者；合并败血症等其他感染性疾病者。对照组无泌尿系统疾病史，身体健康。3组研究对象均自愿参与本研究，并签署知情同意书，本研究经本院伦理委员会审核批准。3组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。

表1 3组一般资料比较[n(%)或

1.2方法

1.2.1血清ADPN、MCP-1检测 采集在首发组、反复发作组患者入组后次日及对照组体检时清晨空腹静脉血3 mL，以离心半径5 cm、转速3 000 r/min离心处理10 min，分离上层血清，-80 ℃保存待检。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清ADPN、MCP-1表达水平。ADPN ELISA试剂盒(货号：SND-H851)由滁州仕诺达生物科技有限公司提供，MCP-1 ELISA试剂盒(货号：IB-E10079)由江西艾博因生物科技有限公司提供。

1.2.2外周血单个核细胞miRNA-103检测 采集首发组、反复发作组患者入组后次日及对照组体检时清晨空腹静脉血2 mL，分离外周血单个核细胞，采用实时荧光定量PCR法测定外周血单个核细胞miRNA-103表达水平。使用TRIzol试剂提取总RNA，同时使用Thermo NanoDrop2000超微量紫外分光光度计测定标本RNA浓度，A260/A280比值范围在1.8～2.0为纯度较好。将RNA逆转录为cDNA后行PCR，测定miRNA-103的相对表达水平。miR-103上游引物为5′-AGAGCCTGTGGTGTCCG-3′，下游引物为5′-CATCTTCAAAGCACTTCCCT-3′；内参β-Actin上游引物为5′-GCGAGAAGATGACCCACCACC-3′，下游引物为5′-ATGTCACGCACGATTTCCTATTA-3′。采用Veriti7500实时荧光定量PCR仪行PCR。反应体系：上、下游引物各0.2 μL，cDNA模板1.0 μL，SYBR Green 10.0 μL，加蒸馏水至20.0 μL。反应条件：95 ℃预变性30 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 31 s，共进行40个循环。采用2-ΔΔCt方法计算需要检测的miRNA-103相对表达水平，每组数据各测3次，取平均值。

1.2.3预后随访 对反复发作组在本院接受疾病针对性抗菌药物治疗结束后行为期6个月的预后随访，其中6个月内复发为预后不良，6个月内疾病控制良好无复发为预后良好，分析ADPN、MCP-1、miRNA-103在不同预后反复发作组患者中的表达差异。

1.3观察指标 (1)比较3组ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。(2)比较不同疾病严重程度反复发作组患者ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。轻度感染标准：临床症状较轻，偶有脓尿、气尿、血尿、细菌尿。中度感染标准：腰痛、尿急、尿频、尿不尽、尿痛等临床症状明显，伴有少量脓尿、气尿、血尿、细菌尿。重度感染标准：腰痛和尿痛严重，脓尿、气尿、血尿和细菌尿量多。(3)比较不同预后反复发作组患者ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。(4)分析ADPN、MCP-1、miRNA-103三者之间的相关性。

2 结 果

2.13组ADPN、MCP-1、miRNA-103表达水平比较 与对照组相比，首发组、反复发作组ADPN表达降低，MCP-1、miRNA-103表达升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与首发组相比，反复发作组ADPN表达降低，MCP-1、miRNA-103表达升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组ADPN、MCP-1、miRNA-103表达水平比较

2.2不同疾病严重程度反复发作组患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表达水平比较 反复发作组患者中，随着患者疾病严重程度加重，ADPN表达水平逐渐降低，MCP-1、miRNA-103表达水平逐渐升高，轻度、中度、重度感染反复发作组患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表达水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同疾病严重程度反复发作组患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表达水平比较

2.3不同预后反复发作组患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表达水平比较 与预后良好患者相比，预后不良患者ADPN表达水平降低，MCP-1、miRNA-103表达水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 不同预后反复发作组患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表达水平比较

2.4ADPN、MCP-1、miRNA-103的相关性分析 Pearson相关性分析显示，ADPN与MCP-1呈负相关(r=-0.543,P=0.001)，ADPN与miRNA-103呈负相关(r=-0.552,P=0.001)，MCP-1与miRNA-103呈正相关(r=0.649,P=0.001)。

2.5ADPN、MCP-1、miRNA-103对反复发作性尿路感染的诊断价值 ROC曲线显示，ADPN、MCP-1、miRNA-103三项联合对反复发作性尿路感染的诊断价值较高，AUC为0.907(95%CI：0.797～0.989，P<0.05)。见表5、图1。

表5 ADPN、MCP-1、miRNA-103对反复发作性尿路感染的诊断价值

图1 ADPN、MCP-1、miRNA-103诊断反复发作性尿路感染的ROC曲线

3 讨 论

在细菌感染性疾病中，以尿路感染最为常见。有研究认为，尿路感染为由病原微生物引起的尿路炎症性疾病，目前临床上多采用尿细菌培养作为尿路感染的重要标准，但该方法耗时较长，敏感性差，因此寻找诊断灵敏度高、方便快捷的检测指标对改善患者预后具有重要意义[8-9]。

尿路感染多伴随着局部炎性反应表现，ADPN属于一种由脂肪细胞特异性分泌的生物活性蛋白，其在炎性反应、血糖代谢异常、机体氧化应激反应及动脉粥样硬化过程中发挥重要作用[10]。有研究显示，在感染性疾病中，ADPN一方面抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)的合成和释放，另一方面促进树突状细胞、单核-巨噬细胞、单核细胞的抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)、IL-1R拮抗剂(IL-1RA)表达，修复内皮损伤，发挥抗炎作用[11-13]。MCP-1属于一种趋化因子，具有激活和趋化单核细胞等炎症细胞的作用，在机体处于正常状态下使其不表达或者表达较低，但在机体发生炎性反应时表达异常升高[14-15]。有研究发现，TNF-α、IFN-γ等细胞因子均会诱导MCP-1的表达，在多种感染性疾病中均发现了MCP-1的存在，其水平与机体炎性反应相关[16-17]。临床上关于ADPN、MCP-1与尿路感染的关系的研究较少。本研究结果显示，在反复发作性尿路感染中ADPN表达降低，MCP-1升高，且与患者疾病严重程度、预后密切相关。当机体受到外界病原菌侵袭后，ADPN、MCP-1可能经介导单核-巨噬细胞等炎症细胞合成分泌炎症相关因子，诱发机体局部的炎症级联反应，导致尿路感染的发生。本研究结果与楼一峰等[4]的研究结果一致。

miRNA属于一类大小约22 个核苷酸的非编码单链小分子，参与多个生理过程，包括细胞增殖、凋亡、器官发育形成等，近年来研究发现，miRNA在多种疾病中呈特异性表达，具有较高的特异性，属于一种潜在的新型生物标志物[18]。有研究发现，miRNA-103广泛存在于多种组织中，经过与靶基因3′非翻译区(3′-UTR)特异性结合，在转录水平上调控靶基因的表达，在感染性疾病中表达升高[19]。LI等[20]研究认为，miRNA-103可能经调控PI3K/AKT信号通路而介导机体炎性反应最终诱发骨关节炎的发生。有研究显示，前列腺增生症术后尿路感染患者miRNA-103表达升高，但并未明确其具体机制[21]。鉴于此，本研究分析miRNA-103与老年反复发作性尿路感染的关系，结果显示，老年反复发作性尿路感染患者的miRNA-103表达升高，且miRNA-103水平与患者疾病严重程度、预后密切相关。miRNA-103可能促进炎症因子的合成和分泌，介导炎性反应，参与反复发作性尿路感染的发生、发展。

本研究中，经ROC曲线分析发现，ADPN≥10.00 μg/mL、MCP-1≥65.98 pg/mL、miRNA-103≥0.82的老年患者更容易发生反复发作性尿路感染。另外，本研究结果显示，ADPN与MCP-1呈负相关(r=-0.543,P=0.001)，ADPN与miRNA-103呈负相关(r=-0.552,P=0.001)，MCP-1与miRNA-103呈正相关(r=0.649,P=0.001)。

综上所述，老年反复发作性尿路感染患者ADPN表达降低，MCP-1、miRNA-103表达升高，且ADPN、MCP-1、miRNA-103水平与患者疾病严重程度、预后关系密切，三者联合检测对反复发作性尿路感染有较高的诊断价值。