BCL-2 在非肌层浸润性膀胱癌组织中的表达

杨晶

膀胱癌是发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤，是十大常见恶性肿瘤之一，发病率居全球恶性肿瘤第11 位，好发于男性。尽管通过医疗干预及不良生活习惯纠正后，膀胱癌的发生率及致死率显著降低，但膀胱癌术后的复发率极高[1]。非肌层浸润性（表浅性）膀胱癌（NMIBC）在膀胱癌中比较常见，主要依赖膀胱镜检查和活检确诊。肿瘤的侵袭和转移是NMIBC的首要致死因素，而长期膀胱镜检查会造成患者膀胱负荷，且花费高昂，因此寻求高效、灵敏的预测指标判断病情及预后，对于临床有重要的意义[2]。B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）可以通过改变线粒体外膜通透性调控细胞凋亡，其在卵巢癌、胃癌等恶性肿瘤中异常表达[3-4]。本研究采用免疫组化法检测BCL-2 在NMIBC 癌组织及癌旁正常组织中的表达，分析其表达与临床病理、预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2012 年6月至2015 年6 月期间行病理检测的NMIBC 患者55 例，其中男44 例，女11例；年龄39～78 岁，平均（59.2±7.5）岁；肿瘤大小：≥3 cm 14 例，＜3 cm 41 例；肿瘤数量：单个肿瘤36例，多肿瘤19例；有淋巴结转移18 例，无转移37 例；肿瘤分级：G1 级4 例，G2 级35 例，G3 级16例。取癌组织切片及相应癌旁组织（距癌＜3 cm）切片各55 例，癌组织切片经病理检测为NMIBC T1 期，癌旁组织切片病理检测为正常组织。

纳入标准：经尿道膀胱肿瘤切除术后病理检测确诊为NMIBC，符合国际抗癌联盟TNM 分期中T1 期病理特征[5]，年龄35～80 岁，临床资料完整。排除标准：合并其他恶性肿瘤，重要器官功能障碍，自身免疫系统疾病，有既往放化疗史及其他治疗史，妊娠、哺乳期妇女。

1.2 BCL-2 检测 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法（SP）检测NMIBC 癌组织及癌旁正常组织中BCL-2 的表达。操作过程：组织石蜡切片经烤片后滴加二甲苯脱蜡，并用酒精梯度脱水；将切片置于中性柠檬酸缓冲液中，高温高压条件下修复抗原，PBS冲洗3 次；H2O2孵育5 min，阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗3 次；滴加单克隆 BCL-2 抗体（美国 Abcam，ab332124，1∶100），室温下孵育1 h，PBS 冲洗3 次；滴加IgG 抗体-HRD 多聚体，室温下孵育15 min，PBS 冲洗3次；采用DAB 试剂盒（深圳子科生物科技有限公司，BA435-368）显色，显色程度达到后自来水冲洗终止反应；苏木素复染，自来水冲洗至返蓝；酒精梯度脱水后干燥，用二甲苯透明后封片，于显微镜（×400）下观察。

BCL-2 在NMIBC 癌组织及癌旁正常组织中定位于胞浆或胞膜，染色呈棕黄色颗粒。显微镜下随机选取5 个视野观察，每个视野计数300 个细胞，根据染色情况计算阳性细胞百分率，阳性细胞百分率≥10%判定为阳性表达，＜10%为阴性，阳性细胞百分率=阳性细胞数/总细胞数×100%[6]，由两名资深病理医师独立阅片，并共同商议出最终结果。

1.3 随访 所有患者随访至2018 年6月，以门诊方式进行，作膀胱镜检查并记录患者无进展生存期（PFS），PFS为患者出现肿瘤进展或因任何原因而死亡时间。随访频率：术后第1 年，1 次/月；术后第2年，1次/季；术后第3年，1次/半年。

1.4 统计方法 采用SPSS 19.0 统计软件进行分析，计数资料采用率（%）表示，行2检验；等级资料行Z 检验；采用Kaplan-Meier 法分析生存率，行Log-rank2检验；多因素分析采用Logistic 回归模型。P ＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中BCL-2 表达比较NMIBC 癌组织中BCL-2 阳性表达率为70.91%（39/55），显著高于癌旁正常组织14.55%（8/55），差异有统计学意义（2=35.701，P ＜0.05）。

2.2 BCL-2 表达与NMIBC临床病理特征的关系 BCL-2 的阳性组淋巴结发生转移率、高级别肿瘤分级占比均高于BCL-2 阴性组（均P ＜0.05）；两组肿瘤大小及病灶数差异均无统计学意义（均P ＞0.05），见表1。

表1 BCL-2 表达与NMIBC 临床病理特征的关系 例

2.3 BCL-2 表达与NMIBC患者PFS的关系 随访36 个月，55 例NMIBC患者中有18 例发生复发或转移或死亡（疾病进展）。BCL-2 阳性表达的NMIBC 患者3 年无进展生存率为58.97%，显著低于BCL-2 阴性表达的87.50%（Logrank2=4.172，P ＜0.05），见图1。

图1 BCL-2 表达与NMIBC患者PFS的关系

2.4 影响NMIBC患者疾病进展的单因素分析 不同淋巴结转移、肿瘤分级及BCL-2 表达的NMIBC 患者进展差异有统计学意义（均P＜0.05）；而不同年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤数目的NMIBC患者疾病进展差异均有统计学意义（均P＞0.05），见表2。

表2 影响NMIBC 患者疾病进展的单因素分析例

2.5 影响NMIBC患者疾病进展的多因素分析 淋巴结转移情况和BCL-2 阳性表达为NMIBC 患者疾病进展的独立危险因素（均P ＜0.05），见表3。

表3 影响NMIBC 患者疾病进展的多因素分析

3 讨论

NMIBC临床治疗治愈率极高，但其5 年复发率高达65%，易恶化为肌层浸润性膀胱癌[7]。临床上治疗肌层浸润性膀胱癌主要行膀胱切除术，但手术创伤大，严重影响患者生活质量[8]，因此，寻找早期指标监测肿瘤进展，对于治疗方案的制定有重要意义。临床常以肿瘤大小、数目、分级、TNM分期、是否发生淋巴结转移等作为预测NMIBC进展的指标，但均不能准确判断肿瘤进展情况，且检测方法对膀胱组织有损伤，费用较高[9]。随着分子技术的成熟，许多分子标志物如：核基质蛋白-22、血管内皮生长因子等已用于预测膀胱癌的复发和进展，但仍存在敏感性、特异性较低的问题[10-11]。

BCL-2 是一种癌基因，可以抑制细胞的凋亡，其异常表达与肿瘤的发生、发展、侵袭及转移等过程密切相关，但BCL-2 与NMIBC 的研究较少。BCL-2可能通过调控自分泌细胞基质降解相关蛋白、上皮间质转化信号通路等促进肿瘤转移[12]。据报道BCL-2 在多种恶性肿瘤中异常表达，参与肿瘤的发生发展过程，但不同癌症中BCL-2 的表达具有一定的差异。弥漫大B 细胞淋巴瘤中BCL-2 阳性表达率为83.70%[13]，鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中BCL-2 阳性表达率为71.4%[14]。由于T1 期NMIBC 患者进展风险具有较大争议，故本研究收集的55例NMIBC 患者全处于T1 期。通过检测NMIBC 患者癌组织及相应癌旁正常组织中BCL-2 的表达，发现NMIBC 癌组织中BCL-2 阳性表达率为70.91%，显著高于癌旁正常组织，这表明BCL-2 的表达与NMIBC 发生有关。

本研究通过分析BCL-2 的表达与NMIBC临床特征的关系发现，BCL-2 的阳性组淋巴结发生转移率、高级别肿瘤分级占比均高于BCL-2 阴性组（均P ＜0.05），这表明 BCL-2 的表达参与NMIBC 发展过程。PFS 常用来体现疾病的预后情况，本研究发现BCL-2 阳性表达的NMIBC 患者3 年PFS 率显著低于BCL-2 阴性表达患者，揭示BCL-2 阳性表达的NMIBC 患者预后较差。Logistic 回归分析结果表明，BCL-2 表达情况是NMIBC 进展的独立风险因素，提示BCL-2 表达可以判断NMIBC 进展，有一定的预测价值。

综上所述，BCL-2 可能参与NMIBC发生发展过程，可作为NMIBC 进展的潜在预测指标，有助于识别高复发风险NMIBC患者，为临床治疗及预后改良提供科学依据。