上皮性卵巢癌患者血清miR-362和miR-485的表达水平及其与预后的相关性研究

邓森灵，兰代群，曹雅文，符春丽，韩雪茹，苏红娥，闫志强

（海南西部中心医院妇产科，海南那大 571799）

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是妇科肿瘤中发病率较高的疾病之一，有不典型的早期症状，往往患者确诊时已处于晚期，造成患者的预后差和死亡率高[1]。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一类小分子RNA 片段，参与EOC 的发生发展，对EOC 的诊断和预后评估具有较大的潜力[2-3]。既往研究发现，妇科肿瘤中存在miR-362 及miR-485 异常表达，其在妇科肿瘤的诊断、预后和治疗等方面有极为重要的作用[4-5]。因此，本研究通过检测术前EOC 患者miR-362 及miR-485 表达情况，分析其预测EOC 患者预后的价值，旨在为EOC 的救治提供指导。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017年1月～2020年5月收治的98 例EOC 患者作为EOC 组，年龄35 ～76(56.48±11.25) 岁。纳入标准：EOC 诊断参考《卵巢恶性肿瘤诊断与治疗指南( 第四版)》[6]；排除标准：并发其他恶性肿瘤者，检测前接受过治疗。另选取正常女性50 例作为对照组，年龄34 ～75(55.92±10.73) 岁，EOC 组和对照组的性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经患者知情同意后进行。

1.2 仪器与试剂 ABI 7500 型荧光定量PCR 仪（ABI 公司），PCR 相关试剂盒购自Qiagen 公司，离心机为ABI 公司产品。

1.3 方法 采用前瞻性方法对98 例EOC 患者进行随访，截止时间2020年12月，记录患者的总生存率和无进展生存率。使用荧光定量PCR仪检测miR-362 及miR-485 水平。反应体系为20μl[1μl 引物及探针Mix（20×），10μl Taq Man 通用混合物溶液（2×），1.33μl 反向转录脱氧核糖核酸，7.67μl 双蒸馏水]。miR-362 及miR-485 水平采用2-△△Ct法计算。

1.4 统计学分析 采用SPSS22.0 软件分析，计量资料以均数± 标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料比较采用χ2检验。生存分析应用Kaplan-Meier 法，多因素分析应用COX 回归分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EOC 组和对照组血清miR-362 及miR-485表达水平比较 EOC 组血清miR-362（0.42±0.05）和 miR-485 表达水平（0.51±0.08）明显低于对照组（2.37±0.96，1.74±0.62），差异均有统计学意义（t=17.913，14.520，均P＜0.001）。

2.2 miR-362 及miR-485 诊断EOC 的价值 见图1。miR-362 诊断EOC 的最佳截断值为1.30，曲线下面积（AUC）为0.882（95%CI：0.819 ～0.944），其敏感度和特异度分别为89.6%，85.3%。miR-485 诊断EOC 的最佳截断值为1.05，AUC 为0.830（95%CI：0.772 ～0.892），其敏感度和特异度分别为83.4%，80.2%。miR-362 及miR-485 联合诊断EOC 的AUC 为0.914（95%CI：0.856 ～0.977），其敏感度和特异度分别为92.8%， 86.4%。

图1 miR-362 及miR-485 诊断EOC 的ROC 曲线

2.3 miR-362 及miR-485 表达与EOC 患者预后不良的关系 98 例EOC 患者随访时间为9 ～43 个月，中位随访时间为21.8 个月。生存分析显示，低miR-362 组（miR-362＜1.30）患者总生存率（33.8%）明显低于高miR-362 组（miR-362 ≥1.30）的总生存率（60.5%），低miR-362 组患者无进展生存率(19.3%)明显低于高miR-362 组的无进展生存率（41.6%），差异有统计学意义(χ2=14.518，11.284，均P＜0.001)。低miR-485 组（miR-485＜1.05）患者总生存率（38.0%）明显低于高miR-485 组（miR-485 ≥1.05）的总生存率（62.7%），低miR-485 组患者无进展生存率（22.7%）明显低于高miR-485 组的无进展生存率（42.8%），差异均有统计学意义(χ2=12.610，9.815，均P＜0.001)。

2.4 影响EOC 患者预后不良的危险因素 见表1。多因素COX 回归分析显示，临床分期、淋巴结转移、腹膜转移、miR-362 ＜1.30 及miR-485 ＜1.05 是影响EOC 患者预后不良的独立危险因素（均P＜0.05）。

3 讨论

EOC 是常见的女性妇科癌症，对EOC 进行早期诊断有助于患者得到及时治疗。miRNA 是一类较为常见的非编码RNA，可通过调控EOC 细胞迁移、侵袭及增殖，在EOC 发生中起到关键作用[7-8]。YANG 等[9]研究发现，miR-362-3p 在宫颈癌中异常低表达，对宫颈癌细胞的迁移和侵袭有抑制作用，在宫颈癌发展及治疗中发挥重要作用。另有研究指出，miR-485-5p 在宫颈癌组织较邻近正常组织明显降低，可抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移，在宫颈癌靶向治疗中具有巨大的潜能[10]。

本研究显示，与对照组比较，miR-362 及miR-485 在EOC 组中明显下调，提示miR-362 及miR-485 在EOC 中呈低表达，其高表达可能会抑制EOC的进展。YUAN 等[11]研究发现，在EOC 组织和细胞中miR-362 表达降低，其低表达在EOC 进展中发挥作用，可为EOC 的靶向治疗带来新的前景。YANG 等[12]研究认为，miR-485-5p 在卵巢癌组织中呈低表达，与细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡有关，检测miR-485-5p 表达情况，有助于了解EOC 的发病机制及指导临床的诊疗。

表1 影响EOC 患者预后不良的单因素及多因素COX 回归分析

应用ROC 曲线分析显示，miR-362 及miR-485诊断EOC 的最佳截断值分别为1.30 和1.05，并对EOC 患者的miR-362 及miR-485 高表达组和低表达组进行比较，发现miR-362 低表达组和miR-485低表达组患者总生存率和无进展生存率较高表达组显著下降。此外，多因素COX 回归分析显示，临床分期、淋巴结转移、腹膜转移、miR-362 ＜1.30及miR-485 ＜1.05 是影响EOC 患者预后不良的独立危险因素。CAO 等[13]研究显示，卵巢癌组织及细胞中miR-362 表达下调，miR-362 通过抑制细胞增殖和迁移，进而抑制卵巢癌的进展和转移，有望作为卵巢癌诊断和治疗的潜在标志物。既往研究认为， miRNA 在EOC 组织较癌旁正常组织表达降低，且miRNA 的低表达与淋巴结转移及临床分期增加有关，对EOC 患者预后不良具有极大的影响[14]。另有研究证实，有些miRNA 的低表达与EOC 患者病情恶化及预后不良有关联，检测miRNA 对EOC患者预后评估及指导治疗有很好的帮助[15]。

综上所述，血清miR-362 及miR-485 表达水平在EOC 中明显下调，其低表达与EOC 患者预后不良有关，有望作为EOC 预后评估的有效指标。