基蛋Getein 1600干式免疫荧光法检测降钙素原的性能验证

余锦旗 何伟 林倩倩 陈颖婷 欧财文 宋丽婷

1广州中医药大学第二附属医院检验医学部，广州 510120；2广州中医药大学第二附属医院皮肤科，广州 510120；3 广州医科大学附属中医医院同德分院急诊科，广州 510130

通信作者：欧财文，Email：ervin_163@163.com

降钙素原（procalcitonin，PCT）由神经内分泌细胞表达，经酶切分解为（未成熟）降钙素、羧基端肽和氨基端肽。健康人中PCT 含量很低，受细菌感染后明显升高。PCT 的检测在各临床实验室已经普遍开展。按照ISO 15189《医学实验室质量和能力认可准则》和《医疗机构临床试验室管理方法》的要求［1-2］，临床实验室所开展的项目应当进行分析并作出相应评价。本研究参考《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》（WS/T 420-2013）［3］，设计试验，对基蛋Getein 1600 测定PCT 进行相关的性能验证，为临床提供可靠的依据，现报道如下。

材料与方法

1、材料

1.1、仪器与试剂 南京新产业基蛋Getein 1600 荧光免疫定量分析仪（以下简称“基蛋1600”）、配套PCT试剂、原装高低质控品；德国罗氏诊断公司e602 电化学发光检测系统（以下简称“罗氏e602”）、配套PCT试剂。

1.2、样本 选取广州中医药大学第二附属医院检验科2019年8月检验后的34例无脂血、无黄疸、无溶血的肝素锂抗凝标本，离心后取血浆检测。

2、方法

2.1、精密度验证 参考 WS/T 420-2013［3］，根据基蛋1600 配套PCT 试剂说明书，选取正常值和病理值2 个浓度水平标本，每个水平每天检测1批，每批重复检测3次，一共连续检测5 d。计算重复标准差Sr、期间标准差Sl，分别与厂家声称值σr和σl作比较。若Sr≤σr且Sl≤σl，则验证厂家声称的精密度可靠；若Sr>σr或Sl>σl，可能存在无统计学意义的差异，需进一步验证。

2.2、正确度评价 厂家声称可溯源至罗氏全自动化学发光分析仪及配套试剂盒（电化学发光法）。参考WS/T 420-2013［3］，选取30例浓度均匀分布在测量区间的标本，于基蛋1600 和罗氏e602 同时检测。计算每个标本测量结果在两个方法间的相对偏移brel和两个方法间的相对偏移¯brel，并以为brel纵轴，罗氏e602 检测结果为横轴作偏移图。若偏移图中brel分布基本均匀，且¯brel≤20%，则正确度评价通过；若偏移图中brel分布不均匀，考虑进行多节段的¯brel以进一步比较。

2.3、线性范围验证 参考WS/T 420-2013［3］，选择高值和低值标本浓度各1份，选择高值标本（H）浓度的要求尽量接近线性范围的上限，同时要求低值标本（L）浓度的要求尽量接近线性范围的下限。按照5 L、4 L+1 H、3 L+2 H、2 L+3 H、1 L+4 H、5 H（分别对应的稀释度为1、2、3、4、5、6）的比例关系配置系列评价样品，每份样品连续测定3 次。以稀释度为横轴，每个稀释度的测量均值为纵轴，求出线性回归方程y=b0+b1x 和相关系数R2，如果R2大于等于厂家声称的0.980则验证通过。

结 果

1、精密度验证

基蛋1600 PCT 检测系统的正常值浓度Sr为0.01、Sl为0.01，病理值浓度Sr为0.59、Sl为0.57。结果均小于厂家声称值，见表1所示。

表1 基蛋1600精密度验证结果

2、正确度评价

基蛋1600 与罗氏e602 PCT 检测结果偏移图见图1，偏移分布基本均匀。¯brel为19.01%，小于厂家声称的20%。

图1 基蛋1600与比较方法检测偏移

3、线性范围验证

以稀释度为横轴，每个稀释度的测量均值为纵轴，在0.10～36.81 μg/L内，线性回归方程为Y=7.390 8 X-7.072 7，R2=0.997 9，线性回归方程可见图2。R2大于厂家声称的0.980，线性范围与说明书接近，验证通过。

图2 基蛋1600线性回归分析

讨 论

PCT是可靠的感染性指标之一。细菌性感染时，PCT升高且与炎性反应的严重程度有关，病毒性感染时PCT 不升高或轻度升高［4-5］。目前PCT 检测方法主要有酶联免疫法、胶体金法、免疫荧光法、化学发光法、放免法等［6］。本次所验证的PCT 试剂盒为干式免疫荧光法。干式免疫荧光法既有定量测定，又有快速测定的特点，但目前自动化程度不高，较适合标本量少或者基层单位，也适用于急诊标本［7］。

按照《医学实验室质量和能力认可准则》和《医疗机构临床试验室管理方法》的要求，临床实验室所用的检验方法应保证检验结果的可靠性，对试剂盒分析性能应进行验证。美国临床和实验室标准协会系列文件对试剂盒分析性能的要求较为全面［8-9］，但须消耗大量人力物力。对本次验证参考WS/T 420-2013［3］对基蛋1600检测PCT进行性能验证，其精密度（Sr正常值0.01，病理值0.59；Sl正常值0.01，病理值0.57）、正确度（¯brel为19.01%）、线性（Y=7.390 8 X-7.072 7，R2=0.997 9）符合厂家说明书的声称。

综上所述，仪器基蛋1600 干式免疫荧光法检测PCT 的主要性能符合要求，可用于临床标本检测。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突