毛莲蒿原药粉与浸膏粉所含有效成分对比研究

旦增米吉，王佳俊，顿 珠*

(1.西藏藏医药大学，西藏 拉萨 850000；2.成都中医药大学 药学院，四川 成都 611137)

毛莲蒿(ArtemisiavestitaWall.ex Bess.)是菊科植物毛莲蒿的茎、叶，在藏族中又被称为普尔那，主要分布于我国的西藏、甘肃等海拔2 000～4 000 m的地区[1]。其味苦、辛，性寒，归肾经，具有清热解毒、消肿消炎、杀虫利湿等功效，在藏医临床中，被广泛用于治疗虫病、脑炎、皮肤病、温毒疔毒疮、咽喉病等症。现代研究显示，毛莲蒿化学成分主要有苯丙素类、萜类、黄酮类、甾体类等，具有免疫抑制、抗感染、抗肿瘤等多种药理活性[2-3]。中药浸膏粉是单味中药或组方经提取、分离、浓缩、干燥等工艺后所获得的产物，是制备中药丸剂、片剂等固体制剂的中间物料，由于其具有容易储存，运输、保质期长等优点，在国内药材加工市场上颇受欢迎。然而在临床治疗中浸膏粉是否能完全代替中药原药粉，临床治疗效果优劣与否尚未完全明确，是目前影响浸膏粉向临床推广的重要原因之一[4]。因此，应对中药浸膏粉及原药粉质量标准、临床疗效等多方面进行全面评价，并以此作为评估两种药材中间物料的质量差异情况[5]。本文对比分析毛莲蒿浸膏粉与原药粉，以绿原酸、东莨菪内脂、异嗪皮啶为主要指标成分，探究其主要有效成分含量与稳定性，具体报道如下。

1 材料与仪器

1.1 实验材料

毛莲蒿浸膏粉和原药粉(西藏藏医药大学自制)。毛莲蒿浸膏粉制作具体方法为：称取一定量毛莲蒿生药材，加入10倍量纯净水，浸泡30 min。将其放置于调温电炉上加热，待其沸腾后调整为微沸，煎煮6 h后用6层200目纱布过滤；加入8倍量纯净水至滤渣再煎煮8 h，用同一纱布过滤，将滤液合并后转移至旋转蒸发仪，60 ℃浓缩至稠膏，再继续晾干使水分蒸发完，通过打粉机打成细粉即得浸膏干粉。毛莲蒿原药粉制作方法为：将一定量毛莲蒿生药材通过打粉机打成细粉，过200目筛即得。选择绿原酸对照品(成都曼思特公司，批号：MUST-21030304，纯度99.73%)、东莨菪内脂对照品(成都曼思特公司，批号：MUST-21032415，纯度99.44%)、异嗪皮啶对照品(成都曼思特公司，批号MUST-20070710，纯度99.50%)。甲醇和乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

1.2 实验仪器

本研究所需的仪器主要有：LC-20高效液相色谱系统(日本岛津公司)；ME155DU十万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；KQ-500DE超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；BF-10小型高速粉碎机(河北本辰科技有限公司)。

2 方法

2.1 色谱条件

安捷伦SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)以0.8 mL/min的流速进行梯度洗脱，具体梯度：0～10 min，10%～20%A；10～15 min，20%～25%A；15～25 min，25%～35%A；25～45 min，35%～45%A，45～60 min，45%～10%A；检测波长330 nm，柱温为20 ℃，进样量为20 μL。

2.2 供试品溶液制备

取样品2 g，精密称定，加75%甲醇50 mL，超声1 h，放冷后再次称定质量，用甲醇补足减失的质量。补足质量后摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm滤膜过滤，即得。

2.3 标准品溶液配制

称取东莨菪内脂9.22 mg、异嗪皮啶12.62 mg、绿原酸13.17 mg至25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得混合标准品溶液，各成分浓度为：东莨菪内脂0.367 mg/mL、异嗪皮啶0.502 mg/mL、绿原酸0.525 mg/mL。

2.4 线性关系考察

精密吸取上述混合标准品溶液1 mL、1.5 mL、2 mL、2.5 mL、5 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成5个等级(S1～5)不同浓度的混合标准品溶液，进样20 μL进行测定，绘制标准曲线。

2.5 开展精密度实验

取混合标准品溶液(S5)连续进样6次，测定RSD。

2.6 稳定性试验

取混合标准品溶液(S5)，在0、3、6、9、12、24 h各进样1次，测定峰面积，计算各标准品的RSD。

2.7 重复性试验

取原药材粉末样品6份，按照前处理方法制备供试品溶液，进行测定并计算RSD。

2.8 回收率试验

采用加样回收法，精密称取原药材粉末样品6份，加入混合标准品溶液10 mL，按照前处理方法制备供试品溶液，进行测定，记录色谱图并计算各标准品的回收率及RSD。

2.9 数据处理

3 结果

3.1 线性关系考察结果

绿原酸、东莨菪内脂、异嗪皮啶标准品的回归方程、线性范围以及相关系数如表1所示。

表1 绿原酸、东莨菪内脂、异嗪皮啶标准曲线制作情况

3.2 精密度、稳定性、重复性及回收率结果分析

3.2.1 精密度 对混合标准品S5的6次进样进行分析计算，得绿原酸峰面积的RSD为0.182%(n=6)、东莨菪内脂峰面积的RSD为0.077%(n=6)、异嗪皮啶峰面积RSD为0.150%(n=6)，说明仪器精密度良好。

3.2.2 稳定性 在6次不同时段的混合标准品溶液测定中计算得绿原酸峰面积的RSD为0.123%(n=6)、东莨菪内脂峰面积的RSD为0.084%(n=6)、异嗪皮啶峰面积RSD为0.063%(n=6)，表明混标溶液在24h内稳定性良好。

3.2.3 重复性 对6份由毛莲蒿原药材粉末样品制成的供试品溶液进行测定，测得绿原酸、东莨菪内脂和异嗪皮啶的平均含量(n=6)分别为0.424%、0.102%和0.413%，RSD分别为0.082%、1.047%和0.240%。表明本方法重复性良好。

3.2.4 回收率 采用加样回收法，经试验和计算得出绿原酸、东莨菪内脂和异嗪皮啶的平均回收率(n=6)分别为98.96%、97.01%和105.51%，RSD分别为0.27%、2.07%和0.96%。表明该方法可行，具体如表2。

表2 3种成分的回收率试验结果 (n=6)

3.3 毛莲蒿浸膏粉和原药粉的3种成分含量对比

通过计算可以发现，毛莲蒿浸膏粉中的绿原酸含量与原药粉中无明显差异；相比与原药粉，毛莲蒿浸膏粉中的东莨菪内脂含量明显更高，而原药粉中的异嗪皮啶含量则显著高于浸膏粉(P<0.05)。具体如表3所示。

表3 样品测定结果 (n=3)

4 讨论

近年来，中医药因疗效显著、不良反应较少等优势逐渐被医学界认可，开始广泛应用于临床多种疾病的治疗中。中药材的粉末形式常被用作制备各种中药剂型的中间物料。除药材直接打粉外，由中药浸膏制备干粉是近年新兴的一种制粉方式，浸膏粉是指中药材经过提取后的浸膏，通过微波、红外、箱式等干燥手段干燥后所得的物料，是在传统中药浸膏的基础上开展而来[6]。与原药粉相比，浸膏粉多出了提取、浓缩、蒸发等制备过程，然而浸膏干粉在制作过程中是否会影响其原本的有效成分，从而降低临床疗效尚不得而知。而我国关于中药浸膏干粉和原药粉的有效成分研究尚不多见。基于此，本文以藏药毛莲蒿为例，对比毛莲蒿浸膏干粉和原药粉中绿原酸、东莨菪内脂、异嗪皮啶含量，结果发现：绿原酸含量在原药粉与浸膏粉中无明显差异；浸膏粉中东莨菪内脂含量显著高于原药粉；在原药粉中异嗪皮啶含量显著高于浸膏粉，提示浸膏粉与原药粉中的有效成分含量存在差异，这或许与特定的药效成分有关，在用于制备中药中间物料时，不能将原药粉与浸膏粉等同视之。由于不同中药浸膏制备工艺不同、有效成分不等同于临床疗效等诸多因素，关于浸膏粉与原药粉的有效成分含量的异同尚需要进一步研究。